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標(biāo)題: 凱氏定氮法測(cè)定飼料粗蛋白的注意細(xì)節(jié) [打印本頁(yè)]
作者: 燃燒的麥田    時(shí)間: 2010-3-26 21:47
標(biāo)題: 凱氏定氮法測(cè)定飼料粗蛋白的注意細(xì)節(jié)
凱氏定氮法測(cè)定飼料粗蛋白的注意細(xì)節(jié)

   以凱氏定氮法測(cè)定氮含量換算蛋白質(zhì)的方法，是國(guó)際上通用的標(biāo)準(zhǔn)方法，操作簡(jiǎn)單，測(cè)定結(jié)果重復(fù)性和重現(xiàn)性都很好，廣泛用于各種食品、谷物、飼料等樣品的蛋白質(zhì)含量測(cè)定。要使測(cè)定結(jié)果有更好的正確度、準(zhǔn)確度和精準(zhǔn)度，認(rèn)真細(xì)致掌握測(cè)定的每個(gè)步驟、各個(gè)細(xì)節(jié)及相應(yīng)的注意事項(xiàng)，就顯得極為重要。

   一、試樣的粉碎
   測(cè)定要求樣品粉碎并全部過40目篩，目的在于使其具備均質(zhì)性，便于溶樣，更易于消化。但也須掌握以下四點(diǎn)：（1）由于粉碎或過篩過程中，樣品容易產(chǎn)生自動(dòng)分級(jí)，如玉米，其硬質(zhì)部分常聚集在上面，軟質(zhì)部分聚在下面。所以粉碎過篩后要重新混合均勻，以減少測(cè)量誤差；（2）粉碎完后，粉碎機(jī)中總會(huì)遺留少部分，這部分不能隨便丟棄，否則將影響樣品的均質(zhì)性；（3）粉碎過程要快，以避免樣品的成分變化；（4）對(duì)于全價(jià)料(即使是顆粒全價(jià)料)和濃縮料，無須再粉碎，當(dāng)然這是基于混合機(jī)的良好混合均度的；如果拿去粉碎，會(huì)丟失部分粉末物質(zhì)，且粉碎后產(chǎn)生分級(jí)，反而降低了樣品的均質(zhì)性。

   二、試樣的用量
   試樣的用量可根據(jù)情況而定，標(biāo)準(zhǔn)法中規(guī)定為0．5～1g，這個(gè)用量對(duì)于濃縮料、魚粉、豆粕等高蛋白的樣品尚可，對(duì)于諸如稻谷、玉米等低蛋白的樣品則相對(duì)較少，可適當(dāng)增加到2～3g，否則，滴定時(shí)鹽酸的消耗量只有1～2mL，會(huì)增加讀數(shù)和測(cè)定的誤差。

   三、樣品的消化
   首先，確定硫酸的用量，要根據(jù)樣品的用量來確定硫酸的用量，如果取2～3g樣，則需25mL硫酸；對(duì)于含鹽量高的樣品，如某些劣質(zhì)魚粉、肉骨粉之類，須相應(yīng)增加硫酸用量，因?yàn)镹aCl+H2SO4→HCL↑，加熱后HCL會(huì)揮發(fā)。
消化液中加入大量硫酸鉀或硫酸鈉，其目的是用于提高消化溫度。
   K2SO4+H2SO4→KHSO4
   KHSO4→K2SO4+SO3+H2O
   如消化過程中，隨著硫酸的分解和水分的蒸發(fā)，硫酸鉀的濃度逐漸增大，則消化液沸點(diǎn)升高，加速了有機(jī)物的分解速度。但應(yīng)注意硫酸鉀的用量不能過大，如果消化溫度太高，生成的硫酸銨也會(huì)分解出氨而使測(cè)定結(jié)果偏低。
   （NH4）2SO4→NH3↑+(NH4)HSO4
   （NH4）HSO4→NH3↑+S02↑+H2O
   在消化液冷卻后呈固態(tài)，則表明硫酸鉀用量過大，或硫酸用量不足。事實(shí)上，增加試樣量和硫酸量，其混合催化劑的量不必增加。
   在試樣消化過程中，還要加硫酸銅等試劑為催化劑；進(jìn)一步加速試樣的消化分解。硫酸銅的催化反應(yīng)如下：
   C+2CuSO4→Cu2SO4+SO2↑+CO2↑
   Cu2+2H2SO4→2CuSO4+2H2O-t-S02↑
   除硫酸銅外，常用的催化劑還有汞、氧化汞、硒粉、還原鐵或上述物質(zhì)的混合物。對(duì)于一般谷物樣品，如玉米、小麥、稻谷等的消化，用硫酸銅作催化劑，只要適當(dāng)增加鹽用量，使用強(qiáng)熱源，其效果與汞催化劑完全一樣；對(duì)于難消化物質(zhì)的樣品，硫酸銅催化效果不如汞，測(cè)得蛋白質(zhì)含量偏低。
   用硫酸銅作催化劑的好處，是在蒸餾氨時(shí)可作為堿性反應(yīng)的指示劑。
   添加氧化劑可幫助有機(jī)質(zhì)消化，但氧化性較強(qiáng)的氧化劑會(huì)使氨氧化為氮?dú)鈸p失。對(duì)于富含脂肪或消化過程中易發(fā)泡的樣品，可在消化前添加少量氧化劑，如過氧化氫，一般不用高錳酸鉀和次氯酸作氧化劑。
   有的飼料檢測(cè)書上有快速測(cè)定蛋白質(zhì)的方法，如硒粉催化法、硒粉過氧化氫催化法、過氧化氫催化法等，按照這些方法測(cè)定的蛋白質(zhì)含量常常偏低0.3％～1.0％，如無特殊情況，特別是測(cè)定的結(jié)果作為飼料配方的數(shù)據(jù)時(shí)，不要用快速測(cè)定法。

   四、蒸餾
   氨的蒸餾有兩種方法：常量蒸餾法和半微量蒸餾法。常量法將樣品分解消化后全部用于測(cè)定，取樣量大，測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和精確度都很高。半微量法測(cè)定結(jié)果精密度稍差一點(diǎn)。一般情況下建議使用半微量法，因?yàn)槿绻麴s失敗的話，半微量法還可繼續(xù)蒸餾，而常量法只好全部重來，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。
   半微量法中規(guī)定蒸餾4min，但未規(guī)定從何時(shí)計(jì)時(shí)。其實(shí)，蒸餾時(shí)間的長(zhǎng)短要看蒸汽量的大小，蒸汽量小時(shí)須增加蒸餾時(shí)間。從筆者多年的經(jīng)驗(yàn)來看，多蒸餾1～2min對(duì)結(jié)果沒有影響，并可隨時(shí)用試紙檢查是否蒸餾完全。所以，從何時(shí)計(jì)時(shí)的爭(zhēng)論也就無關(guān)緊要了。
蒸餾時(shí)要注意兩點(diǎn)，一是反應(yīng)室里的溶液總體積要控制，也就是說，在沖洗加樣口時(shí)用水要少，否則反應(yīng)室溶液體積太大，液面升高，容易噴進(jìn)冷凝管內(nèi)。二是要控制蒸汽量或火力大小，蒸汽量太大也會(huì)將反應(yīng)液噴進(jìn)冷凝管中；火力太小，蒸餾速度慢，且易發(fā)生倒流；蒸汽產(chǎn)生要均勻，防止暴沸；一定要裝上蒸汽發(fā)生器的安全管，同時(shí)加上幾粒玻璃珠。

    五、其它
   鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，常量法中取0.1M比較合適，半微量法中則在0.02～0.05M之間比較合適。
   使用自動(dòng)滴定管，可提高滴定的速度和減少滴定誤差。
作者: liyi11    時(shí)間: 2010-3-26 22:10
很詳細(xì)的說明，學(xué)習(xí)樓主的這種精神。
作者: tjz8    時(shí)間: 2010-3-27 08:36
"4）對(duì)于全價(jià)料(即使是顆粒全價(jià)料)和濃縮料，無須再粉碎，當(dāng)然這是基于混合機(jī)的良好混合均度的"???顆粒料不用粉碎,頭一回聽,那什么時(shí)候才是消化完全(誰都知道這樣消化速度會(huì)慢不少)?
作者: love51    時(shí)間: 2010-3-27 09:11
"4）對(duì)于全價(jià)料(即使是顆粒全價(jià)料)和濃縮料，無須再粉碎，當(dāng)然這是基于混合機(jī)的良好混合均度的"???顆粒料不 ...
tjz8 發(fā)表于 2010-3-27 08:36



    原因應(yīng)該不是說后邊這些吧，大概是測(cè)定要經(jīng)過一消化過程，沒必要再粉碎，個(gè)人理解
作者: 554912421    時(shí)間: 2010-3-27 10:44
收藏了，謝謝樓主
作者: 楊紅艷    時(shí)間: 2010-3-27 11:22
測(cè)蛋白時(shí) 多蒸會(huì)不影響蛋白表示同意但經(jīng)常用試紙?jiān)嚳词欠裾敉?這會(huì)影響含量的



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