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畜牧人
標(biāo)題:
魚(yú)粉中組胺快速測(cè)定方法（請(qǐng)幫我看看著個(gè)方法有什么問(wèn)題么？）
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作者:
口合口合
時(shí)間:
2009-8-24 19:26
標(biāo)題:
魚(yú)粉中組胺快速測(cè)定方法（請(qǐng)幫我看看著個(gè)方法有什么問(wèn)題么？）
魚(yú)粉中組胺快速測(cè)定方法
1、
原理：
樣品中的組胺用甲醇提取，再與對(duì)氨基苯磺酸和亞硝酸鈉反應(yīng)生在成黃色產(chǎn)物，其吸光度與樣品中的組胺含量呈正比。
2、
儀器和試劑
儀器：分光光度計(jì)、超聲提取儀、恒溫水浴箱
試劑：⑴對(duì)氨基苯磺酸溶液（
1.7G/L
）
稱(chēng)取
0.17G
對(duì)氨基苯磺酸
,
用
0.1MOL/LNAOH
溶液溶解
,
定容至
100ML.
⑵亞硝酸鈉溶液
(17G/L)
稱(chēng)取
1.7
亞硝酸鈉
,
用水溶解
,
定容至
100ML,
用時(shí)與
(1+30)HCL
等量混合
(
移取前混合
)
⑶組胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液
(1MG/ML)
冰箱內(nèi)
準(zhǔn)確稱(chēng)取
0.2767G
于
100
±5℃干燥2H的磷酸組胺，用水定容至100ML
⑷組胺標(biāo)準(zhǔn)使用液（0.02MG/ML）
準(zhǔn)確吸取
1.00ML
組胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于
50ML
棕色容量瓶中
.
用水定容
.
3
、樣品處理
稱(chēng)取
0.5g
樣品于
25ml
比色管中
,
加入
20ml
甲醇
,
在
4
6
℃水浴上加熱30min,過(guò)濾,渣用
甲醇洗滌兩次
,
合并濾液
,
用甲醇定容至
100ml,
避光保存?zhèn)溆?/font>
.
4
、測(cè)定
（
1
）標(biāo)準(zhǔn)曲線：準(zhǔn)確吸取組胺標(biāo)準(zhǔn)使用液空白
0.0
；
0.1
；
0.25
；
0.5
；
1.0ML
于
10ML
具塞比色管中，分別加入
5.0ml
對(duì)氨基苯磺酸溶液
,1.0ml
亞硝酸鈉溶液
,
定容至刻度，搖勻，靜置
10min
后在
420nm
下比色。
（
2
）試樣測(cè)定：準(zhǔn)確吸取測(cè)定樣濾液
1.0ml
于
10ml
具塞比色管中，分別加入
5.0ml
對(duì)氨基苯磺酸溶液
,1.0ml
亞硝酸鈉溶液
,
定容至刻度，搖勻，靜置
10min
后在
420nm
下比色。
5
、結(jié)果計(jì)算
X= M1*100/ M2
式
中
:
X
—試樣中組胺的含量，單位為毫克每千克
(mg/kg );
M1
—由曲線查得的測(cè)定試樣中組胺的質(zhì)量，單位為微克
(ug);
M2
—試樣質(zhì)量，單位為克（
g
）。
作者:
口合口合
時(shí)間:
2009-8-24 19:38
本帖最后由 口合口合 于 2009-8-24 19:41 編輯
有以下幾個(gè)疑問(wèn)：
1、原理的反應(yīng)方程式？（我有機(jī)化學(xué)不太好,嘿嘿）
2、1mg/ml的組胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液到底是組胺，還是磷酸組胺，還是一水磷酸組胺？（用的是國(guó)藥集團(tuán)的一水磷酸組胺鹽來(lái)配制的）
3、組胺標(biāo)準(zhǔn)使用液定容后是橙紅色，可測(cè)定試樣定容后確實(shí)黃色（與測(cè)磷時(shí)一樣的顏色），為什么？（難道橙紅色就是很深很深的黃色？@@007:）
4、組胺標(biāo)準(zhǔn)使用液比色時(shí)，數(shù)值一直會(huì)降低，我們只取第一次讀的數(shù)值。但測(cè)定試樣比色時(shí)數(shù)值卻一直都很穩(wěn)定，這又是為什么？
5、國(guó)標(biāo)是在480nm下比色，為什么這個(gè)方法是在420nm下比色呢？
6、有些測(cè)定樣在水浴過(guò)濾后顏色很深，可是卻比顏色淺的組胺低，為什么？（按原理來(lái)說(shuō)水浴是使組胺溶解在甲醇里，照理不是組胺越高顏色越深么？）
[ts]口合口合 于 2009-8-26 13:11 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]
為什么我的問(wèn)題都沒(méi)人回答呢，郁悶了！:wugu:
作者:
286910223
時(shí)間:
2009-12-10 08:04
這是一個(gè)顯色反應(yīng)，生成有色復(fù)合物，具體分子式我也不知道。
做儲(chǔ)備液之前不是烘干過(guò)，已經(jīng)是無(wú)水的磷酸組胺了，但稱(chēng)量的0.2767g是折算成組胺了的，所以說(shuō)儲(chǔ)備液是1mg/ml的組胺溶液。
紅色墨水咋一看還像黑墨水呢……
第4個(gè)不知道，不過(guò)只要是每次做標(biāo)曲與樣品同時(shí)比色，應(yīng)該可以避免這個(gè)問(wèn)題。
那個(gè)波長(zhǎng)要看顯色無(wú)的吸光能力啊，在那個(gè)波長(zhǎng)的吸光能力好，還跟濃度成正比就可以了。只要你做出來(lái)的標(biāo)曲r值兩三個(gè)九以上，吸光度還可以就ok啦
甲醇提取物肯定不只組胺一種，相識(shí)相容吧。應(yīng)該跟魚(yú)粉的加工工藝之類(lèi)的關(guān)系也很大吧。
作者:
xuridongshengyx
時(shí)間:
2009-12-26 16:03
超聲提取儀這不沒(méi)派上用場(chǎng)嘛
作者:
286910223
時(shí)間:
2010-1-3 11:58
魚(yú)粉用甲醇提取的時(shí)候可以用超聲提取儀啊，更加完全咯
作者:
sea0920
時(shí)間:
2010-1-3 15:10
感謝樓主分享
[ts]sea0920 于 2010-1-3 15:10 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]
有空做個(gè)試試看
作者:
csf123
時(shí)間:
2010-2-3 23:07
哪里來(lái)的方法哦，可做過(guò)方法可靠性評(píng)價(jià)嗎？
作者:
mcs820208
時(shí)間:
2010-5-21 15:58
這個(gè)方法好像很不準(zhǔn)確，在我們測(cè)定的過(guò)程中那個(gè)數(shù)字一直在不停的跳動(dòng)，而且試樣的顏色也發(fā)生變化，很不準(zhǔn)確呢！
作者:
glory143
時(shí)間:
2010-5-22 09:55
組胺在甲醇中的溶解性怎么樣??用純甲醇提取?
歡迎光臨 畜牧人 (http://www.ffers.com.cn/)
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