畜牧人

標(biāo)題: 木聚糖酶酶活檢測 [打印本頁]
作者: JH_C    時間: 2008-7-16 11:40
標(biāo)題: 木聚糖酶酶活檢測
底物1%燕麥木聚糖經(jīng)冰凍保存取出后，會產(chǎn)生沉淀，能否繼續(xù)使用？
作者: tgz5637    時間: 2008-7-16 12:43
堿溶解法制備，2天內(nèi)使用無礙。熱溶解法一天以上，最好重配。

測木聚糖，燕麥木聚糖用熱溶解法制底物，不是很好選擇。底物本身的葡萄糖含量高不說，水溶性也不如樺木木聚糖。

   現(xiàn)在一直宣傳在飼料用木聚糖酶測定應(yīng)該采用燕麥木聚糖，我認(rèn)為是誤區(qū)，因為這么說的人，忘了不論你換什么底物來測某一品牌的木聚糖酶，該品牌木聚糖酶都是同一種工程菌發(fā)酵生產(chǎn)的。它的催化能力，自做成成品后就已經(jīng)固定下來了。行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)是控制不了這一點(diǎn)的。因此對該木酶的酶活檢測只存在準(zhǔn)確與否的問題，而不是什么底物的問題。樺木也好，燕麥也好，只是一個折算的問題。

[ 本帖最后由 tgz5637 于 2008-7-16 12:44 編輯 ]
作者: JH_C    時間: 2008-7-16 14:04
謝謝指點(diǎn)！
有點(diǎn)廠家采用堿溶加熱溶的方法。其實(shí)關(guān)于底物的選擇和使用，只是現(xiàn)在行業(yè)內(nèi)沒有一個統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，才會出現(xiàn)五花八門的局面。如此說來，使用樺木木聚糖的結(jié)果應(yīng)比燕麥木聚糖的低，一般會低多少呢？在其它檢測條件一致的情況下。
作者: tgz5637    時間: 2008-7-16 15:24
樺木木聚糖底物，測過兩個牌子 x502, fluck 95588, 結(jié)果相近，可以認(rèn)為幾乎等同，可能都屬于sigma公司旗下不同品牌，但原料來源一樣。按Lot號碼查看XYLOSE含量很接近，誤差更多來自標(biāo)準(zhǔn)曲線差異。
      燕麥木聚糖x0627不同年份的葡萄糖含量似乎差異大，不知是個別還是普遍，（但想想這些原料象葡萄一樣，應(yīng)該是不同年份不同含量，只是沒有紅酒那樣的價格差異罷了。） 如用x0627 ，最好用堿溶法制備底物，熱熔法不容易溶解，要長時間攪拌（確切的說是，不應(yīng)在酸性條件下溶解，溶完再調(diào)pH,可避免減少還原糖發(fā)生酸水解。但方法沒有強(qiáng)調(diào)，我自己按糖類性質(zhì)分析的。），加熱過度可能發(fā)生水解，底物空白顯色很深，導(dǎo)致結(jié)果很低。
     測定結(jié)果，不同的木聚糖酶，不同的機(jī)器測定結(jié)果，差異大 enzymex0627:enzyme0502=2~1.7

[ 本帖最后由 tgz5637 于 2008-7-16 15:28 編輯 ]
作者: JH_C    時間: 2008-7-16 16:33
非常感謝tgz的幫助！:tiaotiao:
      我使用的是S－0627的木聚糖，用堿溶法，配制當(dāng)天為均勻的混懸體，放置-16度保存第二天取出，就有沉淀析出，50度水浴30分鐘也不能重新溶解，按分析，是溶解性問題還是已經(jīng)發(fā)生水解。
作者: tgz5637    時間: 2008-7-17 09:32
燕麥x0627,x0376溶解性就是這樣的，放置久了，里面的不溶物懸浮顆粒自然沉降（我倒是希望，有人測測這些不溶物是否就是水不溶性木聚糖），但由于底物濃度一般是飽和濃度，用前攪拌，及每次加入試管前都振蕩一下。測定結(jié)果與剛配的差異不大，不攪拌吸取的是上清液，可能造成試管中底物濃度偏低。

底物放置久，3天以上，測定結(jié)果偏大（之前說的時間，也是指冷藏非冷凍）。  冷凍時間可以好長，試過一個月都可用，要加個已知酶活做參照。
作者: yzlingyz    時間: 2008-7-17 11:28
曾和其它負(fù)責(zé)技術(shù)的同事一同討論過關(guān)于用DNS方法來測木聚糖酶活性，大致認(rèn)同用DNS方法測木聚糖酶活性得出的結(jié)論和實(shí)際運(yùn)用效果不具有相關(guān)性，其只能表明如果結(jié)果酶活高，其外切酶的活性高；真正具有相關(guān)性的方法應(yīng)該是測粘度的方法，其得出的結(jié)果與實(shí)際應(yīng)用效果一致度較高，但其需要粘度計及豐富的經(jīng)驗才可，且所需時間較長。希望國家相關(guān)的機(jī)構(gòu)能盡快制定相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)。以上觀點(diǎn)只是探討，僅提供參考。
作者: tgz5637    時間: 2008-7-17 11:53
那就得有人再出8萬元，來再搞個標(biāo)準(zhǔn)了。
粘度法不是一般飼料企業(yè)能夠做的，而用染色法測的問題與濾紙法測纖維素酶的問題一樣，是在底物不飽和條件下檢測，可定性半定量比較，是較可取的方法。
作者: wangyong000216    時間: 2009-3-2 20:10
其實(shí)無論木聚糖底物是通過堿溶解也好，還是沸水煮沸溶解也罷，都有各自的局限性。前者通過添加氫氧化鈉使木聚糖溶解如緩沖液中，其中在溶解的過程中木聚糖分子結(jié)構(gòu)就已經(jīng)被強(qiáng)堿破壞了，才使得木聚糖底物全部溶于溶液中（正常的木聚糖，他的溶解性較差），因此所測出的酶活并不能真正反映出對實(shí)際飼料中木聚糖的水解活性。而后者通過沸水煮沸，然后離心取木聚糖上清液作為底物溶液，這樣測定出來的酶活則只能反應(yīng)出對可溶性木聚糖的水解活性。



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