畜牧人
標題: 飼料中粗蛋白檢測 [打印本頁]
作者: wenlichun2009 時間: 2009-9-22 09:54
標題: 飼料中粗蛋白檢測
GB/T6432—94飼料中粗蛋白測定方法
本標準參照采用ISO 5983—1979 《動物飼料──氮含量的測定和粗蛋白含量計算》。
本標準規(guī)定了飼料中粗蛋白含量的測定方法。
GB 601 化學試劑 滴定分析（容量分析）用標準溶液的制備
凱氏法測定試樣中的含氮量，即在催化劑作用下，用硫酸破壞有機物，使含氮物轉(zhuǎn)化成硫酸銨。加入強堿進行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，測出氮含量，將結(jié)果乘以換算系數(shù)6.25，計算出粗蛋白含量。
4.1 硫酸（GB 625）：化學純，含量為98％，無氮。
4.2 混合催化劑：0.4g硫酸銅，5個結(jié)晶水（GB 665），6g硫酸鉀（HG 3—920）或硫酸鈉（HG 3—908），均為化學純，磨碎混勻。
4.3 氫氧化鈉（GB 629）：化學純，40％水溶液（m/V）。
4.4 硼酸（GB 628）：化學純，2％水溶液（m/V）。
4.5 混合指示劑：甲基紅（HG 3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚綠（HG 3—1220）0.5％乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處保存期為三個月。
4.6 鹽酸標準溶液：鄰苯二甲酸氫鉀法標定，按GB 601制備。
4.6.1
鹽酸標準溶液：c（HCl）=0.1mol/L。8.3mL鹽酸（GB 622，分析純），注入 1 000mL蒸餾水中。
4.6.2
鹽酸標準溶液：c（HCl）=0.02mol/L。1.67mL鹽酸（GB 622，分析純），注入1 000mL蒸餾水中。
4.9 硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1 000mL，加入0.1％溴甲酚綠乙醇溶液10mL，0.1％甲基紅乙醇溶液7mL，4％氫氧化鈉水溶液0.5mL，混合，置陰涼處保存期為一個月（全自動程序用）。
5.7 凱氏蒸餾裝置：常量直接蒸餾式或半微量水蒸氣蒸餾式。
5.11 定氮儀：以凱氏原理制造的各類型半自動，全自動蛋白質(zhì)測定儀。
選取具有代表性的試樣用四分法縮減至200g，粉碎后全部通過40目篩，裝于密封容器中，防止試樣成分的變化。
稱取試樣0.5～1g（含氮量5～80mg）準確至0.0002g，放入凱氏燒瓶（5.6）中，加入6.4g混合催化劑（4.2），與試樣混合均勻，再加入12mL硫酸（4.1）和2粒玻璃珠，將凱氏燒瓶（5.6）置于電爐（5.4）上加熱，開始小火，待樣品焦化，泡沫消失后，再加強火力（360～410℃）直至呈透明的藍綠色，然后再繼續(xù)加熱，至少2h。
將試樣消煮液（7.1.1）冷卻，加入60～100mL蒸餾水，搖勻，冷卻。將蒸餾裝置（5.7）的冷凝管末端浸入裝有25mL硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示劑（4.5）的錐形瓶內(nèi)。然后小心地向凱氏燒瓶（5.6）中加入50mL氫氧化鈉溶液（4.3），輕輕搖動凱氏燒瓶（5.6），使溶液混勻后再加熱蒸餾，直至流出液體積為100mL。降下錐形瓶，使冷凝管末端離開液面，繼續(xù)蒸餾1～2min，并用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內(nèi)，然后停止蒸餾。
將試樣消煮液（7.1.1）冷卻，加入20mL蒸餾水，轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中，冷卻后用水稀釋至刻度，搖勻，做為試樣分解液。將半微量蒸餾裝置（5.7）的冷凝管末端浸入裝有20mL硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示劑（4.5）的錐形瓶（5.8）內(nèi)。蒸汽發(fā)生器 （5.7）的水中應加入甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，在蒸餾過程中保持此液為橙紅色，否則需補加硫酸。準確移取試樣分解液10～20mL注入蒸餾裝置（5.7）的反應室中，用少量蒸餾水沖洗進樣入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氫氧化鈉溶液（4.3），小心提起玻璃塞使之流入反應室，將玻璃塞塞好，且在入口處加水密封，防止漏氣。蒸餾4min降下錐形瓶（5.8）使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1min，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均流入錐形瓶內(nèi)，然后停止蒸餾。
注：7.1.2.1和7.1.2.2蒸餾法測定結(jié)果相近，可任選一種。
精確稱取0.2g硫酸銨（4.8），代替試樣，按7.1.2或7.2.2步驟進行操作，測得硫酸銨含氮量為21.19±0.2％，否則應檢查加堿、蒸餾和滴定各步驟是否正確。
用7.1.2.1或7.1.2.2法蒸餾后的吸收液立即用0.1mol/L（4.6.1）或0.02mol/L（4.6.2）鹽酸標準溶液滴定，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。
稱取0.5～1g試樣（含氮量5～80mg）準確至0.0002g，放入消化管中，加2片消化片（儀器自備）
或6.4g混合催化劑（4.2），12mL硫酸（4.1），于420 ℃下在消煮爐上消化1h。取出放涼后加入30mL蒸餾水。
采用全自動定氮儀（5.11）時，按儀器本身常量程序進行測定。
采用半自動定氮儀（5.11）時，將帶消化液的管子插在蒸餾裝置上，以25mL硼酸（4.4）為吸收液，加入2滴混合指示劑（4.5），蒸餾裝置（5.7）的冷凝管末端要浸入裝有吸收液的錐形瓶內(nèi)，然后向消煮管中加入50mL氫氧化鈉溶液（4.3）進行蒸餾。蒸餾時間以吸收液體積達到100mL時為宜。降下錐形瓶，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內(nèi)。
用0.1mol/L的標準鹽酸溶液（4.6.1）滴定吸收液，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。
稱取蔗糖0.5g，代替試樣，按第7章進行空白測定，消耗0.1mol/L鹽酸標準溶液（4.6.1）的體積不得超過0.2mL。消耗0.02mol/L鹽酸標準溶液（4.6.2）體積不得超過0.3mL。
式中：V2──滴定試樣時所需標準酸溶液體積，mL；
V1──滴定空白時所需標準酸溶液體積，mL；
c──鹽酸標準溶液濃度，mol/L；
m──試樣質(zhì)量，g；
V──試樣分解液總體積，mL；
V──試樣分解液蒸餾用體積，mL；
0.0140──與1.00mL鹽酸標準溶液〔c（HCl）=1.000mol/L〕相當?shù)?、以克表示的氮的質(zhì)量。
6.25──氮換算成蛋白質(zhì)的平均系數(shù)。
每個試樣取兩個平行樣進行測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。
當粗蛋白質(zhì)含量在25％以上時，允許相對偏差為1％。
當粗蛋白含量在10％～25％之間時，允許相對偏差為2％。
作者: 游人學子 時間: 2009-9-22 10:37
樓主把國標拿出來分享！理解理解，先賺點論壇幣！我也是！
目前聽說國際上更流行杜馬斯燃燒法，大家了解不？
作者: 陳立華 時間: 2009-9-22 10:39
我們測飼料的蛋白質(zhì)含量用的也是這種方法（半微量蒸餾），但有時蒸餾后反應液為黃褐色有時是淺藍色，為什么呢？
作者: 馮春偉 時間: 2009-9-22 20:45
杜馬斯燃燒法沒用過，我想方法還不止這個，最好用國標法
作者: wenlichun2009 時間: 2009-10-11 19:32
杜馬斯原理測定總氮含量
1． 燃燒
杜馬斯燃燒法是基于在高溫下（大約 900 ℃ ），通過控制進氧量、氧化消解樣品的原理而進行氮測定的。燃燒生成的氣體被載氣 CO2 攜帶直接通過氧化銅（作為催化劑）而被完全氧化。此外，化合物中一定量的難氧化部分會被載氣攜帶通過作為催化劑的氧化銅和鉑混合物進一步氧化。
2． 還原
燃燒生成的氮氧化物在鎢上還原為分子氮，同時過量的氧也被結(jié)合了。一個傳感器用來控制最佳燃燒所需的氧氣量，這可以保證氧氣和鎢的消耗量最少。鎢的還原性是銅的4倍。
3． 凈化
一系列適當?shù)奈談⒏蓴_成分如鹵化氫從被檢測氣流中除去。隨后水冷器確保將分析氣流中的水蒸氣除去。由于用 CO2 作載氣，所以沒必要吸收燃燒生成的 CO2 。
4． 檢測
用一個TCD熱導檢測器來檢測 CO2 載氣流中的氮。N2 體積含量引發(fā)一種電子測量信號，通過它，再經(jīng)過物質(zhì)的獨立校正，被測樣品的氮含量就自動的計算、打印和存儲起來。
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