畜牧人

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IgY抗體在醫(yī)學方面的應用% i5 ~& A" m' w% u: _" p
IgY在人類疾病診斷中的應用 ! X- ?3 `, p& E# ]
　　隨著實驗室和臨床研究對抗體需求的增加，廉價大規(guī)?？贵w制備技術已成為新的研究課題。利用超免疫雞將特異性抗體穩(wěn)定持續(xù)地傳至卵黃中，制備特異性多克隆抗體，成本低且產量高，有望成為規(guī)模制備特異性抗體的有效手段。由于IgY的許多優(yōu)點，其在免疫學檢測診斷方面正越來越被廣泛應用。致病性大腸桿菌（enteropathogenic escherichia coli，EPEC）是引起嬰幼兒腹瀉的常見病原體，而菌毛中的結構重復蛋白A亞單位（structural repeating protein A subunit，BfpA）是EPEC發(fā)病機制中的主要致病因子，制備BfpA的IgY可以篩選人排泄物標本中EPEC的存在。2003年，De-Almeida CM等制備了抗BfpA的IgY用于免疫吸附，發(fā)現IgY可以特異性地鑒定EPEC。
  _' Z. W, r  p! @* r" ]　　蔭俊等采用MA-104細胞轉瓶培養(yǎng)技術，制備人型輪狀病毒Wa和猴型輪狀病毒SA11，以純化病毒+佐劑對SPF純系萊航產蛋母雞進行強化免疫，通過鹽析、柱層析和超濾方法從卵黃中制備特異性免疫球蛋白，結果表明，免疫雞卵黃中產生高滴度特異性抗輪狀病毒免疫球蛋白，其ELISA免疫效價達1.5×10 5 ，在定期加強免疫條件下，卵黃抗體效價維持在高滴度可達12個月以上。經脫脂鹽析和層析純化的IgY抗體，在4℃條件下其免疫效價可穩(wěn)定保存6個月以上。體外細胞病變抑制實驗結果表明，批量制備的IgY抗體具有高效價的特異性輪狀病毒中和活性，可用于常規(guī)實驗室和其他醫(yī)學實驗。
+ H1 n  @1 ^4 k' g8 W% UIgY對檢測方法的改進 5 Y& Z3 ^: G' x( F! n
　　膠乳凝集試驗是將可溶性抗原（或抗體）吸附于聚苯乙烯膠乳載體顆粒的間接凝集試驗。根據此原理，將膠體金標記抗體固定于特制的載體，則為免疫金標記法。這種方法簡便、快速、敏感、特異，因此廣泛用于疾病的快速診斷。試驗中常用的抗體是哺乳動物IgG。然而，聚苯乙烯膠乳吸附蛋白質存在結合不牢固的問題，影響了檢測效果。由于IgY具有更高的特異性和敏感性，可用IgY代替哺乳動物抗體作膠乳凝集試驗及制作膠體金。Davalos Pantoja L等對此做了初步研究。他們對IgY膠乳復合物進行了蛋白質吸附和解離、等電點、電場遷移率和膠體金穩(wěn)定性等研究，并與IgG進行比較，發(fā)現IgY是一種疏水性更強的蛋白質，它與乳膠的結合力更強，用它包被乳膠顆粒制作的膠體金比IgG穩(wěn)定性更好。' T7 n# ]* Y; _3 E+ h( A3 Z
　　由于IgY本身具有良好的穩(wěn)定性，用于親和層析柱純化制備所需蛋白，可以反復使用，提高了親和層析法分離蛋白的效率，這使IgY用于疾病的相關性蛋白的檢測更快速、價廉。Akita EM等用IgY制備的親和層析柱分離乳清和初乳中的IgG，一年多的時間內使用了50多次，其結合力只略有下降，說明用IgY制備的親和層析柱相當穩(wěn)定。4 i2 o% E" J: e' N2 w7 `0 q
IgY在人類疾病防治中的應用; i- K9 i: d* J
1. 抗細菌感染
' q3 s6 ]  `; y; J4 K( \+ i　　幽門螺旋桿菌（Helicobacter.Pylori，Hp）是引起慢性胃炎和消化性潰瘍等胃腸疾病的病原菌，感染率極高。也是世界衛(wèi)生組織認定的胃癌致病因子，在潰瘍患者中Hp的感染率為80%，健康人群為60%，60歲以上人群為70%，胃癌、胃潰瘍均屬消化道疾病。Weeks等（2000）發(fā)現，位于Hp細胞膜表面存在一種專門負責調節(jié)胞質內尿酶產生的蛋白質-Urel，Urel起“質子通道”作用，可控制進入細胞的胃酸量。研究表明，含抗Hp特異性IgY的高免蛋黃可破壞Urel，使菌體失去酶保護膜，無法在胃中強酸環(huán)境下存活，從而有效消滅Hp。
# t% H$ A* l0 ^- k9 n% b　　沙門氏菌是腸道感染的常見病原菌，Lee EN等在體外實驗中發(fā)現，特異性抗沙門氏菌的IgY能有效防治人類沙門氏菌性腸炎。
, o1 `+ K% u0 O9 X( r! ?& r　　變形鏈球菌被公認是引起齲齒最主要的病原菌。Smith DJ等用變形鏈球菌葡萄糖結合蛋白B（glucan-binding protein B，GBP-B）免疫雞獲得特異性抗GBP-B的IgY，研究發(fā)現該IgY可以預防變形鏈球菌引起的齲齒。美國已于1999年首先生產出了抗齲病IgY產品（健齒露），目前已通過我國生物制劑的安全評價，進入我國市場。
7 g, ]. L' d& Q3 _$ ^　　陰道加特納桿菌是引起婦科疾癥的主要致病菌，林元藻等用加特納桿菌作為抗原免疫Leghon雞，得到高純度特異性IgY，具有良好的生物學活性。
- |) b2 j  U7 q1 c2. 抗病毒感染
( l/ v: O" Q1 Y  o　　輪狀病毒是引起秋冬季嬰幼兒腹瀉的主要病原體之一，目前尚無有效的疫苗。蔭俊（2000）、郭立君等（2001）分別對抗輪狀病毒IgY的研制及生物學活性等方面進行了研究。目前抗輪狀病毒IgY（如百貝寧）是我國已商品化的治療和預防該病的生物制品。聶榮慶等對抗SARS-CoV雞卵黃免疫球蛋白進行了研究。
7 Z" J5 `- p' M7 R1 d, C  q　　乙型肝炎是一種全世界廣泛流行的傳染病，每年全球有約25萬人死于與乙肝有關的肝病。乙肝表面抗體是預防乙肝病毒感染的保護性抗體，采用乙肝表面抗體陽性人血液制備成乙肝免疫球蛋白（注射）可中和入侵的病毒，使新生兒免受感染，機體迅速獲得被動性保護免疫，但人血中提取的乙肝免疫球蛋白價格昂貴。研究表明，乙肝卵黃抗體與目前商品化的人血提取抗體有很多相同的生物活性和理化性質，如能高效研究出廉價的乙肝蛋黃抗體，則市場前景廣闊。4 v  @( e8 e" U# }) q6 Z4 s) x
3. 抗腫瘤治療 4 {0 `; ~6 j% ^9 I2 {! _
　　Hensel T等制備了雞抗金屬蛋白酶的IgY。在小鼠體外試驗中，這種抗體可中和金屬蛋白酶的蛋白分解活性，特異地抑制C6膠質瘤細胞在視神經外植體中的擴散和浸潤。這為神經系統腫瘤的治療開辟了前景。近年來，IgY還作為藥物載體用于胃腸道癌癥的治療。Yang J等從人胃癌MGC-803細胞中提取P110蛋白作抗原免疫雞，制備了抗胃癌蛋白P110的IgY，將之作為運送抗癌藥物的載體，發(fā)現該抗體能特異地識別胃腸系統的癌組織，這為胃腸系統癌癥的治療開辟了一條新的途徑，也為其他腫瘤的治療提供了新思路。
& d8 [3 m# f+ Y. O4. 功能性食品   r  Q, O7 E7 [' [( P3 d  i
　　IgY可作為嬰幼兒食品或中、老年人的保健食品添加劑，提高人體對各種疾病的抵抗力。美國食品和藥品管理局（FDA）認為，卵黃免疫球蛋白作為食品比作為藥物更有利，并將其列入“一般公認安全物質（Gen-erally Accepted as Safe，GRAS）”范疇，因此，如同每日飲用牛奶一樣，消費者可放心食用卵黃抗體。
  T- Q+ y1 k6 w1 S" l: Y* N! }　　Chae等（2000）研究了利用產蛋母雞生產抗大腸桿菌O157:H7對抗體的方法，并已取得專利。分離大腸桿菌O157:H7，于90℃滅活5～10min，制成抗原免疫母雞，獲得抗大腸桿菌O157:H7的IgY。含抗大腸桿菌O157:H7的全蛋可直接應用于食品，亦可從雞蛋中分離卵黃，凍干制成粉末，添加到待加工的糧食中。王忠澤等（2002）采用大腸桿菌O157:H7933菌株免疫SPF萊杭雞，制備抗O157:H7特異性IgY，動物被動保護實驗結果表明，口服IgY對乳鼠腸道感染模型具有明顯的保護作用;動物毒性實驗表明，口服抗體安全可靠，無毒性作用。' n5 V* L. b8 d6 L" v% v
5. 其他 + N6 J& B; ~! D! Q; t! L
　　在器官移植中，患者接受移植物后是否產生異種排斥反應是影響移植成功與否的最重要因素。補體抑制是一種有效的防止超急性排斥反應的策略。但這種方法又會引起一種急性血管異種移植排斥反應（acute vascular xenograft rejection，AVXR）。相關模型的大量證據顯示，這個過程是抗體介導的與異種移植物內皮發(fā)生相互作用的結果。因為單核細胞、自然殺傷細胞、中性粒細胞和血小板有Fc受體和C1q受體，可與結合在內皮細胞上的哺乳動物抗體相互作用，促進AVXR的發(fā)生。而IgY不與人的Fc受體結合，也不與C1q受體結合而激活補體，因此可以用于 AVXR的防治。有研究者制備了雞抗豬大動脈內皮細胞的IgY，結果顯示IgY可阻斷或限制AVXR發(fā)生。因此，IgY用于器官移植可能為提高其成功率帶來新希望。
1 t5 l5 X: |* ~% a1 }0 ?7 pIgY在畜禽疾病防治方面的應用
  }1 w; t# {2 ]5 O+ V1 w2 y/ A預防：
3 @* W$ D; P: s( ^& p% |9 N2 n　　IgY能抵抗幼齡動物腸道中胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的消化。故常在幼畜飼料或添加劑中加入一定量的針對某些特定疾病的IgY以使其獲得有效的被動保護免疫力。利用小鵝瘟強毒制備的卵黃抗體對2-3日齡雛鵝進行預防，保護率可高達100%。用鴨病毒性肝炎I型雞胚毒免疫雞制備的雞抗鴨病毒性肝炎高免卵黃抗體,實際應用預防時，雛鴨的平均成活率為96.6%。
( f, Z6 ~/ R7 W3 u　　用免疫獲得的抗產腸毒素的大腸桿菌的抗體IgY喂養(yǎng)新生仔豬,可防止大腸桿菌引起的腹瀉。仔豬出生后口服豬大腸桿菌高免卵黃液,可明顯降低仔豬黃痢的發(fā)生率。
* p6 l& ?3 Z. m治療：9 S4 Y  A! {0 u/ {
　　目前，IgY已被廣泛應用于許多疾病的治療,特別是烈性、急性、危害性比較大的動物疫病,如雞新城疫、傳染性法氏囊病,小鵝瘟、鴨疫里氏桿菌病、鴨病毒性肝炎及腦脊髓炎病等。應用IgY稀釋液先后對115群疫病雞共68315只做治療試驗,其保護率為84.02%,其中效價在640以上的IgY稀釋液的保護率高達93.52%。1 E% U3 Z0 D( W* e- m+ n. M- K. `5 G
　　用小鵝瘟的卵黃抗體治療發(fā)病鵝群,治愈率為95.2%。用禽流感H9亞型油乳劑疫苗多次免疫產蛋雞制備的禽流感高免卵黃液,在發(fā)病初期肌注,獲得了滿意的治療效果。此外，應用多種病原菌免疫制備的IgY還可以防治多種病原菌的感染。IgY還可以被應用到一些疑似病、新病的防治研究中，這為防治疾病提供了一條新的途徑。對流行于粵閩一帶番鴨養(yǎng)殖區(qū)的花肝病研制出了抗蕃鴨花肝病的卵黃抗體進行治療試驗，結果表明該抗體對于花肝病的早期預防與治療效果明顯。' P) b2 k; H* }* b  g
　　用IgY治療疾病具有安全、高效且無害的特點，是人們理想的獸醫(yī)臨床藥物。一般來說,IgY在疾病發(fā)生早期使用效果較好,它不能與疫苗同期接種,應間隔5～6天，同時應慎重與抗生素搭配。實踐證明,IgY以肌肉注射為好。卵黃抗體與飲水同服，對雞不產生作用。
* o; T( K1 I/ C' h7 H$ z　　　IgY和哺乳動物免疫球蛋白有許多不同之處，如它不與金黃色葡萄球菌A蛋白結合，不與哺乳動物Fc受體結合，對哺乳動物補體無固定作用等，這使得IgY在檢測診斷上具有更強的特異性和靈敏度，所以，IgY可以應用于免疫熒光試驗、ELISA試驗、免疫擴散、免疫電泳等。此外，IgY有望取代傳統的多克隆抗體生產，獲取更有效的抗體，同時也可以減少對動物的副反應，提高動物福利。' E$ }0 q  H( G5 U
IgY飼喂動物不存在殘留問題，也不會使細菌產生抗藥性。在追求飼料和食品安全的今天，應用IgY防治畜禽疾病，尤其是防治仔豬大腸桿菌感染性腹瀉效果比較好