霉菌毒素檢測方法綜述
由于產(chǎn)生毒素的霉菌無處不在，以及我們對大多數(shù)有利于霉菌生長和霉菌毒素產(chǎn)生的條件控制不力，造成食品和飼料的霉菌毒素污染問題越來越成為現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中不可忽視的重大難題。在各種農(nóng)產(chǎn)品上生長著的各種各樣的霉菌，這些霉菌都能產(chǎn)生霉菌毒素，霉菌毒素是有毒的化合物，有些甚至是致癌的。霉菌毒素有很多種(CAST,2003)，包括黃曲霉毒素，主要是黃曲霉毒素B1和M1(Aflatoxins，F(xiàn)B1、FM1);赭(棕)曲霉毒素A(OchratoxinA，OA);雜色(柄)曲霉毒素(Terigmatocystin);展青霉素(Patulin,PTL);玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN(F-2));串珠鐮刀菌素(Moniliformin,MF)，三硝基丙酸以及屬于單端孢霉烯族化合物(Trichothecenes)的T-2毒素(T-2toxin,T-2);脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(嘔吐毒素)(Deoxynivalenol,DON);二乙酰鑣草鐮刀菌烯醇(Diacetoxyscirpenol，DAS)等。
聯(lián)合國糧農(nóng)組織在近期的報道中指出，全世界至少99個國家，占世界人口的87%，針對糧食和飼料的霉菌毒素污染問題都有相關(guān)的規(guī)定。在未來的幾年里，與不斷變化的全球氣候有關(guān)的氣象突發(fā)事件的增多將進(jìn)一步向我們提出挑戰(zhàn)。霉菌毒素污染給食品企業(yè)、糧油加工企業(yè)、畜禽養(yǎng)殖場以及飼料的加工企業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
目前霉菌毒素檢測常用的方法如下幾種：
一、 薄層層析法：
TLC法是針對不同的樣品，用適宜的提取溶劑將霉菌毒素從樣品中提取出來，經(jīng)柱層析凈化，再在薄層板上層析展開、分離，利用霉菌毒素的熒光性，根據(jù)熒光斑點的強弱與標(biāo)準(zhǔn)比較測定其最低含量。TLC法樣品前處理繁瑣，且提取和凈化效果不夠理想，提取液中雜質(zhì)較多，在展開時影響斑點的熒光強度。
二、色譜法：
色譜法，包括薄層色譜、氣相色譜、液相色譜等，一直是最重要的霉菌毒素的化學(xué)分析方法。現(xiàn)在比較普遍的霉菌毒素的分析方法還是液相色譜法，包括液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)。該法快速而準(zhǔn)確，但需要昂貴的儀器設(shè)備，僅限于專業(yè)檢測機構(gòu)獲得科研和調(diào)查分析、監(jiān)測使用，未能在企業(yè)及基層廣泛推廣使用，而且其結(jié)果的滯后效應(yīng)大大降低了對生產(chǎn)實際的指導(dǎo)效果。
三、免疫化學(xué)檢測法： (膠體金免疫層析法，酶聯(lián)免疫吸附法)
免疫學(xué)檢測方法是基于抗體與抗原或半抗原之間的選擇性反應(yīng)而建立起來的一種生物化學(xué)分析法。通常具有高的選擇性和很低的檢出限，廣泛用于各種抗原、半抗或抗體的測定，一般可分為熒光免疫法、發(fā)光免疫法、免疫法及電化學(xué)免疫法等非放射免疫法和放射免疫法，其中在飼料霉菌毒素檢測中應(yīng)用較廣的主要是酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和膠體金免疫層析法。
免疫學(xué)檢測方法由于其快速、靈敏、準(zhǔn)確、可定量、操作簡便、無需貴重儀器設(shè)備，且對樣品純度要求不高等特性，特別適用于飼料廠、糧油/食品加工廠、養(yǎng)殖場等企業(yè)進(jìn)行原料或成品的檢測以及工商質(zhì)監(jiān)部門現(xiàn)場檢測。
該類方法有以下特點：
1) 靈敏度高
2) 干擾?。嚎贵w抗原的免疫反應(yīng)特異性很強，結(jié)構(gòu)類似物、熒光物質(zhì)、有色物質(zhì)對檢測的干擾很小。
3) 操作簡便快捷：由于特異性強，簡化了樣品的預(yù)處理和提取純化過程，同時操作步驟也非常簡便，測定時間也短。
4) 安全性高，污染少，成本低廉：不需要昂貴的測定儀器，所用試劑也相對較少，特別是因為靈敏度高，毒素標(biāo)準(zhǔn)品的濃度可以很低，減少了對檢測人員和環(huán)境的潛在危害和污染。
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幾種檢測霉菌毒素方法特點對比表 |
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常用方法 |
薄層層析法 |
色譜法 |
膠體金免疫層析法 |
酶聯(lián)免疫吸附法 |
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檢測操作 |
繁瑣 |
繁瑣 |
簡單 |
簡單 |
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是否定量 |
目測半定量 |
定量 |
定性 |
定量 |
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敏感性 |
差 |
高 |
高 |
高 |
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提取效率 |
低 |
高 |
高 |
高 |
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儀器設(shè)備 |
設(shè)備簡單 |
設(shè)備昂貴 |
簡單設(shè)備 |
簡單設(shè)備 |
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樣本前處理 |
繁瑣 |
繁瑣 |
簡單 |
簡單 |
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幾種霉菌毒素快速檢測方法對比 |
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方法名稱 |
優(yōu)點 |
局限性 |
適用單位 |
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膠體金快捷型--直接法 |
1、簡便快速，5分鐘出結(jié)果
2、樣品處理時間非常短
3、攜帶方便，適用基層
4、可以單個樣品逐一檢測，不需要做曲線
5、無需復(fù)雜設(shè)備和專業(yè)知識，操作人員5分鐘即可學(xué)會，即學(xué)即用
6、室溫保存，保存期長 |
1、定性檢測，只判斷超不超標(biāo)，不給具體數(shù)據(jù)
2、檢測樣品范圍較窄，不能測含油較多的樣品
3、用于提取的溶劑為甲醇，有一定的毒性
4、檢測高靈敏度時穩(wěn)定性弱于膠體金精準(zhǔn)型
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a.飼料生產(chǎn)加工企業(yè)
b.糧食谷物粗加工企業(yè)
c.工商質(zhì)監(jiān)部門用于快速篩查
d.畜禽養(yǎng)殖戶自查
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膠體金精準(zhǔn)型--萃取復(fù)溶法 |
1、與HPLC法對照，準(zhǔn)確性非常好，有權(quán)威檢測中心驗證報告
2、檢測樣品范圍非常廣，凡是可能污染霉菌毒素的樣品（包括油類），均可用于檢測
3、整個操作過程所使用的試劑均無毒無害
4、樣本中毒素提取回收率高且穩(wěn)定
5、樣品本身顏色對檢測結(jié)果影響小
6、可以通過調(diào)整稀釋倍數(shù)準(zhǔn)確地檢測多個濃度梯度，可實現(xiàn)半定量檢測
7、操作較簡單，一般操作人員半小時即可學(xué)會，即學(xué)即用
8、室溫保存，保存期長 |
1、定性檢測，只判斷超不超標(biāo)，不給具體數(shù)據(jù)
2、操作時間比快捷型長
3、操作步驟多于快捷型
4、一張試紙只能測一份樣品
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a.糧油制品生產(chǎn)加工企業(yè)
b.食品加工貿(mào)易企業(yè)
c.香料調(diào)味品生產(chǎn)加工企業(yè)
d.食用油生產(chǎn)企業(yè)
e.國家/省市縣級糧油監(jiān)督檢測中心（站）
f.工商質(zhì)監(jiān)部門用于市場快速篩查
g.飼料生產(chǎn)加工企業(yè)
h.其他需檢測霉菌毒素的行業(yè) |
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酶聯(lián)免疫試劑盒Elisa |
1、準(zhǔn)確定量，有權(quán)威機構(gòu)驗證報告
2、批量樣品，一次檢測
3、采用直接競爭法，步驟簡單
4、靈敏度高于膠體金法，檢測范圍廣
5、檢測值基本不受樣品底色干擾 |
1、操作較復(fù)雜，需要專業(yè)人員操作
2、保存溫度有限制，保存期一年
3、不適合基層現(xiàn)場檢測
4、檢測樣品范圍較窄，對于含油較多的樣品，需另行設(shè)計樣本處理方法
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a.食品相關(guān)分析實驗室
b.糧油監(jiān)測檢測中心
c.有條件的糧油飼料生產(chǎn)加工企業(yè)
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以上兩表對比了各種方法的優(yōu)缺點以及各種單位最實用的檢測方法分析，希望能對關(guān)注霉菌毒素的企業(yè)和單位有所幫助，但是同行業(yè)也可以從經(jīng)濟(jì)成本和樣品不同要求出發(fā)也有可以找到最適合自己企業(yè)適用的檢測方法。
下表中針對食品和飼料行業(yè)中不同的原料推薦了相應(yīng)的初篩方法：
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食品行業(yè)黃曲霉毒素初篩方法 |
飼料行業(yè)黃曲霉毒素初篩方法 |
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品名 |
推薦檢測方法 |
品名 |
推薦檢測方法 |
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