畜牧人

標(biāo)題: 討論一下酶標(biāo)儀檢測三聚氰胺的實驗方法的準(zhǔn)確性 [打印本頁]
作者: wanglinlin    時間: 2008-12-2 12:09
標(biāo)題: 討論一下酶標(biāo)儀檢測三聚氰胺的實驗方法的準(zhǔn)確性
我最近用酶標(biāo)儀做了幾次檢測三聚氰胺的實驗，試劑盒里的標(biāo)準(zhǔn)樣品在規(guī)定范圍內(nèi)，可是樣品的數(shù)據(jù)差別較大，請問有哪位也做過這個實驗，交流一下可以嗎？
作者: chen98448    時間: 2008-12-2 13:45
呵呵，好象Cargill現(xiàn)在也在用這種方法，準(zhǔn)確性到底怎么樣還不清楚，我們也想買！！
作者: wanglinlin    時間: 2008-12-2 14:19
我們也剛做了幾個樣品，成本太高了，一個試劑盒做不了幾個樣品，平均一次實驗就得一千多塊錢，做這樣的實驗實在點奢侈
作者: 月亮花    時間: 2008-12-2 23:41
你的試劑盒也太貴了吧,一般96個板孔的才不到4000元的,刨去標(biāo)準(zhǔn)4個,可以做不少的,不做重復(fù)做的更多.
去年我們就使用了測定大量的飼料原料.
假陽性主要與樣品的酸堿度有關(guān).酸性的原料或在提取時使用酸性甲醇提取時會出現(xiàn)假陽性的.需要具體情況可交流.
作者: wanglinlin    時間: 2008-12-3 09:47
請問月亮花，我們是72孔的，你們買得哪個生產(chǎn)廠家的試劑盒？我們買得是北京的，
還有標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量是有限的，如果藥品用完了，還有板孔怎么辦？（不是說同一試劑盒里是配套的，不能和其他的試劑盒混用嗎？）
作者: wanglinlin    時間: 2008-12-3 09:49
不好意思剛才看錯了，也是96孔的
作者: glory143    時間: 2008-12-3 14:34
我們也準(zhǔn)備做呢，用的美國的BEACON的
等出了結(jié)果再討論
作者: glory143    時間: 2008-12-3 14:35
對了，大家能不能把前處理的方法都貼出來啊？？我發(fā)現(xiàn)很多公司提供的方法都是不一樣的，大家可以討論下方法
作者: glory143    時間: 2008-12-3 14:42
拿提取溶劑來說，有的用60%的甲醇/水，有的用純甲醇，有的用純20mMPBS，真是五花八門
各位都用的什么？
作者: 柳粒橙    時間: 2008-12-3 14:54
不知道這種方法的準(zhǔn)確性怎樣？我公司也打算做，而且有許多公司在推銷試劑盒，我還是擔(dān)心這個試劑盒方法的準(zhǔn)確率。因為以前我發(fā)現(xiàn)用試劑盒的方法測定毒素，其穩(wěn)定性不怎么好，準(zhǔn)確率不高，也不知道是什么原因？
作者: wanglinlin    時間: 2008-12-3 16:37
我用的60%甲醇提取液
作者: wanglinlin    時間: 2008-12-3 16:40
我們初步來做穩(wěn)定性不是很好，準(zhǔn)確率因?qū)嶒灥拇螖?shù)太少現(xiàn)在很難說，我再多做幾次后，和大家交流吧  相信會有結(jié)果的
作者: 月亮花    時間: 2008-12-3 22:15
原帖由 wanglinlin 于 2008-12-3 09:47 發(fā)表
請問月亮花，我們是72孔的，你們買得哪個生產(chǎn)廠家的試劑盒？我們買得是北京的，
還有標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量是有限的，如果藥品用完了，還有板孔怎么辦？（不是說同一試劑盒里是配套的，不能和其他的試劑盒混用嗎？）


一般標(biāo)準(zhǔn)品夠用的，如果你每次都使用重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)而且次數(shù)多，可能會不夠。同一批次的標(biāo)準(zhǔn)可以混用的，用不完的板條只要和標(biāo)準(zhǔn)的板條一樣，結(jié)果沒有多大影響的，因為使用的是相對比值。

我們的盒子是美國產(chǎn)的，也是北京的代理商買的。

我每次就做一個板孔，不重復(fù)的，包括標(biāo)準(zhǔn)，你可以通過與標(biāo)準(zhǔn)顏色的差異大體判斷污染情況。

當(dāng)然由于一切影響抗體和酶結(jié)合的因素會影響結(jié)果如酸、堿、強(qiáng)離子、溫度會對結(jié)果有影響。還有，提取方法中提取率也是一個問題，不能使用液相或液質(zhì)類似的方法提取，單純的甲醇或60%甲醇水提取率不高，如果樣品與提取液的比例不當(dāng)，也不能完全提取出。如果使用含有酸的提取液，或樣品酸性強(qiáng)，會造成假陽性，而堿性的樣品會造成假陰性。

我們花了很多時間和錢財才搞清這些問題。
作者: chenchen123    時間: 2008-12-4 08:39
我們送檢測部門檢測，同一個樣檢出不同的判斷結(jié)果，弄得我們都不知道怎么判定，最后只好再花大價錢定量檢測了。
作者: whm0728    時間: 2008-12-4 10:46
@@004: @@004: 有點亂，有點亂。
可惡的三聚氰胺。
作者: wanglinlin    時間: 2008-12-4 11:27
請問月亮花,能把你的提取方法的過程詳細(xì)說一下嗎?謝謝
作者: wanglinlin    時間: 2008-12-4 11:45
請問月亮花,能把你們提取方法過程詳細(xì)的說一上嗎?
還有酶標(biāo)儀在讀數(shù)時,讀完一遍后 重新讀時發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)就有變化,(中間間隔3-5分鐘)   是怎么回事?
作者: 月亮花    時間: 2008-12-4 18:45
原帖由 wanglinlin 于 2008-12-4 11:27 發(fā)表
請問月亮花,能把你的提取方法的過程詳細(xì)說一下嗎?謝謝

我們目前使用純甲醇按1：10提取，然后取100微升再稀釋10-20倍，這樣2-50ppm的污染大體就可以測定了。需要有空白和陽性對照以控制檢測質(zhì)量。
由于是顯色反應(yīng)，色源物質(zhì)會在一定時間內(nèi)發(fā)生變化的，可以立即讀數(shù)，發(fā)生變化也不影響結(jié)果，因為要根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線及吸光度相對比值計算結(jié)果的。
作者: cuger-321    時間: 2008-12-4 19:40
請教月亮花：當(dāng)你們遇到假陽性怎么辦呢？在操作中能否避免假陽性？知道的朋友可以研究哈；
作者: cuger-321    時間: 2008-12-4 19:45
我們剛測的時候也遇到不少問題，電話質(zhì)詢了BEACON的試劑盒公司，針對干寵物飼料提供了新的萃取方法，明天發(fā)給大家哈，
作者: wanglinlin    時間: 2008-12-5 15:11
請教月亮花。酶標(biāo)儀使用前需要預(yù)熱嗎？
作者: wanglinlin    時間: 2008-12-5 15:26
月亮花，可不可以把你具體實驗操作步驟給貼下來，（物別是每一步需注意的事項）   特別是空白等對照實驗，（因為我今天又做了一遍標(biāo)準(zhǔn)還行，可以其他的樣品數(shù)據(jù)有點不太可信）。

還有，酶標(biāo)儀在使用前需要預(yù)熱嗎？

不好意思麻煩了
作者: 月亮花    時間: 2008-12-6 14:42
原帖由 cuger-321 于 2008-12-4 19:40 發(fā)表
請教月亮花：當(dāng)你們遇到假陽性怎么辦呢？在操作中能否避免假陽性？知道的朋友可以研究哈；

為避免假陽性，要對不同的樣品分類檢測，根據(jù)已經(jīng)確定有或沒有污染的樣品進(jìn)行檢測，檢查造成假陽性的原因。一般是槍頭污染、提取管污染、提取方法污染及提取液本身造成等原因。
作者: 月亮花    時間: 2008-12-6 14:46
原帖由 wanglinlin 于 2008-12-5 15:11 發(fā)表
請教月亮花。酶標(biāo)儀使用前需要預(yù)熱嗎？

應(yīng)該預(yù)熱至少半小時吧，以便光源穩(wěn)定設(shè)備處于良好狀態(tài)。



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