畜牧人

標(biāo)題: 幾種常見(jiàn)的動(dòng)物源性飼料中揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定 [打印本頁(yè)]
作者: wlins    時(shí)間: 2007-2-1 09:11
標(biāo)題: 幾種常見(jiàn)的動(dòng)物源性飼料中揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定
幾種常見(jiàn)的動(dòng)物源性飼料中揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定
揮發(fā)性鹽基氮 total volatile basic nitrogen物質(zhì)，簡(jiǎn)稱(chēng)TVBN。它是指肉蛋白質(zhì)在微生物的作用下發(fā)生分解產(chǎn)生氨、胺類(lèi)堿性含氮物質(zhì)，這類(lèi)物質(zhì)易和有機(jī)酸形成鹽，具有揮發(fā)性，稱(chēng)這類(lèi)物質(zhì)為揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)。肉中揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)含量的多少可以反應(yīng)肉品質(zhì)新鮮程度。
TVBN值：100克肉中所含揮發(fā)性鹽基氮物值的毫克數(shù)。該值是肉品新鮮度指標(biāo)。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：一級(jí)鮮肉≤15mg/100g,二級(jí)鮮肉15-25mg/100g,腐敗肉≥25mg/100g。
揮發(fā)性鹽基氮作為食品和水產(chǎn)品質(zhì)量的重要指標(biāo)，在近幾年才被應(yīng)用作為動(dòng)物源性飼料產(chǎn)品的一個(gè)重要指標(biāo)，主要反映動(dòng)物源性飼料的新鮮度。
本試驗(yàn)通過(guò)參考GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》〔1〕，結(jié)合動(dòng)物源性飼料產(chǎn)品的實(shí)際情況，建立一種適用于動(dòng)物源性飼料產(chǎn)品中揮發(fā)性鹽基氮含量測(cè)定的簡(jiǎn)便方法。
1、        原理
動(dòng)物性飼料產(chǎn)品富含蛋白質(zhì)，由于微生物的作用易發(fā)生腐敗，使蛋白質(zhì)分解產(chǎn)生氨及胺類(lèi)等堿性含氮物質(zhì)，稱(chēng)為揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)。此類(lèi)物質(zhì)具有揮發(fā)性，用凱氏定氮法在堿性環(huán)境中將揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)蒸餾出來(lái)后，用硼酸接收，再用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸滴定，計(jì)算含量即為T(mén)VBN值。
2、儀器與試劑
2．1儀器
實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)：刀片式高速粉碎機(jī)；分析天平：感量0.0001g；半微量凱氏蒸餾裝置：水蒸汽蒸餾式；振蕩機(jī)；離心機(jī)；勻漿機(jī)；微量滴定管：最小分度0.01 mL。
2．2溶液的配制
2.2.1 c=0.01mol／L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（無(wú)水碳酸鈉標(biāo)定）：吸取分析純鹽酸1mL，用蒸餾水定容至1000mL，標(biāo)定。
2.2.2  2%硼酸溶液：分析純硼酸2g溶于100mL水配成2%溶液。
2.2.3  混合指示劑：甲基紅0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，陰涼處保存期三個(gè)月以?xún)?nèi)。
2.2.4  1%氧化鎂溶液：分析純氧化鎂1.0g溶于100mL蒸餾水振蕩成混懸液。
2.2.5  防泡劑:不含氮、主成分為有機(jī)硅的固態(tài)或液態(tài)試劑。
3、測(cè)定步驟
3.1試樣的處理
按飼料采樣方法制備試樣, 要求粉碎細(xì)度能一次性達(dá)95%以上過(guò)CQ16(相當(dāng)于40目)篩，粉碎樣品充分混合后（篩上、篩下的全部篩分范圍樣品）裝入磨口瓶中備用,在粉碎樣品時(shí)，磨膛不能發(fā)熱。
稱(chēng)取10g試樣(精確到0.0001g)于250mL具塞錐形瓶中，加蒸餾水100mL，振蕩搖勻30min。魚(yú)粉和蠶蛹粉等原料采用過(guò)濾，濾液為樣液；而血漿蛋白粉、血球蛋白粉、魚(yú)溶漿等不易過(guò)濾的原料采用離心，在離心機(jī)上于1 500g(大約3000r/min)離心10min，上液為試樣液。
3.2  蒸餾
取20mL2%的硼酸溶液于150mL錐形瓶中，加混合指示劑2滴，使半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入此溶液。
蒸餾裝置的蒸汽發(fā)生器的水中應(yīng)加甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，且保持此溶液為橙紅色，否則補(bǔ)加硫酸。
準(zhǔn)確移取10mL樣液注入蒸餾裝置的反應(yīng)室中，用少量蒸餾水沖洗進(jìn)樣入口，再加入10mL1.0%的氧化鎂溶液，不起泡的動(dòng)物源性飼料不加防泡劑，而易起泡的動(dòng)物源性飼料產(chǎn)品，例如血漿、血球、血粉等必須滴加1g固體（或0.5ml液體）防暴劑，在入口處加水封好，防止漏氣，蒸餾4min，使冷凝管末端離開(kāi)吸收液面，再蒸餾1min，用蒸餾水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。
3.3        蒸餾
吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液滴定，溶液由藍(lán)綠色變?yōu)榛壹t色為終點(diǎn)，同時(shí)進(jìn)行試劑空白測(cè)定。
3.4        結(jié)果的計(jì)算
揮發(fā)性鹽基氮（TVBN）含量以（mg/100g）表示。
ω=
式中: ω——樣品揮發(fā)性鹽基氮的含量，mg/100g；
V1——滴定試樣時(shí)所需鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL；
V2——滴定空白時(shí)所需鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL；
C——鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L；
m：試樣重量，g；
14：與1.00mL鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液[c(HCl)=1.000mol/L]相當(dāng)?shù)牡馁|(zhì)量，mg。
4、結(jié)果與討論
4.1不同試樣制備方式對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響
4.1.1 不同粉碎粒度試樣對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響
     分別取未粉碎的魚(yú)粉試樣，粉碎至40目、60目的魚(yú)粉試樣，按3的分析測(cè)試步驟進(jìn)行分析，每種處理情況測(cè)試5次，測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 不同粉碎粒度、不同試樣處理方式對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響
        振蕩30 min處理        高速勻漿機(jī)10min處理
        未粉碎        40目        60目        未粉碎        40目        60目
揮發(fā)性鹽基氮,mg/100g        150.1148.3152.4147.5153.4        215.7221.4217.9218.5220.1        225.3219.8220.8223.4221.3        215.4214.8217.5216.8219.7        220.3219.8220.8217.5222.6        224.5221.3223.2222.6219.9
平均值，mg/100g        150.3        217.7        223.5        216.8        220.2        222.3
根據(jù)單因子方差分析，在（a＜0.05）,未粉碎處理的樣品與粉碎至40目和60目樣品存在顯著差異；而粉碎至至40目和60目樣品處理差異不顯著。
4.1.2 不同試樣處理方式對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響
分別取未粉碎和已粉碎40目、60目魚(yú)粉試樣用高速勻漿機(jī)勻漿10分鐘，按3的分析測(cè)試步驟進(jìn)行分析，測(cè)試結(jié)果見(jiàn)下表1。
根據(jù)單因子方差分析，在（a＜0.05）,三種處理方式差異不顯著。
4.2本方法的重復(fù)性
分別取魚(yú)粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、血粉、膨化血粉等樣品，每個(gè)樣品測(cè)定6次，計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)偏差及變異系數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表2。
表2  不同試樣揮發(fā)性鹽基氮（TVBN）含量測(cè)定的重復(fù)性
        測(cè)定值，mg/100g        平均值mg/100g        標(biāo)準(zhǔn)偏差        變異系數(shù)(%)
魚(yú)粉        215.7,221.4,217.9,218.5,220.1        217.7        2.175        1.00
血球蛋白粉1#        17.5,18.3,16.9,17.7,18.5        17.78        0.642        3.61
血球蛋白粉2#        101.5,103.7,104.8,102.4,105.2        103.5        1.567        1.51
血漿蛋白粉1#        15.2,13.9,14.6,15.6,16.1        15.08        0.858        5.69
血粉        554.7,537.1,547.0,558.3,571.3        553.68        12.771        2.31
膨化血粉        2215.2,2240.5,2198.7,2207.3,2168.9        2206.12        26.011        1.18
4.3本方法的回收率
在以上魚(yú)粉、血球蛋白粉中，按一定濃度的（NH4）2SO4溶液，按本方法進(jìn)行測(cè)試，每個(gè)梯度重復(fù)測(cè)定五次，結(jié)果見(jiàn)表3。
表3  方法的回收率（n=5）
        加入量        測(cè)得均值        平均回收率（%）
魚(yú)粉        50.0        267.3        99.20
        100.0        315.9        98.20
血球蛋白粉2#        50.0        153.6        100.20
        100.0        203.3        99.80
4.4 本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》半微量定氮法的比較
4.4.1本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》適用范圍的比較
本方法適用所有的動(dòng)物源性飼料產(chǎn)品的揮發(fā)性鹽基氮（TVBN）含量的測(cè)定；GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》半微量定氮法適用與魚(yú)粉、肉粉等不起泡的產(chǎn)品TVBN測(cè)定；微量擴(kuò)散法適用低含量所有產(chǎn)品的TVBN測(cè)定，但測(cè)定時(shí)間較長(zhǎng)，方法較半微量定氮法煩瑣。
表4本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》適用范圍的比較
方法        適用范圍        不適用范圍
本方法        魚(yú)粉、肉粉、血粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、膨化血粉等        無(wú)
GB/T5009.44-2003        半微量定氮法        魚(yú)粉、肉粉等不起泡產(chǎn)品        血粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、膨化血粉等
        微量擴(kuò)散法        魚(yú)粉、肉粉、血粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉        膨化血粉等高TVBN含量產(chǎn)品
4.4.2本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》測(cè)定結(jié)果的比較
分別取魚(yú)粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、血粉、膨化血粉等樣品，根據(jù)各方法的適用范圍采用相應(yīng)的方法測(cè)定揮發(fā)性鹽基氮（TVBN）含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5。
表5 本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》測(cè)定結(jié)果的比較
                                                           單位：mg/100g

        本方法(n=5)        GB/T5009.44-2003
                半微量定氮法(n=2)        微量擴(kuò)散法(n=2)
魚(yú)粉        217.7        218.5        215.7
血球蛋白粉1#        17.78        /        17.9
血球蛋白粉2#        103.5        /        102.7
血漿蛋白粉1#        15.08        /        15.2
血漿蛋白粉2#        57.94        /        58.2
血粉        553.68        /        551.8
膨化血粉        2206.12        /        /
    計(jì)算表明，改進(jìn)后的測(cè)試方法與相適應(yīng)的試驗(yàn)方法的測(cè)定值不存在顯著差異，改進(jìn)后的測(cè)試方法的測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
5、結(jié)論
   本試驗(yàn)建立了動(dòng)物源性飼料產(chǎn)品中揮發(fā)性鹽基氮的含量的測(cè)定方法，該法建立動(dòng)物源性飼料產(chǎn)品樣品處理、采用半微量蒸餾法直接測(cè)定氮含量，普通飼料企業(yè)常規(guī)質(zhì)量檢測(cè)條件下可以滿(mǎn)足，具有提取效率高、易于操作等特點(diǎn)。通過(guò)研究表明：樣品經(jīng)粉碎處理，平均回收率可達(dá)98%以上。該法針對(duì)幾種常見(jiàn)的動(dòng)物源性飼料揮發(fā)性鹽基氮的含量測(cè)定設(shè)計(jì)，與國(guó)標(biāo)法相比具有前處理簡(jiǎn)便、回收率高的特點(diǎn)，同時(shí)具有重現(xiàn)性好、精密度高、操作簡(jiǎn)便、省時(shí)等優(yōu)點(diǎn)。
參考文獻(xiàn)
1 GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》
作者: 喜雨    時(shí)間: 2007-3-15 08:18
為什么在檢測(cè)時(shí)用的是氧化鎂而不和其他粗蛋白檢測(cè)那樣用氫氧化鈉呢？
作者: 馬前卒    時(shí)間: 2007-5-29 08:26
原料新鮮度測(cè)定很重要,大家要重視哦!
作者: mwzhang886    時(shí)間: 2007-8-14 22:01
很好的資料,感謝沒(méi)有幣的資料
作者: yuying429    時(shí)間: 2007-9-25 20:22
標(biāo)題: 揮發(fā)性鹽基氮
大家好！我想問(wèn)一下，用凱氏定氮儀測(cè)定揮發(fā)性鹽基氮時(shí)，樣液用不用像測(cè)定粗蛋白時(shí)用消化爐消煮后蒸餾？蒸餾時(shí)不用1%氧化鎂，換成40%氫氧化鈉行不行？
作者: ttxz    時(shí)間: 2007-12-11 22:21
可以的，直接用蒸餾法進(jìn)行?？?，省心。
作者: wanghong    時(shí)間: 2007-12-12 11:42
請(qǐng)問(wèn)組胺怎么測(cè)定啊?
作者: 柳粒橙    時(shí)間: 2008-5-29 09:35
非常感謝樓主的無(wú)私奉獻(xiàn).
作者: xlm1985ok    時(shí)間: 2008-12-23 11:15
標(biāo)題: 回復(fù) 7樓 yuying429 的帖子
不用消化，直接離心后的樣液加入氧化鎂，用半微量定氮儀定氮，再滴定就可以了。



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