畜牧人

標(biāo)題: 測真蛋白時需要主意的因素有哪幾個 [打印本頁]
作者: swordman33    時間: 2007-7-6 06:33
標(biāo)題: 測真蛋白時需要主意的因素有哪幾個
還有一個問題，測真蛋白時需要主意的因素有哪幾個？
過濾說是用傾斜法過濾，傾斜法怎么操作？
加入硫酸銅和氫氧化鈉攪拌后應(yīng)該是什么顏色？
配出的硫酸銅三四天后有白色絮狀沉淀，正常么？
過濾時有的過濾特別慢，濾紙正常，還有什么原因，七八個小時過濾不完，是粉碎得太細了么？都有什么可能？
作者: littlepigwsw    時間: 2007-7-30 15:52
怎么沒人回答呢?期待.....
作者: xphxyk    時間: 2007-7-30 23:40
應(yīng)是氫氧化銅的色。我現(xiàn)在使用的抽濾的辦法否則太慢
作者: 理想    時間: 2007-7-31 07:18
我現(xiàn)在用的是普通濾紙漏斗過濾,如果時間太慢,將漏斗稍微提升一點;你的硫酸銅可能有問題,是不是配制是沒有加熱充分溶解還是蒸餾水有問題?如果不好,建議重新配制~!
作者: 理想    時間: 2007-7-31 07:30
樣品+CUSO4+NAOH的顏色是灰藍色,沉淀是CU+蛋白形成的
作者: 粗蛋白    時間: 2007-7-31 10:50
真蛋白測定—硫酸銅沉淀法
1、原理：
    蛋白質(zhì)能變成不溶于水的狀態(tài)，而與其它含氮化合物分離開來。當(dāng)加入沉淀劑（如硫酸銅），然后經(jīng)過過濾，用水洗去沉淀中的鹽類及溶解性的含氮物，按照測粗蛋白的方法，即得樣品中的真蛋白含量。
2、操作步驟：
１）準(zhǔn)確稱取樣品2克左右分別放于2只300ml燒杯中用50ml蒸餾水?dāng)?shù)次沖洗，邊沖邊攪拌，然后將溶液加熱至沸。
２）向燒杯內(nèi)倒入25ml 6%硫酸銅溶液略攪拌，再徐徐加入25ml 1.25% NaOH溶液攪動(不要加得太快)。
３）用表面皿將燒杯蓋上靜置2小時，然后用兩層定量濾紙慢速過濾，用熱蒸餾水沖洗燒杯數(shù)次，再用熱蒸餾水沖洗沉淀物，濾液用氯化鋇溶液檢查不混濁后,  將漏斗連同濾紙置50—80℃烘至略潮(約1.5小時)。
４）消化:同測粗蛋白，但易溢出，操作者要守在旁邊觀察，消化液不能加多也不能少。
3、計算：（同粗蛋白）
附試劑配制：    1）6%硫酸銅：稱取6g硫酸銅溶于100ml水中。
                2）1%氯化鋇：稱1g氯化鋇溶于100ml水中。

最近接手化驗室工作,我就按照上述過程操作,  過濾倒不是很慢,但就是消煮后發(fā)現(xiàn)全部結(jié)晶了,可能是自己用硫酸太少或催化劑加多了,  第一次做是以失敗告終, 檢測結(jié)果為0,凱氏瓶還燒爆一個:P
作者: zxm    時間: 2007-7-31 16:40
應(yīng)該是用硫酸太少，至少要用20ML以上
作者: tony2005428    時間: 2007-8-1 15:11
標(biāo)題: 我們真蛋白測定方法——與你們的略有不同
1、原理
      硫酸銅在堿性溶液中，可將蛋白質(zhì)沉淀，且不溶于熱水過濾和洗滌后，可將純蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)含蛋物分離，再用凱氏定蛋法測定沉淀中的蛋白質(zhì)含量。
2、儀器設(shè)備
      （1）燒杯：200ml。
      （2）定性濾紙。
      （3）其他設(shè)備與粗蛋白質(zhì)測定法的相同。
3、試劑及配制
      （1）100g/L硫酸銅溶液：分析純硫酸銅（CuSO4·5H2O）10g溶于100mL蒸餾水中。
      （2）25g/L氫氧化鈉溶液：將2.5g分析純氫氧化鈉溶于100mL蒸餾水中。
            （3）10g/L氯化鋇溶液：1g氯化鋇（BaCl·H2O）溶于100mL蒸餾水中。
            （4）2moL/鹽酸溶液。
            （5）其他試劑預(yù)一般粗蛋白測定法的相同。
4、測定步驟
               準(zhǔn)確稱取試樣1g左右（精確到0.0001g），置于200mL燒杯中，加50mL蒸餾水，加熱至沸，加入20mL硫酸銅溶液，20mL氫氧化鈉溶液（加入以上兩種溶液多要緩慢，且要邊加入邊攪拌），用玻璃棒充分攪拌，放置1h以上，用傾斜過濾（用定型濾紙），然活后用60~80℃熱蒸餾水洗滌沉淀5~6次，用氯化鋇溶液5滴和鹽酸溶液1滴檢查濾液，直至不生成白色沉淀為止。將沉淀和濾紙放在65℃烘箱干燥2h，然后全部轉(zhuǎn)移到凱氏燒瓶中，消化后進行定蛋測定。
5、結(jié)果計算
       同粗蛋白測定。
作者: 粗蛋白    時間: 2007-8-1 20:26
我們所用的硫酸銅和氫氧化鈉的濃度不一樣. 濃度高了過濾很慢,所以將濃度都降了一半.
作者: tony2005428    時間: 2007-8-2 10:55
本帖最后由 tony2005428 于 2009-5-14 11:20 編輯

#9
濃度不影響過濾吧

#1
1、傾斜法過濾：是否就是加濾紙的V型漏斗過濾呢？？具體的我也不是很清楚，我們就是這樣操作的。
2、加入硫酸銅和氫氧化鈉攪拌后應(yīng)該是什么顏色？
原料不同顏色有所差異，不過顏色好像不影響真蛋白的測定。
3、過濾時有的過濾特別慢？
你是否加入硫酸銅和氫氧化鈉后直接過濾呢？？要用玻璃棒充分攪拌，放置1h以上，后再過濾，此時濾液不混濁，有上清液；若直接過濾時溶液混濁，成糊狀，非常慢。
作者: 琪琪    時間: 2007-8-7 11:49
你是否加入硫酸銅和氫氧化鈉后直接過濾呢？？要用玻璃棒充分攪拌，放置1h以上，后再過濾，此時濾液不混濁，有上清液；若直接過濾時溶液混濁，成糊狀，非常慢。
作者: jku002    時間: 2007-12-21 08:47
請問各位豆粕中真蛋白的測定和上述的方法一樣嗎
作者: yxy0725    時間: 2007-12-24 14:13
同事測了幾次，都不怎么準(zhǔn)確
現(xiàn)在自己在做，不知道結(jié)果怎么樣？
作者: xyy169    時間: 2007-12-24 14:27
由于工作需要，我也檢測過真蛋白，失敗過無數(shù)次^_^
1、其實不需要完全按照飼料標(biāo)準(zhǔn)做，那樣的話，會需要很長的時候過濾，洗滌。
2、如果覺得過濾太慢，可以適當(dāng)減少稱取的量，0.5g~1g就可以，0.5g較快。
3、顏色應(yīng)該不會太大的區(qū)別，但要注意，加入硫酸銅和氫氧化鈉之后，還要加熱一會，這時你會發(fā)現(xiàn)顏色會變深，否則是較藍的顏色。
4、洗的時候必需用較高溫度的水，而且每次加的量不能太多，否則水冷之后，有些蛋白會在冷水中溶解，從而被洗出，影響檢測結(jié)果。
5、最后，洗滌之后，要烘干，雖然不要求太干，不過還是盡量讓水分少些，否則，消煮的時候會有大量黑渣，影響結(jié)果。至于濃硫酸的加入量，如果在1g以內(nèi)，就只要15ml就足夠了。
6、還有要注意一下使用的濾紙，不是每種濾紙都可以的。
作者: jku002    時間: 2007-12-28 09:50
我也剛開始做真蛋白，消化時消化管上都是黑色的泡沫，并且消化了好久都是黑色的，這是怎么回事阿，是不是過濾后我烘的還不夠干阿
作者: xlm1985ok    時間: 2008-9-18 11:30
是不是消化的溫度過低，我也遇到過，如果消化爐回流的比較好的話，黑色泡沫，應(yīng)當(dāng)回流到消化瓶中，使其消化完全
作者: 510228206    時間: 2008-9-18 13:02
我們的測定方法和8樓的一樣
作者: xlm1985ok    時間: 2008-9-21 11:49
那就把樣品和濾紙烘干再試一下，應(yīng)該就可以了
作者: xlm1985ok    時間: 2008-9-21 16:46
過濾太慢了有沒有比較快速的方法的，
作者: 小楊    時間: 2008-10-7 14:55
標(biāo)題: 我也遇到許多問題
請問大家 我做真蛋白時遇到一個問題 消化完全后 消化液澄清 但是在消化管底部出現(xiàn)白色粉狀沉淀物是什么?什么原因造成?是否影響真蛋白的測定?
作者: 龍城飛將    時間: 2008-10-7 15:23
三聚氰胺不溶于水，這種方法可能測不出來，測出的真蛋白也是假的
作者: 快樂工作    時間: 2008-10-14 21:01
我們做真蛋白時，消化管底部也出現(xiàn)粉狀白色物質(zhì)，但是轉(zhuǎn)移定容后就溶解了，我想應(yīng)該不影響測定結(jié)果，但是前面同行說的降低硫酸銅和氫氧化鈉的濃度，會不會生成沉淀不徹底，影響測定結(jié)果，致使結(jié)果偏高
作者: 快樂工作    時間: 2008-10-14 21:03
我們做一個樣品，過濾大概在兩----三個小時，確實太急人了，請教一下你們用的什么抽濾裝置？
作者: dy3166    時間: 2008-10-16 09:48
我們做的方法和8樓的一樣
出現(xiàn)沉淀是消化時，催化劑加多了，但對結(jié)果沒什么影響；
過濾的慢是和所作的原料不同有關(guān)，如魚粉就比豆粕慢；
抽濾？得保證不把濾紙抽壞才行?。?br /> 加酸、堿后的顏色，動物性原料顏色較深，植物性原料呈藍色
作者: xlm1985ok    時間: 2008-10-25 09:46
在過濾時，同樣的樣品，在過濾時，一個快，一個慢，對于消化時，還不能完全消化，好多黑渣都快上升到消化瓶口了，滴加正辛醇也不起作用，而且也在消化后出現(xiàn)了白色粉狀物，但是影響結(jié)果的主要還是消化，不知道大家是否有更準(zhǔn)確的方法，希望借鑒一下
作者: kangyucai    時間: 2008-11-21 11:49
標(biāo)題: 回復(fù) 19樓 xlm1985ok 的帖子
用抽濾的方法快很多
把定性濾紙?zhí)自诓际下┒分?，然后用抽濾機進行抽濾即可！注意不要讓溶液從濾紙中溢出，可用大點的濾紙或是每次倒進的溶液少些即可！
作者: famousfang    時間: 2008-12-11 13:12
標(biāo)題: 回復(fù) 12樓 jku002 的帖子
是啊
三氯乙酸法測定真蛋白 與硫酸銅法  結(jié)果有沒有什么差異啊？請問
作者: 風(fēng)落沙情    時間: 2008-12-27 23:04
加入硫酸銅和氫氧化鈉攪拌后應(yīng)該沒有固定的顏色，但大多數(shù)都會是藍色，有時候因樣品不一樣顏色會略顯不一樣，會藍中帶黑。
作者: 風(fēng)落沙情    時間: 2008-12-27 23:05
上面只是我的個人經(jīng)驗所談。

我一般用的方法是做國標(biāo)。
作者: lht8254    時間: 2009-1-14 20:07
有簡易方法，使用三氯乙酸！
作者: 風(fēng)落沙情    時間: 2009-1-15 11:26
三氯乙酸是檢測小肽的啊，不是檢測真蛋白的。
作者: rabbit    時間: 2009-1-15 11:54
過濾時用的時間是長了些,應(yīng)該是先過濾液體,等你檢查沒有硫酸根離子了,再過濾沉淀,這樣過濾的速度是不會太慢的.
作者: xipuzl825168439    時間: 2009-3-16 14:16
大家討論了這么久，好像問題還是沒有解決嘛，高手快出來指點一二吧。
作者: beibe    時間: 2009-3-20 02:00
最后加入氫氧化鈉后,加熱時間要盡量縮短,否則溶液彥色變深,且過濾很慢.
作者: xiaoliangqiu    時間: 2009-3-31 17:34
建議烘干一些，不然濃硫酸加進去會發(fā)熱，賤到消化管壁上
作者: guiyilcw    時間: 2009-5-13 21:34
一直不明白，按原理去看，看不出加氫氧化鈉是干什么用的，把剩余的銅變成沉淀？還有為什么要洗去沉淀中的硫酸根離子？影響做粗蛋白嗎？
作者: xjfighting    時間: 2010-10-23 13:20
回復(fù) 35# xiaoliangqiu


    消化的時候會不會冒出來呀 ？消化液用濃硫酸，大概要加多少毫升才夠呢？



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