畜牧人
標(biāo)題:
飼料防霉劑防霉效果的檢測方法
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作者:
和興
時(shí)間:
2008-5-1 06:39
標(biāo)題:
飼料防霉劑防霉效果的檢測方法
盲目挑選和使用飼料防霉劑，往往不僅事與愿違，更會(huì)危害飼料企業(yè)的經(jīng)濟(jì)利益及品牌聲譽(yù)。所以，掌握并采用科學(xué)、正確、有效的檢測方法，自我判別防霉劑產(chǎn)品之優(yōu)劣是各飼料企業(yè)維護(hù)自身利益的當(dāng)務(wù)之急。
目前用于飼料防霉劑防霉效果的檢測對比之方法有：杯碟法、最低抑菌濃度法、二氧化碳釋放法、溫度測定法、飼料常規(guī)試驗(yàn)、高溫高濕法等。杯碟法測定最大抑菌圈直徑，用其大小來定量測定其防霉效果，試驗(yàn)要求選配一種理想溶劑，要求較高、操作復(fù)雜；最低抑菌濃度法需將各種防霉劑配成濃度梯度液，工作量大，與杯碟法一樣僅適于作初選、速選之用；二氧化碳釋放法較難掌握急劇釋放
CO2
的時(shí)間，需把握臨界時(shí)段，而且所需儀器昂貴；溫度測定法利用飼料異常發(fā)熱是飼料霉變的前兆這一特點(diǎn)，它同飼料常規(guī)試驗(yàn)一樣檢測耗時(shí)很長，需
2
～
3
個(gè)月；高溫高濕法著重憑借肉眼觀察外觀，準(zhǔn)確性不理想。
本檢測方法是將現(xiàn)行的
GB13092—91
《飼料中霉菌檢測方法》具體應(yīng)用于飼料防霉劑防霉效果的對比檢測，經(jīng)多年實(shí)踐驗(yàn)證，此方法操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確；在多家飼料生產(chǎn)廠家應(yīng)用，認(rèn)為切實(shí)可行。
1
原理
根據(jù)霉菌生理特性和防霉劑防霉作用機(jī)理，選擇適宜霉菌生長而不適宜細(xì)菌生長的培養(yǎng)基，采用平皿計(jì)數(shù)方法，在一定菌液中加入一定量的防霉劑，培養(yǎng)后測定霉菌菌落總數(shù)。菌落總數(shù)越少，表明其防霉抑菌效果越佳，并根據(jù)測的數(shù)據(jù)計(jì)算出各防霉劑的抑菌率來準(zhǔn)確表示。
2
材料與設(shè)備
分析天平（感量
0
．
0001g
）、霉菌培養(yǎng)箱（
10℃
±1℃
～
50℃
±1℃
）、高壓滅菌器（電熱式蒸汽消毒器）、干燥箱（
50℃
±1℃
～
250℃
±1℃
）、水浴鍋（
30℃
±1℃
～
80℃
±1℃
）、振蕩器（往復(fù)式）、電爐、試管架、玻璃三角瓶（
250ml
）、試管（
25ml
）、平皿（
Φ9cm
）、吸管（
1ml
、
10ml
、
100ml
）、量筒（
25ml
、
100ml
）、洗耳球、無菌工作臺。
3
試劑及配制
3
．
1
高鹽察氏培養(yǎng)基
3.1.1
成分硝酸鈉
2g
、磷酸二氫鉀
1g
、硫酸鎂（
MgSO4·7H2O
）
0
．
5g
、氯化鉀
0
．
5g
、硫酸亞鐵
0
．
01g
、氯化鈉
60g
、蔗糖
30g
、瓊脂
20g
、蒸餾水
1000ml
。上述試劑，瓊脂為生化試劑，其余為分析純試劑。
3.1.2
制法用蒸餾水加溫溶解以上成分，分裝后，于
115℃
高壓滅菌
30min
。必要時(shí)，可酌量增加瓊脂。
3
．
2
稀釋液
3.2.10
．
85
％生理鹽水稱取分析純
NaCl8
．
5g
，定容
1000ml
。
3.2.2
制法
121℃
高溫高壓滅菌
30min
。
3
．
3
所有玻璃器具采用干法滅菌在
160℃
下滅菌
1
．
5h
～
2h
。
4
操作步驟
4
．
1
稱取有霉菌的飼料
25g
，放入含有
225ml
滅菌生理鹽水的
250ml
三角瓶中，置振蕩器上振蕩
30min
。
4
．
2
用
10ml
吸管吸取
10ml1∶10
的上述稀釋液于
25ml
試管中，用洗耳球及
1ml
吸管反復(fù)吹吸
50
次，使霉菌孢子分散開。取
1ml
此稀釋液加入
9ml
生理鹽水，充分混勻得
1∶100
稀釋液。取
1∶100
稀釋液
1ml
，加到
100ml
滅菌生理鹽水中，充分混勻得
1∶10000
帶有霉菌的稀釋液（此稀釋液每毫升含霉菌菌落數(shù)大致
100
個(gè)）。
4
．
3
取
1∶10000
帶菌液，用
1ml
滅菌吸管吸取
1ml
于平皿中。
4
．
4
稱取各防霉劑
0
．
2000g
分別置于
250ml
滅菌的三角燒瓶中，加滅菌后的生理鹽水
100ml
，放置振蕩器上振蕩
30min
取下，置電爐上加溫至
50℃
左右
3min
～
5min
，使防霉劑的有效成分充分溶解。
4
．
5
取帶有防霉劑（
4
．
4
）溶液
1ml
（充分混勻后再?。?，放置于帶有
1ml
霉菌孢子溶液的平皿中，搖勻。每一種防霉劑樣品均做雙皿。
4
．
6
將滅菌后涼至
45℃
左右的高鹽察氏培養(yǎng)基
15ml
～
20ml
注入各平皿中，充分混勻，待瓊脂凝固后倒置于
25℃
～
28℃
的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)
3d
后開始觀察，培養(yǎng)觀察一周。
4
．
7
每一批樣品做兩份含
1ml
霉菌不加防霉劑的空白試驗(yàn)。
4
．
8
計(jì)算以加了各種防霉劑平皿的霉菌菌落數(shù)與不加防霉劑含
1ml
霉菌的平皿的霉菌菌落數(shù)相比較，計(jì)算出各防霉劑的抑菌率。
5
注意事項(xiàng)
5
．
1
培養(yǎng)基應(yīng)煮沸后再分裝、滅菌。
5
．
2
飼料空白的霉菌孢子一定要充分打散，分布均勻。
5
．
3
在稀釋、取樣過程中，每稀釋
1
次，每取樣
1
次，均應(yīng)更換另一支干凈的滅菌吸管。
5
．
4
抑菌率的大小與霉菌空白數(shù)緊密相關(guān)，各防霉劑的抑菌率在同一次實(shí)驗(yàn)條件下才能公平比較。每皿菌落數(shù)控制在
30
～
150
，代表性比較好。
5
．
5
檢樣從開始稀釋到傾注最后一個(gè)平皿所用時(shí)間不宜超過
20min
。
5
．
6
各步操作切記無菌操作
此方法除用于檢測對比飼料防霉劑防霉效果以外，也可用于檢測飼料各原材料的帶菌程度，根據(jù)飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
GB13078—91
準(zhǔn)確判定原材料的新鮮程度，從而達(dá)到準(zhǔn)確監(jiān)控各原材料品質(zhì)之目的。同時(shí)可將加有防霉劑的培養(yǎng)物與未加防霉劑的飼料空白培養(yǎng)物做對比，結(jié)合低倍活物鏡檢，初步確定各防霉劑有效抑制霉菌的種屬，可看出各防霉劑對各種霉菌殺菌作用力。
作者:
fasetuan
時(shí)間:
2008-5-1 11:22
方法比較嚴(yán)謹(jǐn),要求也比較高,學(xué)習(xí)了,有機(jī)會(huì)試試看,謝謝了!
作者:
孤獨(dú)的狼
時(shí)間:
2008-5-2 23:40
這樣就有火眼金晶了
作者:
薛侃
時(shí)間:
2008-5-4 18:12
一般的飼料廠操作起來有難度。
作者:
liuhaiyan
時(shí)間:
2008-5-10 22:33
順便問一下各位老師，用的液體防霉劑對料溫有影響嗎？
你們用的是液體還是固體的？
作者:
ZONE
時(shí)間:
2010-2-21 11:11
本帖最后由 ZONE 于 2010-2-21 11:12 編輯
樓主提供的這個(gè)材料很有用，準(zhǔn)備試試看
還要先準(zhǔn)備帶霉菌的飼料吧？
作者:
w7418526
時(shí)間:
2010-2-23 10:34
向大家來學(xué)習(xí)一下
作者:
沸石粉
時(shí)間:
2010-2-23 10:37
頂上去讓領(lǐng)導(dǎo)進(jìn)來看下·
[ts]沸石粉 于 2010-2-23 10:37 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]
不過要是有簡單點(diǎn)的土方法介紹下更好
作者:
haochunqing
時(shí)間:
2010-2-23 10:47
謝謝樓主，多年頭痛問題，今朝解決！?。。?！
作者:
rq165531343
時(shí)間:
2010-2-23 10:55
本帖最后由 rq165531343 于 2010-2-23 10:57 編輯
現(xiàn)在有更有效檢測真菌毒素的辦法，操作簡單（20分鐘內(nèi)出結(jié)果）
上海快靈生物科技有限公司
產(chǎn)品
作者:
沸石粉
時(shí)間:
2010-2-23 11:19
樓上廣告~~~
作者:
yr888345
時(shí)間:
2010-2-23 15:41
解決實(shí)際問題了，呵呵，謝謝
作者:
沸石粉
時(shí)間:
2010-2-23 16:30
樓上可以做了，哈哈
歡迎光臨 畜牧人 (http://www.ffers.com.cn/)
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