畜牧人

標(biāo)題: 抗氧化酶的測(cè)定方法 [打印本頁(yè)]
作者: cuiyming    時(shí)間: 2009-3-31 08:52
標(biāo)題: 抗氧化酶的測(cè)定方法
抗氧化酶（SOD、CAT、GXP）能否用放射免疫法測(cè)定啊？哪位老師解答一下??！ 謝謝！！
作者: 李業(yè)明    時(shí)間: 2009-3-31 09:10
這個(gè)我真不懂！請(qǐng)專(zhuān)業(yè)老師指點(diǎn)一下吧！
作者: fansssss    時(shí)間: 2009-4-11 13:34
這個(gè)用一般的分光光度計(jì)比色法就解決了，為啥要用放免呢，我們通常買(mǎi)南京建成的試劑盒來(lái)測(cè)的。
作者: xmzhao    時(shí)間: 2009-4-14 11:23
血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性的測(cè)定：
通過(guò)黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基（O
2.-），后者氧化羥胺形成亞硝酸鹽，在顯色劑的作用下呈現(xiàn)紫紅色，用可見(jiàn)分光
光度計(jì)測(cè)其吸光度。當(dāng)被測(cè)樣品中含SOD時(shí)，則對(duì)超氧陰離子自由基有專(zhuān)
一性的抑制作用，使形成的亞硝酸鹽減少，比色時(shí)測(cè)定管的吸光度值低于
對(duì)照管的吸光度值，通過(guò)公式計(jì)算可求出被測(cè)樣品中的SOD活力。高等動(dòng)
物細(xì)胞內(nèi)只有兩種SOD即銅鋅－SOD（CuZn-SOD）與錳－SOD（Mn-SOD），
二者相加等于總SOD（T-SOD）。本試驗(yàn)測(cè)定的即為血清與乳清中的總SOD
活力。
試劑組成與配制
試劑一：液體10ml×1瓶（天冷時(shí)或放冰箱會(huì)有部分結(jié)晶析出，需熱
水浴溶解后再用），用時(shí)加熱蒸餾水稀釋至100ml。
試劑二：液體7ml×1瓶，4－10℃保存。
試劑三：液體7ml×1瓶，4－10℃保存。
試劑四：液體0.5ml×1支，4℃保存，不可冷凍；4號(hào)稀釋液7ml×1
瓶，4℃保存；用時(shí)二者按1：14稀釋?zhuān)梢砸淮蜗♂專(zhuān)部梢苑执蜗♂尅?br /> 配好的4號(hào)試劑4℃保存，不可冷凍。配好的可保存2－3個(gè)月。注：所
用吸嘴必須為專(zhuān)用且消毒處理過(guò)。
試劑五：粉劑×1支，用時(shí)加70-80℃蒸餾水75ml溶解后備用，若加
熱過(guò)程中水分蒸發(fā)減少，此時(shí)必須用蒸餾水補(bǔ)充至75ml，配好后的試劑
避光4℃冷藏。
試劑六：粉劑1支，用時(shí)加雙蒸水75ml溶解后備用，配好后的試劑
避光4℃冷藏保存。
顯色劑的配制：按照5號(hào)試劑：6號(hào)試劑：冰醋酸＝3：3：2的體積
比配成顯色劑，4℃避光冷藏。
操作步驟
按表1-3-1進(jìn)行
表1-3-1（Table1-3-1）SOD的測(cè)定過(guò)程
試劑測(cè)定管對(duì)照管
試劑一（ml）1.0 1.0
樣品（ml）a*
蒸餾水（ml）a*
試劑二（ml）0.1 0.1
試劑三（ml）0.1 0.1
試劑四（ml）0.1 0.1
用旋渦搖勻器充分混勻，置37℃恒溫水浴40分鐘
顯色劑（ml）2 2
勻，室溫放置10分鐘，于波長(zhǎng)550nm處，1cm光徑比色杯，蒸餾水調(diào)
比色。
注：其中a*為樣品的取樣量，血清取50μl。
結(jié)果計(jì)算
SOD活力（U/ml）＝（對(duì)照管OD值－測(cè)定管OD值）/對(duì)照管OD值×
2×反應(yīng)體系的稀釋倍數(shù)×樣品測(cè)定前的稀釋倍數(shù)



碩士論文中的方法，希望有用！



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