畜牧人

標(biāo)題: 蛋白指標(biāo)檢測遇到的幾個(gè)問題!(急盼回復(fù),43樓又有新問題) [打印本頁]
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-2-25 20:38
標(biāo)題: 蛋白指標(biāo)檢測遇到的幾個(gè)問題!(急盼回復(fù),43樓又有新問題)
本帖最后由 徐徐0 于 2009-3-11 22:31 編輯

最近用凱氏定氮法測定飼料粗蛋白,每次出的結(jié)果都與實(shí)際的數(shù)字相差好大
我找了一下原因,個(gè)人認(rèn)為可能產(chǎn)生結(jié)果誤差的在這幾方面:
指示劑:按國標(biāo)的方法配制了一份(溴鉀酚綠與甲基紅3:1體積混合),按照學(xué)校培訓(xùn)教材上面的也配制了一份(0.1%的甲基紅乙醇溶液與0.5%溴鉀酚綠乙醇溶液等體積混合)后面附上標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度時(shí)加入指示劑的顏色
0.05mol/LHCL標(biāo)準(zhǔn)溶液:4.5mlHCL溶于1000ml水中
還有就是標(biāo)定濃度時(shí)需要用的基準(zhǔn)物:無水碳酸鈉(我用的是分析純級(jí)的)
在凱氏燒瓶中加入試樣的時(shí)候,部分試樣沾附在瓶壁,殘留于紙上!

我大概的查了能出錯(cuò)的幾個(gè)地方,指示劑做了2種,雖然顯示的顏色不一樣,但標(biāo)定的結(jié)果,得到的數(shù)字是一樣的!
標(biāo)準(zhǔn)溶液也重新做了一份,但最終檢測的結(jié)果,得出的蛋白數(shù)字跟實(shí)際還是相差太大!(測了幾個(gè)樣,棉粕只得到32個(gè)蛋白,實(shí)際是40左右;菜粕得到32左右,實(shí)際在36左右)

最近剛接觸檢測這事,碰上的問題還不懂怎么解決,不知道我的描述是否清楚,只盼望搞同行的能幫忙疏通一下思路!
小弟我在此先謝過各位啦!
作者: 牛郎阿飛    時(shí)間: 2009-2-25 20:51
樓主很會(huì)思考，繼續(xù)努力
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-2-25 20:52
多謝沙發(fā)的支持,頂上去,繼續(xù)尋求幫助!
作者: 五豐    時(shí)間: 2009-2-25 21:40
標(biāo)定濃度時(shí)需要用的基準(zhǔn)物:無水碳酸鈉（注意：必須得優(yōu)級(jí)純或基準(zhǔn)級(jí)?。┳鰳?biāo)定用的無水碳酸鈉一定要在270~300°C的電熱箱里烘干至恒重，再有：一定要做3個(gè)以上的平行試樣，而且注意在電爐上加熱時(shí)的次數(shù)（一般是兩到三次，必須得把二氧化碳趕跑干凈?。┯?jì)算結(jié)果的時(shí)候一定要看看幾份結(jié)果的相對(duì)平均偏差是不是在0.1%范圍內(nèi)，如果不是就得重做。
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-2-25 21:49
首先非常感謝五豐的回答,但我又有了幾個(gè)問題
如果是從市場上剛買回來的那種無水碳酸鈉,還需要烘干這步驟么?
還有就是,我用的是蒸餾水,電爐加熱的次數(shù)是否沒必要那么多次啦?
作者: 469013250    時(shí)間: 2009-2-25 22:03
無水碳酸鈉需要烘干的。
作者: 五豐    時(shí)間: 2009-2-25 22:06
本帖最后由 五豐 于 2009-2-25 22:22 編輯

無論是什么時(shí)候買的無水碳酸鈉都必須經(jīng)過烘干這一步驟；實(shí)驗(yàn)用水一般都是指蒸餾水，電爐加熱的次數(shù)則要依據(jù)你滴定時(shí)溶液恰好由綠色變?yōu)榘底仙?，再放到電爐上加熱煮沸兩分鐘，這時(shí)溶液不變色（不變回原來的綠色）才可以。
作者: 五豐    時(shí)間: 2009-2-25 22:12
說明一下，我一般都要進(jìn)行兩次加熱。一次加熱和三次加熱的現(xiàn)象也有過，但是不多，4次以上的就沒有出現(xiàn)過。
作者: 五豐    時(shí)間: 2009-2-25 22:18
化學(xué)純、分析純與基準(zhǔn)試劑、優(yōu)級(jí)純差別很大的。所以你標(biāo)定溶液濃度一定要用基準(zhǔn)試劑或優(yōu)級(jí)純。
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-2-25 22:22
本帖最后由 徐徐0 于 2009-2-25 22:24 編輯

非常感謝五豐的作答,又學(xué)到了不少!
暗紫跟暗紅,哪個(gè)更準(zhǔn)確些?
最主要的問題,實(shí)驗(yàn)結(jié)果跟實(shí)際偏差太大,會(huì)是在哪些地方出差錯(cuò)呢?
按說,AR的無水碳酸鈉和PT的只在標(biāo)定HCL濃度時(shí)用到,就"C"這一個(gè)數(shù)據(jù)而已(我用AR級(jí)的標(biāo)定0.05mol/l的HCL3份平行樣結(jié)果在0.05683左右,這個(gè)值是否偏高?),不可能影響到那么多的蛋白數(shù)字吧!(有時(shí)候相差10多個(gè)蛋白的)
作者: 五豐    時(shí)間: 2009-2-25 22:42
確切來說應(yīng)該是暗紫。我覺得暗紅的話你的滴定量就有些過了。
用AR級(jí)的標(biāo)定0.05mol/l的HCL3份平行樣都能在0.05683左右,這個(gè)值是否偏高?
不能說它高或低，只能說你不能用AR級(jí)的無水碳酸鈉來做基準(zhǔn)物。
如果你的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度不準(zhǔn)確，在做到粗蛋白較高的試樣時(shí)，消耗的標(biāo)準(zhǔn)溶液越多，誤差就越大。
能影響到那么多的蛋白數(shù)字(有時(shí)候相差10多個(gè)蛋白的)時(shí)：你要檢查操作步驟，每一個(gè)過程都要仔細(xì)檢查，比如在凱氏燒瓶中加入試樣的時(shí)候,部分試樣沾附在瓶壁,殘留于紙上這樣是不行的，說明你的凱氏燒瓶不夠干燥。
作者: 五豐    時(shí)間: 2009-2-25 22:45
如果你的各項(xiàng)步驟都沒有問題，儀器沒有問題，標(biāo)準(zhǔn)溶液也沒有問題，應(yīng)該考慮是不是這種原料摻了假，用其他方法把這個(gè)“假”揪出來
作者: 五豐    時(shí)間: 2009-2-25 22:49
這些方法還不行的話，你再送到權(quán)威部門進(jìn)行檢驗(yàn)，看看你跟他們的結(jié)果是否一致。還是不行的話，我也服了你了。
作者: jiaojichao001    時(shí)間: 2009-2-26 10:21
首先要驗(yàn)證鹽酸的濃度的準(zhǔn)確性，其次要看滴定終點(diǎn)，還有就是設(shè)備的密閉性。一項(xiàng)開項(xiàng)的搞好了，再看看
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-2-26 20:01
標(biāo)題: 蛋白指標(biāo)檢測遇到的幾個(gè)問題!
本帖最后由 徐徐0 于 2009-2-26 20:12 編輯

今兒為這事專門請(qǐng)教了在行業(yè)干了好多年的人
首先從開始的準(zhǔn)備工作就出錯(cuò)了!
用硫酸銨做校準(zhǔn)試驗(yàn),這步,省了,出錯(cuò)就從這步開始的
然后是指示劑,應(yīng)該是等體積混合的是正確的
再有就是試樣的稱量可能存在錯(cuò)誤(待會(huì)我貼上2張圖片,看看咱那天平的讀書是否正確)
還有在加樣的時(shí)候損失了好一部分,影響了準(zhǔn)確的數(shù)字
最后就是在蒸餾的過程中,漏氣也算是主要原因了!
綜上所述,10多個(gè)蛋白的走失,應(yīng)該能找明原因了吧!

[ts]徐徐0 于 2009-2-26 20:05 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]

補(bǔ)充的天平讀數(shù),我讀的是0.9372g
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-2-26 20:08
(, 下載次數(shù): 3) (, 下載次數(shù): 0) (, 下載次數(shù): 0)
作者: yuyiyo2004    時(shí)間: 2009-2-26 22:04
這天平夠古老的啊
作者: LXSLDXH0521    時(shí)間: 2009-2-26 22:05
我還發(fā)現(xiàn)消化的溫度與時(shí)間對(duì)蛋白也有很大的影響
作者: 粗蛋白    時(shí)間: 2009-2-26 23:11
天平讀數(shù)為33.9372克. 樓主在蒸餾同一個(gè)樣品時(shí)可多蒸幾次,看這幾次所耗的鹽酸是否接近,若懸殊大證明有漏汽現(xiàn)象..
作者: 冰太陽    時(shí)間: 2009-2-27 10:19
還是再檢查一下你的定氮儀的氣密性，如果氣密性不好，那結(jié)果肯定不準(zhǔn)確的。還有就是冷凝效果不好，硼酸的吸收也不好，結(jié)果也不準(zhǔn)啊，
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-2-27 10:44
19# 粗蛋白
每份樣我都蒸餾了2次,消耗的鹽酸也幾乎一樣,有時(shí)候相差就0.2ml左右
作者: tj4587_78    時(shí)間: 2009-2-27 10:55
本帖最后由 tj4587_78 于 2009-2-27 11:00 編輯

天平是TG328A?
我讀的是33.9372g

[ts]tj4587_78 于 2009-2-27 11:03 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]

很高興樓主的問題已經(jīng)解決了!
從中我們也學(xué)習(xí)了很多知識(shí)!
謝謝樓主!
作者: littlepigwsw    時(shí)間: 2009-2-27 11:21
配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度和規(guī)定的濃度相對(duì)偏差不得大于5%，你配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度和標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對(duì)偏差已經(jīng)達(dá)到6.39%，超標(biāo)了
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-2-27 11:25
24# littlepigwsw
請(qǐng)問你是怎么算出6.39%這個(gè)數(shù)字的?
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-2-27 11:28
21# 冰太陽
如果漏氣,會(huì)是在哪個(gè)部位最容易有漏氣現(xiàn)象呢?
在蒸餾的過程中,蒸汽發(fā)生器的排氣管那我用夾子夾的不夠緊,這在最后的結(jié)果中會(huì)影響那么大嗎?
還有冷凝管那的水流該要多大的!?

沒想到,看似簡單厄的東西,隱藏的問題還這么多!復(fù)雜阿!
作者: 瞬間    時(shí)間: 2009-2-27 12:04
國標(biāo)的混合指示劑是等體積混的，你再看看。
你測一下硫酸銨呢
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-2-27 14:59
27# 瞬間
指示劑看錯(cuò),還是按等體積配制為準(zhǔn)
硫酸銨還沒做,等待結(jié)果中!
作者: 曉風(fēng)    時(shí)間: 2009-2-27 19:25
標(biāo)定時(shí)建議先測算一下需要HCL標(biāo)準(zhǔn)溶液的數(shù)量；
加熱后滴定至終點(diǎn)時(shí)的顏色應(yīng)有綠色變?yōu)槌躏@的暗紫紅色。
碳酸氫鈉必需為基準(zhǔn)級(jí)。
四個(gè)平行樣之間的誤差應(yīng)在合理的范圍。
作者: zsp123    時(shí)間: 2009-2-27 19:54
用硫酸銨做標(biāo)定看看是否在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-2-27 20:25
29# 曉風(fēng)
怎么NaOH也要基準(zhǔn)級(jí)的啦?
作者: 五豐    時(shí)間: 2009-2-27 23:55
如果漏氣,會(huì)是在哪個(gè)部位最容易有漏氣現(xiàn)象呢?
1.會(huì)在倒入分解液的入口處（此處一定要加水密封）
2.會(huì)在蒸餾室與冷凝管接口處
3.會(huì)在冷凝管接口與硼酸吸收液之間
作者: 五豐    時(shí)間: 2009-2-28 00:10
在蒸餾的過程中,蒸汽發(fā)生器的排氣管那我用夾子夾的不夠緊,這在最后的結(jié)果中會(huì)影響那么大嗎?
蒸汽量小時(shí)影響不大；蒸汽壓力過大時(shí)反而要排汽。
還有冷凝管那的水流該要多大的!?
以硼酸接收液不燙手為宜
怎么NaOH也要基準(zhǔn)級(jí)的啦?
未必，分析純就可以了
作者: 在路上    時(shí)間: 2009-2-28 09:27
很久沒有做過蛋白方面的化驗(yàn)了,有些記不清楚什么步驟了,但是我覺得只是顏色的變化不會(huì)使蛋白質(zhì)的測定有那么大的差距,你應(yīng)該做一下空白看看!
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-2-28 18:06
特別感謝五豐的指教!受益頗多吶!
不問還不知道,細(xì)節(jié)之處,要注意的還真多!
等咱這東西都配套齊全了,按著這些該注意的我先做一個(gè)試試去!
作者: wyg    時(shí)間: 2009-3-1 11:12
真是一家懷舊的企業(yè),呵呵.如果是這些地方出了問題,那樓主真該好好補(bǔ)補(bǔ)課了.
作者: 魚粉NO1    時(shí)間: 2009-3-2 10:57
想不到檢測還有還有這么大學(xué)問
作者: cnm308    時(shí)間: 2009-3-2 11:25
呵呵！原因都找到了，慢慢去改就 可以了 ！最有可能是定氮儀漏氣，定氮儀的管子是最容易破口漏氣的地方，找找看看被！
作者: 小螞蚱    時(shí)間: 2009-3-4 14:59
對(duì)于指示劑的配制問題我也有很多疑問，為什么不同版本有不同的方法？而實(shí)際操作中我又該用哪種比較合適呢？有什么統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)嗎？希望各位不吝賜教！在此謝過了！:hihi:
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-3-4 17:47
指示劑還是按照實(shí)驗(yàn)需要配置為好
我就是看錯(cuò)了才會(huì)自以為對(duì)的
實(shí)際操作的時(shí)候還是按照國標(biāo)要求的做吧!
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-3-10 14:46
帶著問題，我又來請(qǐng)教了
硫酸銨的烘干，我是放在300度的馬弗爐里進(jìn)行的，坩堝不全蓋上，可以么？

硫酸銨的校準(zhǔn)試驗(yàn)，是不是只有把試樣替換成硫酸銨這步，其余都參照試樣的做法進(jìn)行?

急盼回復(fù)!
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-3-11 22:30
酸銨試驗(yàn)已經(jīng)做了,結(jié)果都是偏低,三次都在19.50%左右,跟正常值相差很多
最后重裝了一下設(shè)備,測的一次21.8%的,緊接著又是一份結(jié)果只有18%左右
我就搞不懂了,還會(huì)有什么地方引起試驗(yàn)失敗呢?

操作不當(dāng):蒸汽量小?在加消化液之后加氫氧化鈉的時(shí)候排廢液的管子沒關(guān)著有影響么?
關(guān)了反而會(huì)讓冷凝管回吸硼酸吸收液,是不是回吸有問題?
還有,煮水的瓶子里,指示劑有點(diǎn)小問題會(huì)不會(huì)有影響?

急死人了,就等著測蛋白質(zhì)了,這會(huì)又碰上這么多問題!一大堆原料等著檢驗(yàn),該如何是好!
作者: Myra    時(shí)間: 2009-3-12 13:07
以前曾經(jīng)遇到過硼酸的質(zhì)量會(huì)影響其吸收率，可以換一個(gè)廠牌的硼酸試試。
作者: 綠緣    時(shí)間: 2009-3-12 13:56
在蒸餾的過程中用試紙可以試出裝置是否漏氣。
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-3-12 18:22
試紙?什么類型的試紙?
怎么操作的?
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-3-12 18:27
今天又做了幾份,結(jié)果都在20%左右
也做了份空白實(shí)驗(yàn),吸收液始終是酒紅色,時(shí)間長些稍微淡了點(diǎn),是不是就不需要滴定啦?

還有,發(fā)現(xiàn)才做幾份樣,水就燒掉了一半了,這屬正常吧?
作者: zxhui1030    時(shí)間: 2009-3-12 19:34
試驗(yàn)中是用硼酸來接收氨氣的，既然說漏氣，應(yīng)該說的是氨氣吧？
這樣用pH試紙，測是不是顯堿性就可以了吧。我對(duì)實(shí)際操作也不是很懂，不知道說得對(duì)不對(duì)。
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-3-12 21:56
煩人吶,一個(gè)蛋白質(zhì)都搞不定,這工作以后還怎么做撒!?
漏氣,氨氣的一部分逃逸,反應(yīng)不完全,致使數(shù)據(jù)偏低,是這樣么?
作者: 悠然南山    時(shí)間: 2009-3-12 22:14
哇，一個(gè)蛋白測定還有這么多問題，看來理論一定要聯(lián)系實(shí)際啊，學(xué)習(xí)了
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-3-12 22:30
頂上去,繼續(xù)等待答案!
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-3-13 18:12
誰能告訴我,硫酸銨校準(zhǔn)試驗(yàn)中結(jié)果偏小是哪些因素引起的?
冷凝管磨口處我都用凡士林涂抹了一遍,有擰的很緊,漏氣覺得不大可能了

在加消化液的時(shí)候,接廢液的管子應(yīng)該是打開的狀態(tài)吧?然后再把吸收液沒住冷凝管出口是么?
在注入NaOH的時(shí)候,接廢液的管子應(yīng)該關(guān)上還是等注入之后再關(guān)上?

我做了好幾次校準(zhǔn)試驗(yàn)了,怎么做都是相同的結(jié)果,偏小!只有19%~20%!嚴(yán)重不解阿!
作者: LXSLDXH0521    時(shí)間: 2009-3-14 13:01
加消化液時(shí) ,接廢液的管子應(yīng)該是夾緊的, 而通蒸汽的管子要打開,否則消化液會(huì)當(dāng)廢水排出。然后再把吸收液沒住冷凝管出口。再開始蒸餾即可
作者: xipuzl825168439    時(shí)間: 2009-3-14 16:23
注入NaOH的時(shí)候你是不是按標(biāo)準(zhǔn)緩緩注入的呀，一定要保持注入口有充分的液體覆蓋，要不產(chǎn)生的氨氣就會(huì)由上跑出，結(jié)果也會(huì)偏低的。
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-3-14 16:35
天吶，我可都是按照規(guī)矩的做法操作的，結(jié)果老是跟咱開玩笑
還一次比一次小了
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-3-14 16:42
53# LXSLDXH0521
我的問題是，按照劫匪也的管子關(guān)上的操作方法，在加入NaOH的時(shí)候液體就在冷凝管中被回吸了！
有一次還回吸到了反應(yīng)室里導(dǎo)致失敗
緩緩注入NaOh的時(shí)候，回吸是否會(huì)影響最后結(jié)果！？我聽一位老手說，不會(huì)有回吸的現(xiàn)象的！這是怎么回事??？

這些日子，為了這套裝置，這中檢測方法，弄得我都快沒信心了，一次一次的數(shù)據(jù)偏差，卻找不著原因，真是郁悶至極！
PS：所有試劑已全部重新配制了，標(biāo)準(zhǔn)溶液重新標(biāo)定，實(shí)驗(yàn)裝置重新安裝！
不解，嚴(yán)重不解！
作者: 橄欖枝    時(shí)間: 2009-3-23 12:11
你的鹽酸沒有標(biāo)對(duì)如果標(biāo)對(duì)的話不是19應(yīng)該是21，19
作者: css19820416    時(shí)間: 2009-5-24 17:19
做化驗(yàn)真的非常嚴(yán)謹(jǐn)，多多學(xué)習(xí)，繼續(xù)努力呀
作者: xujiahong0731    時(shí)間: 2009-5-31 15:00
在電爐上需要加熱那么多次嗎????我每次只加熱一次啊.先滴定到暗紫色,然后加熱2分鐘,冷卻再滴定不就可以了嗎????
作者: 徐徐0    時(shí)間: 2009-5-31 15:24
加熱一次,變顏色之后繼續(xù)加熱還是會(huì)恢復(fù)之前的顏色的!
多加熱幾次,顏色變化就不是很明顯了!
作者: scny08    時(shí)間: 2009-5-31 16:17
給我的第一個(gè)感覺是，，瓶子沒洗干凈。。。。。。。。。。滴定終點(diǎn)變異不易區(qū)分，所以造成讀書誤差大。
作者: any_wyb    時(shí)間: 2009-6-3 22:12
首先看那四個(gè)錐形瓶的顏色我覺得是指示劑可能出問題了，以前我們也是蒸餾出來的是藍(lán)色的，后來重新配置了就變成綠色了，而且藍(lán)色滴定時(shí)變色是突變的
作者: liuyuejin687    時(shí)間: 2009-6-4 08:40
學(xué)習(xí)，學(xué)習(xí)。我做硫酸銨結(jié)果也不對(duì)，消化液經(jīng)常倒吸，做不成
作者: lijian1985515    時(shí)間: 2009-12-26 20:23
酸銨試驗(yàn)已經(jīng)做了,結(jié)果都是偏低,三次都在19.50%左右,跟正常值相差很多
最后重裝了一下設(shè)備,測的一次21.8%的 ...
徐徐0 發(fā)表于 2009-3-11 22:30

換用杜馬斯燃燒法定氮吧，你這個(gè)帖子里面提到的問題都不用考慮了，只管進(jìn)樣就行了。



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