畜牧人

標(biāo)題: 雙縮脲的檢測能否定量?。?[打印本頁]
作者: 燃燒的麥田    時(shí)間: 2010-6-15 15:27
標(biāo)題: 雙縮脲的檢測能否定量??？
如題  在原料中檢出雙縮脲   能否有方法測出具體含量？
作者: 極限天空    時(shí)間: 2010-6-15 15:49
這個(gè)定性就可以判定吧，如果原料里發(fā)現(xiàn)摻有這類物質(zhì)，直接退貨就是了。
作者: yaoyuyuan    時(shí)間: 2010-6-16 10:42
[編輯本段]雙縮脲法
（一）實(shí)驗(yàn)原理
　　雙縮脲（NH3CONHCONH3）是兩個(gè)分子脲經(jīng)180℃左右加熱，放出一個(gè)分子氨后得到的產(chǎn)物。在強(qiáng)堿性溶液中，雙縮脲與CuSO4形成紫色絡(luò)合物，稱為雙縮脲反應(yīng)。凡具有兩個(gè)酰胺基或兩個(gè)直接連接的肽鍵，或能過一個(gè)中間碳原子相連的肽鍵，這類化合物都有雙縮脲反應(yīng)。 　　紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無關(guān)，故可用來測定蛋白質(zhì)含量。測定范圍為1~10mg蛋白質(zhì)。干擾這一測定的物質(zhì)主要有：硫酸銨、Tris緩沖液和某些氨基酸等。 　　此法的優(yōu)點(diǎn)是較快速 ，不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近，以及干擾物質(zhì)少。主要的缺點(diǎn)是靈敏度差。因此雙縮脲法常用于需要快速，但并不需要十分精確的蛋白質(zhì)測定。
（二）試劑與器材
　　1. 試劑： 　　?。?）標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液：用標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)晶牛血清清蛋白（BSA）或標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白，配制成10mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液，可用BSA濃度1mg/ml的A280為0.66來校正其純度。如有需要，標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)還可預(yù)先用微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量，計(jì)算出其純度，再根據(jù)其純度，稱量配制成標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0．05N NaOH配制。 　?。?）雙縮脲試劑：稱以1.50克硫酸銅（CuSO4·5H2O）和6.0克酒石酸鉀鈉（KNaC4H4O6·4H2O），用500毫升水溶解，在攪拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀釋到1升，貯存于塑料瓶中（或內(nèi)壁涂以石蠟的瓶中）。此試劑可長期保存。若貯存瓶中有黑色沉淀出現(xiàn)，則需要重新配制。 　　 2. 器材： 　　可見光分光光度計(jì)、大試管15支、旋渦混合器等。
（三）操作方法
　　1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定：取12支試管分兩組，分別加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液，用水補(bǔ)足到1毫升，然后加入4毫升雙縮脲試劑。充分搖勻后，在室溫（20~25℃）下放置30分鐘，于540nm處進(jìn)行比色測定。用未加蛋白質(zhì)溶液的第一支試管作為空白對照液。取兩組測定的平均值，以蛋白質(zhì)的含量為橫座標(biāo)，光吸收值為縱座標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 　　2、樣品的測定：取2~3個(gè)試管，用上述同樣的方法，測定未知樣品的蛋白質(zhì)濃度。注意樣品濃度不要超過10mg/ml。
作者: 燃燒的麥田    時(shí)間: 2010-6-23 14:18
[編輯本段]雙縮脲法
（一）實(shí)驗(yàn)原理
　　雙縮脲（NH3CONHCONH3）是兩個(gè)分子脲經(jīng)180℃左右加熱，放出一個(gè)分 ...
yaoyuyuan 發(fā)表于 2010-6-16 10:42



   這個(gè)不行

[ts]燃燒的麥田 于 2010-6-23 14:20 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]

我終于找到雙縮脲含量檢測的方法了 可以定量檢測



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