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標題: 酶聯(lián)免疫吸附實驗詳解 [打印本頁]
作者: bluewing2003    時間: 2008-8-3 20:41
標題: 酶聯(lián)免疫吸附實驗詳解
1.  ELISA的原理
    ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持
其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定
其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復
合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相
上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物
的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，
間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。
2.  ELISA的類型
    ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑：
（1）固相的抗菌素原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；
（2）酶標記的抗原或抗體，稱為"結合物"（conjugate）；
（3）酶反應的底物。根據(jù)試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件，可設計出各種不同類型的檢測方
法。用于臨床檢驗的ELISA主要有以下幾種類型：
2.2.1  雙抗體夾心法測抗原
雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下：
1）將特異性抗體與固相載體聯(lián)結，形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。
2）加受檢標本，保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。
    洗滌除去其他未結合物質。
3）加酶標抗體，保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時
固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。
4）加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產物。通過比色，測知標本中抗原的量。
雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原，因
其不能形成兩位點夾心。
2.2.2  雙抗原夾心法測抗體
    反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。與間接法
測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋，可直接用于測定，因此其敏
感度相對高于間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常采用本法。本法關鍵在于酶標抗原的制備，應根據(jù)抗
原結構的不同，尋找合適的標記方法。
2.2.3  間接法測抗體
間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標記的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體）以檢測與固相抗
原結合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：
1）將特異性抗原與固相載體聯(lián)結，形成固相抗原。洗滌除去未結合的抗原及雜質。
2）加稀釋的受檢血清，保溫反應。血清中的特異抗體與固相抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌
后，固相載體上只留下特異性抗體，血清中的其他成份在洗滌過程中被洗去。
3）加酶標抗抗體?？捎妹笜丝谷薎g以檢測總抗體，但一般多用酶標抗人IgG檢測IgG抗體。固相免疫復
合物中的抗體與酶標抗體抗體結合，從而間接地標記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量與標本中受檢抗體
的量正相關。
4）加底物顯色
本法主要用于對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。間接法的優(yōu)點是只要變換包被抗原就可利用同
一酶標抗抗體建立檢測相應抗體的方法。
作者: zhangyy4206    時間: 2008-8-4 16:54
把以前的免疫學知識給補回來。
作者: 傲雪    時間: 2008-8-5 14:13
在實際用上 可以確診哪種疾病嗎



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