畜牧人
標(biāo)題: 雞球蟲(chóng)病(Coccidiosis in Chicken) [打印本頁(yè)]
作者: gansao-hua 時(shí)間: 2013-12-1 23:31
標(biāo)題: 雞球蟲(chóng)病(Coccidiosis in Chicken)雞球蟲(chóng)病 (Coccidiosis in Chicken) 雞球蟲(chóng)病是雞常見(jiàn)且危害十分嚴(yán)重的寄生蟲(chóng)病,它造成的經(jīng)濟(jì)損失是驚人的。據(jù)統(tǒng)計(jì),美國(guó)在1951 ~1960 年因禽球蟲(chóng)病損失4700 萬(wàn)美元;英國(guó)每年在養(yǎng)雞業(yè)上至少要花費(fèi)550 萬(wàn)英鎊(其中大約有一半系用防治球蟲(chóng)病的藥費(fèi))。從世界范圍來(lái)看,雞球蟲(chóng)病每年能造成6000 萬(wàn)至1.2 億美元的損失。我國(guó)雖無(wú)精確的統(tǒng)計(jì),但從局部零散的資料來(lái)看,每年因雞球蟲(chóng)病造成的經(jīng)濟(jì)損失,數(shù)目也是相當(dāng)可觀的。盡管現(xiàn)代在防治、營(yíng)養(yǎng)、管理和遺傳學(xué)方面取得了很大的進(jìn)展,雞球蟲(chóng)病仍然是最普遍的雞病之一。因而,目前用于藥物預(yù)防的費(fèi)用,在美國(guó)已超過(guò)9000 萬(wàn)美元,全世界將超過(guò)3 億美元。
(一)、病原
雞球蟲(chóng)是一種原蟲(chóng),分類學(xué)上隸屬于原生動(dòng)物亞界,頂器門(mén),孢子蟲(chóng)綱,真球蟲(chóng)目,艾美耳科,艾美耳屬。世界各國(guó)已經(jīng)記載的雞球蟲(chóng)種類共有13 種之多,即1. 堆型艾美耳球蟲(chóng)(Eirneria acervulina ),2. 布氏艾美耳球蟲(chóng)(E.brunetti ),3. 哈氏艾美耳球蟲(chóng)(E.hagani ),4. 巨型艾美耳球蟲(chóng)(E.maxima) ,5. 變位艾美耳球蟲(chóng)(E.mivati) ,6. 和緩艾美耳球蟲(chóng)(E.mitis ),7. 毒害艾美耳球蟲(chóng)(E.necatrix) ,8. 早熟艾美耳球蟲(chóng)( E.praecor) ,9. 柔嫩艾美耳球蟲(chóng)(E.tenella ),10.E.beachi ,11.E.johnsoni ,12.E.tyzzeri 和13.E.sporadica 。前述1 ~9 種為大多數(shù)學(xué)者所公認(rèn),10 ~13 種的獨(dú)立性不少學(xué)者認(rèn)為是可疑的。我國(guó)何承德、張朝聘(1959) 報(bào)道西安市發(fā)現(xiàn)巨型艾美耳球蟲(chóng)和和緩艾美耳球蟲(chóng);甘肅(1960) 記載蘭州市有柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)及和緩艾美耳球蟲(chóng);熊大仕、林昆華(1965) 報(bào)告北京存在柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)、和緩艾美耳球蟲(chóng)、早熟艾美耳球蟲(chóng)和哈氏艾美耳球蟲(chóng)6 種;北京農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)系寄生蟲(chóng)學(xué)教研組(1977) 報(bào)道北京地區(qū)除上述6 種外,還有毒害艾美耳球蟲(chóng);上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院(1978) 報(bào)告上海市危害雞較嚴(yán)重的有柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)和變位艾美耳球蟲(chóng)4 種;陳淑玉等(1978) 報(bào)道華南地區(qū)以柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、和緩艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)和巨型艾美耳球蟲(chóng)最為常見(jiàn);白啟(1981) 報(bào)道廣州地區(qū)雞球蟲(chóng)有9 個(gè)種,即柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、和緩艾美耳球蟲(chóng)、變位艾美耳球蟲(chóng)、早熟艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)、布氏艾美耳球蟲(chóng)和哈氏艾美耳球蟲(chóng),作者還報(bào)道蘭州除上述9 種外,還存在等孢屬球蟲(chóng);任熙宇等(1990) 報(bào)道江蘇省雞球蟲(chóng)種類有為大多數(shù)學(xué)者所公認(rèn)的9 種。
1989 年史天衛(wèi)等對(duì)上海地區(qū)雞球蟲(chóng)的初步調(diào)查,結(jié)果發(fā)現(xiàn)有以下6 種,即柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、早熟艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)和變位艾美耳球蟲(chóng)。
王善志(1980) 報(bào)道了烏魯本齊地區(qū)雞球蟲(chóng)種類,作者以飽和食鹽水漂浮法收集雞球蟲(chóng)卵囊,對(duì)未孢子發(fā)育和孢子發(fā)育完成的卵囊進(jìn)行了形態(tài)學(xué)的觀察和量度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)烏魯術(shù)齊地區(qū)雞存在有7 種艾美耳球蟲(chóng),即柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、和緩艾美耳球蟲(chóng)、哈氏艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)、早熟艾美耳球蟲(chóng)及堆型艾美耳球蟲(chóng)。
白啟(1981) 對(duì)蘭州地區(qū)雞球蟲(chóng)蟲(chóng)種調(diào)查,采用混合卵囊感染法及純種卵囊感染法。用下列5 項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行仔細(xì)觀測(cè): 卵囊特征(包括卵囊形狀、大小及顏色,極體數(shù)目、位置和形狀,孢子囊的形狀及大小,內(nèi)、外殘?bào)w的有無(wú));潛隱期(純種確定到小時(shí));卵囊孢子化時(shí)間(即卵囊具有感染性的最短時(shí)間,純種系在28 ℃±1 ℃溫度下,于2.5% 重鉻酸鉀溶液中培養(yǎng)不同時(shí)間,用感染雛雞所測(cè)定);寄生部位(刮取死亡和撲殺試驗(yàn)雞各腸段的粘膜鏡檢);腸管的肉眼病變(把死亡和撲殺試驗(yàn)雛雞與未感染對(duì)照雛雞進(jìn)行剖檢對(duì)比)。
通過(guò)混合卯囊感染試驗(yàn),共鑒定出球蟲(chóng)2 屬10 個(gè)種: 堆型艾美耳球蟲(chóng)、布氏艾美耳球蟲(chóng)、哈氏艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、變位艾美耳球蟲(chóng)、和緩艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)、早熟艾美耳球蟲(chóng)、柔嫩艾美耳球蟲(chóng)和Isospora sp. 。
世界上大多數(shù)學(xué)者新公認(rèn)的艾美耳屬的9 個(gè)種,除哈氏及毒害2 個(gè)種外,其他7 個(gè)種均分離出了單一種,對(duì)每一個(gè)種都作了反復(fù)感染試驗(yàn)和上述5 項(xiàng)指標(biāo)的仔細(xì)觀測(cè)。等孢屬Isospora 一個(gè)種的分離和傳遞試驗(yàn)尚未成功,僅作了形態(tài)學(xué)方面的觀測(cè)。
王世鈞等(1980 )報(bào)道了齊齊哈爾市郊區(qū)和富??h城區(qū)雞球蟲(chóng)種類有早熟艾美耳球蟲(chóng)、和緩艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、柔嫩艾美耳球蟲(chóng)和等孢屬球蟲(chóng)未定種(IsospOra sp. )。
左仰賢等(1986) 對(duì)云南省不同地理?xiàng)l件的8 個(gè)地、州的8 個(gè)縣、市的雞進(jìn)行了調(diào)查,結(jié)果發(fā)現(xiàn)有9 種球蟲(chóng): 即柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、變位艾美耳球蟲(chóng)、布氏艾美耳球蟲(chóng)、和緩艾美耳球蟲(chóng)、早熟艾美耳球蟲(chóng)和雞等孢球蟲(chóng)Isospora gallinac )。雞等孢球蟲(chóng),調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)有1.6% 的感染率。雖然Levine (1973) ,Pelferdy (1974) 等懷疑此種不是雞的真寄生蟲(chóng). 而是麻雀等野鳥(niǎo)的拉氏等孢球蟲(chóng),我們經(jīng)過(guò)與I.laeazei 卵囊初步測(cè)量比較觀察,認(rèn)為兩者卵囊是有差別的。
張寶祥等(1986) 從陜西省8 個(gè)縣(市)采集了400 份糞樣,在實(shí)驗(yàn)室對(duì)每種均進(jìn)行單卵囊感染分離出純種卵囊,經(jīng)形態(tài)學(xué)、孢子化時(shí)間、潛隱期、寄生部位和病理學(xué)觀察等幾項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定后,認(rèn)定陜西省的家雞共有2 屬8 種球蟲(chóng),它們是: 柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)、變位艾美耳球蟲(chóng)、早熟艾美耳球蟲(chóng)、和緩艾美耳球蟲(chóng)和拉氏等孢子球蟲(chóng)(Isospora lacazei )。
楊春生(1986) 報(bào)道了銀川地區(qū)雞球蟲(chóng)蟲(chóng)種有以下7 種: 柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)、和緩艾美耳球蟲(chóng)、早熟艾美耳球蟲(chóng)和等孢屬球蟲(chóng)(Isospora sp. )。
陳剛等(1990) 報(bào)道了于1989 年3 ~5 月,用糞檢法對(duì)西寧地區(qū)成年雞進(jìn)行了球蟲(chóng)種類的調(diào)查,共查到艾美耳屬球蟲(chóng)6 種,即柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)、和緩艾美耳球蟲(chóng)、早熟艾美耳球蟲(chóng)和布氏艾美耳球蟲(chóng),一種艾美耳屬未定種及一個(gè)等孢屬卵囊。
根據(jù)現(xiàn)有蟲(chóng)種調(diào)查資料的初步匯總,9 種雞的艾美耳屬球蟲(chóng)在我國(guó)均存在,其中6 種分布較廣,蟲(chóng)種和分布情況如下。
1. 堆型艾美耳球蟲(chóng)分布于北京、烏魯木齊、蘭州、廣州、山東、廣西、昆明、陜西、福州、銀川、上海、云南。
2. 布氏艾美耳球蟲(chóng)分布于蘭州、廣州、廣西、云南。
3. 哈氏艾美耳球蟲(chóng)分布于北京、烏魯木齊、蘭州、廣州、山東。
4. 巨型艾黃耳球蟲(chóng)分布于北京、山西、烏魯木齊、蘭州、廣州、黑龍江、山東、廣西、昆明、陜西、福州、云南、銀川、上海。
5. 和緩艾美耳球蟲(chóng)分布于山西、北京、烏魯木齊、蘭州、廣州、黑龍江、山東、廣西、昆明、陜西、福州、云南、銀川。
6. 變位艾美耳球蟲(chóng)分布于蘭州、廣州、廣西、陜西、云南、上海。
7. 毒害艾美耳球蟲(chóng)分布于北京、烏魯木齊、蘭州、廣州、黑龍江、山東、廣西、昆明、陜西、云南、銀川、上海。
8. 早熟艾美耳球蟲(chóng)分布于北京、烏魯木齊、蘭州、廣州、黑龍江、廣西、昆明、陜西、云南、銀川、上海。
9. 柔嫩艾美耳球蟲(chóng)分布于北京、烏魯木齊、蘭州、廣州、江蘇、黑龍江、山東、廣西、昆明、陜西、福州、云南、銀川、上海。
另外,在蘭州、廣州、齊齊哈爾、陜西、云南、銀川等地的雞糞中查出等孢屬球蟲(chóng),少數(shù)作者定名為拉氏等孢球蟲(chóng)(Isospora lacazei ),到目前還沒(méi)有可靠證據(jù)能證明其為雞的寄生性球蟲(chóng)(黃兵,1990 年)。
由于現(xiàn)代交通的發(fā)展和國(guó)際間來(lái)往的頻繁,尤其是雞及其產(chǎn)品作為重要的家畜品種和貿(mào)易對(duì)象,這就會(huì)使任何一種雞球蟲(chóng)都可能成為世界性的。現(xiàn)把我國(guó)發(fā)現(xiàn)的9 種球蟲(chóng)的形態(tài)特點(diǎn)分述如下。
1. 堆型艾美耳球蟲(chóng)Eimeria acervulina Tyzzer ,1929
寄生部位: 通常寄生于于十二指腸和空腸的上皮細(xì)胞內(nèi),個(gè)別情況下可延及小腸后部。
形態(tài): 卵囊中等大小,卵圓形,其量度最大的為22.5um ×16.75um ,最小的為15um ×12.5um ,平均大小為18.8um ×14.5um 。卵囊無(wú)色。卵囊壁呈淡綠黃色,厚度為1.0um 。卵囊窄端的內(nèi)膜變薄,比周圍部分稍低陷,與之相應(yīng)的外膜亦下陷,構(gòu)成淺碟狀。初排出的卵囊,原生質(zhì)團(tuán)為圓形,邊緣平整。卵囊內(nèi)空隙較小。原生質(zhì)團(tuán)分裂為4 個(gè)圓形細(xì)胞的時(shí)間,最早和大多數(shù)為15h 左右,最晚為18h 。極體出現(xiàn)在原生質(zhì)團(tuán)分裂為4 個(gè)圓形細(xì)胞時(shí),位于卵囊的窄端,多為圓形,少數(shù)為淺碟狀;多為1 個(gè)(占75% 左右),少數(shù)為2 個(gè),并列配置,析光性強(qiáng)。孢子形成最早時(shí)間為19.5h. 最晚和大多數(shù)是24h 。孢了囊的大小為7.5 ~10.5um ×4.5 ~5.0um ,平均為9.7um ×5.0um 。無(wú)內(nèi)外殘?bào)w。潛隱期為4 天。
2. 布氏艾美耳球蟲(chóng)E.brunetti Levine ,1942
寄生部位: 小腸后段和直腸的上皮細(xì)胞內(nèi)。
形態(tài): 較大型的卵囊,僅次于巨型艾美耳球蟲(chóng),卵圓形,量度最大的為28um ×21um ,最小的為17.5um ×15.75um ,平均大小為22.6um ×18.5um 。卵囊壁光滑,無(wú)卵膜孔,有一極體。孢子囊呈長(zhǎng)卵圓形,有斯氏體,并有內(nèi)殘?bào)w,無(wú)外殘?bào)w(白啟1981 )。完成孢子發(fā)育的最早時(shí)間為19h 。
3. 哈氏艾美耳球蟲(chóng)E.hagani Levine ,1938
寄生部位: 小腸前段上皮細(xì)胞內(nèi)。
形態(tài): 卵囊中等大小,呈寬卵圓形,大小為15.5 ~20um ×14.5 ~18.5um ,平均為17.68um ×15.78um 。無(wú)色,卵囊壁呈淡黃綠色,厚l.0um 。原生質(zhì)團(tuán)呈圓形,邊緣平整。卵囊內(nèi)空隙比堆型艾美耳球蟲(chóng)的小。但比和緩艾美耳球蟲(chóng)的大。原生質(zhì)團(tuán)分裂為4 個(gè)細(xì)胞的時(shí)間最早為14.5h ,最晚為17.5h 。細(xì)胞初為圓形,邊緣平整。有一個(gè)圓形極體,位于孢于囊之間或卵囊側(cè)面,少數(shù)位于卵囊窄端偏下方,其出現(xiàn)時(shí)間大多數(shù)卵囊是在其中的圓形細(xì)胞變?yōu)闄E圓形時(shí),少數(shù)出現(xiàn)在原生質(zhì)團(tuán)分裂為4 個(gè)圓形細(xì)胞時(shí)。孢子形成的最早時(shí)間為23.5h ,最晚和多數(shù)是在27h. ,孢子囊的量度為7.5 ~10.5un ×5urn ,平均為9.1um ×5um 。潛隱期為6 天。
4. 巨型艾美耳球蟲(chóng)E.maxima Tyzzer ,1929
寄生部位: 小腸中段上皮細(xì)胞內(nèi)。
形態(tài): 大型卵囊,寬卵圓形,一端圓鈍,一端較窄。其量度最大的達(dá)40um ×33um ,最小的為21.75um ×17.5um ,平均為30.76um ×23.9um ,常見(jiàn)的為30um ×22.5um 。卵囊呈黃褐色,卵囊壁淡黃色,厚度為0.75um 。初排出的卵囊,其原生質(zhì)團(tuán)為圓形,邊緣整齊。卵囊內(nèi)空隙大,卵囊窄端的慮膜變薄,比周圍稍低陷,與之相對(duì)應(yīng)的外膜亦稍下陷,呈淺碟狀。原生質(zhì)團(tuán)分裂為4 個(gè)細(xì)胞的時(shí)間,最早為23.5h. ,最晚為32.5h ,細(xì)胞初為圓形,周緣平滑,極體出現(xiàn)在原生質(zhì)團(tuán)分裂為4 個(gè)細(xì)胞時(shí),折光性強(qiáng),呈圓形,位于卵囊窄端,大多數(shù)為1 個(gè)(約占50% ),2 個(gè)的較少,3 個(gè)的最少;出現(xiàn)2 個(gè)或3 個(gè)極體時(shí),其排列不規(guī)律。孢子發(fā)育完成的時(shí)間最早為28.5h ,最晚為48.5h ,多數(shù)在48h 左右。孢子囊的量度最大為17.5um ×7.5um ,最小的11.75um ×5.75um ,平均為15.6um ×7.0urn 。未見(jiàn)有內(nèi)外殘?bào)w。卵囊經(jīng)15.5h 培養(yǎng)和原生質(zhì)團(tuán)分裂為4 個(gè)細(xì)胞之前,卵囊內(nèi)外膜呈現(xiàn)波浪狀皺曲,外膜尤明顯;初期在鈍端較明顯,逐漸向窄端發(fā)展。潛隱期為6 天。
5. 變位艾美耳球蟲(chóng)E.mivati Edgar et Siebold ,1964
寄生部位: 小腸前段和中段的上皮細(xì)胞內(nèi)。
形態(tài): 為小型卵囊,大多呈卵圓形,也有呈橢圓形的。少數(shù)卵囊窄端囊壁變薄,變薄部位的邊緣稍稍隆起,中間凹陷若缺口。量度最大為19.25um ×14.87um ,最小為10.5um ×9.62um ,平均為14.33um ×11.75um 。極體1 ~2 個(gè),偶見(jiàn)有3 個(gè)的,排列在卵囊窄端的邊緣。少數(shù)卵囊內(nèi)有1 個(gè)不規(guī)則的或呈圓形的外殘?bào)w,偶爾也有2 個(gè)的。孢子囊為長(zhǎng)橢圓形。有斯氏體,并且有1 個(gè)不太清晰的內(nèi)殘?bào)w。完成孢子發(fā)育的時(shí)間最早為11.5h 。潛隱期為93h 。
6. 和緩艾美耳球蟲(chóng)E.mitis Tyzzer.1929
寄生部位: 小腸前半部上皮細(xì)胞內(nèi)。
形態(tài): 為小型卵囊,近圓形,量度最大的為19.5um ×17.0um ,最小的為12. 75um ×12.5um ,平均大小為15.34um ×14.3um 。卵囊無(wú)色,卵囊壁淡綠黃色,厚度為1.0um ,少數(shù)卵囊壁較厚,可達(dá)1.25um 。初排出的卵囊,其原生質(zhì)團(tuán)成球形,邊緣平滑,充滿卵囊內(nèi),幾乎不留空隙。原生質(zhì)團(tuán)分裂為4 個(gè)細(xì)胞的時(shí)間,最早為15h 左右,最晚和大多數(shù)為18.5h 。細(xì)胞初為圓形,周邊平整。極體出現(xiàn)在原生質(zhì)團(tuán)分裂為4 個(gè)圓形細(xì)胞時(shí),由于4 個(gè)細(xì)胞幾乎填滿卵囊內(nèi),極體常不易發(fā)現(xiàn)。極體為1 個(gè),折光性強(qiáng),多為圓形,少數(shù)呈淺碟狀,位于卵囊的一端。孢子發(fā)育完成的最早時(shí)間為23.5h ,最晚為26h. 大多數(shù)是在24 ~24.5h 。孢子囊量度最大的為10um ×5um ,最小的為7um ×5um ,平均為8.72urn ×5um 。無(wú)內(nèi)外殘?bào)w。潛隱期為5 天。
7. 毒害艾美耳珠蟲(chóng)E.necatrix Johnson ,1930
寄生部位: 裂殖生殖主要在卵黃蒂前后的小腸段上皮細(xì)胞內(nèi),配子生殖則在盲腸上皮細(xì)胞內(nèi)。
形態(tài): 卵囊為中等大小,卵圓形+ 量度最大的為21.0um ×17.5um ,最小的為14.0um ×10.25um ,平均天小為16.59um ×13.5um 。卵囊壁光滑,卵囊內(nèi)空隙小。極體1 個(gè),少數(shù)有2 個(gè)的。孢子囊為長(zhǎng)卵圓形,有一斯氏體。無(wú)內(nèi)外殘?bào)w。完成抱子發(fā)育的時(shí)間約18h 。潛隱期為6 天。
8. 早熟艾美耳球蟲(chóng)E.praecox Johnsn ,1930
寄生部位: 小腸前1/3 部分上皮細(xì)胞內(nèi)。
形態(tài): 卵囊較大,大多數(shù)為橢圓形,其次為卵圓形。少數(shù)近圓形,量度最大為25um ×18.25um ,最小為20um ×17. 5um ,平均21.75um ×17.73um 。卵囊無(wú)色,卵囊壁淡綠黃色,厚度為1.0um 。厚生質(zhì)團(tuán)圓形,邊緣平整。卵囊內(nèi)的空隙小,但比E.mitis 如球蟲(chóng)的稍大。厚生質(zhì)團(tuán)分裂為4 個(gè)細(xì)胞的時(shí)間,最早為17.5h ,最晚為23.5h ,多數(shù)在17. 5h 左右。4 個(gè)細(xì)胞初為圓形,周緣光滑。極體1 個(gè),圓形,折光性強(qiáng),出現(xiàn)在厚生質(zhì)團(tuán)分裂為4 個(gè)圓形細(xì)胞時(shí),大多位于孢子囊之間,少數(shù)在卵囊一端偏下方。完成孢子發(fā)育的時(shí)間,最早為23.5h ,最晚為38.5h ,大多數(shù)在27h 左右。孢子囊的大小為10 ~15um ×5.25 ~7.5um ,平均為11.8um ×6.4um 。無(wú)內(nèi)外殘?bào)w。潛隱期為4 天。
9 柔嫩艾美耳球蟲(chóng)E.tenella (Railliet et Lucet ,1891 )Fantham ,1909
寄生部位: 盲腸及其附近腸道上皮細(xì)胞內(nèi)。
形態(tài): 卵囊較大,多數(shù)為寬卵圓形,一端稍窄,步數(shù)呈橢圓形,其量度最大為25un ×20um ,最小為20um ×15um ,平均大小為22.62um ×18.05um 。卵囊原生質(zhì)團(tuán)呈淡褐色,卵囊壁為潰黃綠色,厚度為1.0um 。初排出的卵囊,原生質(zhì)團(tuán)膜邊緣凹凸不平,卵囊內(nèi)空隙較大。原生質(zhì)團(tuán)分裂為4 個(gè)細(xì)胞的昂早時(shí)間為15h ,最晚為19.5h ,大多數(shù)為18.5h 。細(xì)胞初為多邊形,邊緣不平整。極體出現(xiàn)在原生質(zhì)團(tuán)分裂為4 個(gè)多邊形細(xì)胞時(shí),位于卵囊的窄端,一般呈圓形,少數(shù)為淺碟狀,多為1 個(gè),少數(shù)為2 個(gè),3 個(gè)的最少。出現(xiàn)2 個(gè)極體時(shí),其在卵囊內(nèi)呈并列方式排列;3 個(gè)時(shí)則成三角形排列。極體折光性強(qiáng)。完成孢子發(fā)育的時(shí)間,最早為19.5h ,最晚為30.5h ,大多數(shù)在27h 。孢子囊的量度,最大選12.75um ×6.75um ,最小的為7.5um ×upm ,平均為11.47urn ×6.23um 。無(wú)內(nèi)外殘?bào)w。潛隱期為7 天。
國(guó)外有些學(xué)者對(duì)哈氏艾美耳球蟲(chóng)和變位艾美耳球蟲(chóng)的獨(dú)立性有懷疑。我國(guó)未見(jiàn)有對(duì)該兩種球蟲(chóng)作深入研究的報(bào)道。
(二)、病原生物學(xué)特性
我國(guó)對(duì)致病力強(qiáng)的幾種雞球蟲(chóng)(如柔嫩艾美耳球空、毒害艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)和巨型艾美耳球蟲(chóng))的生物學(xué)特性做了一些較深入的研究工作,如在雞胚培養(yǎng),細(xì)胞培養(yǎng),早熟蟲(chóng)株的選育,超徽結(jié)構(gòu)等;同時(shí),在雞球蟲(chóng)病防治方面進(jìn)行了不少的工作;在雞球蟲(chóng)病免疫和蟲(chóng)苗的研制和應(yīng)用方面,近幾年來(lái)也取得一些成績(jī)。
柔嫩艾美耳球蟲(chóng)
韓志華等進(jìn)行了柔嫩艾美耳球蟲(chóng)(Eimeria tenella )細(xì)胞培養(yǎng)的觀察。作者在雞腎細(xì)胞內(nèi)培養(yǎng)結(jié)果發(fā)現(xiàn): 子孢了接種后第2 天已全部鉆進(jìn)細(xì)胞呈現(xiàn)出輕微收縮運(yùn)動(dòng),表面折光透明。第3 ~4 天,被侵害的細(xì)胞部分明顯膨脹。第5 天觀察到第1 代裂殖體,排列成菜花狀,并釋放大量裂殖子,裂殖子呈放射狀排列。第6 天出現(xiàn)第2 代裂殖體。第7 天已形成大小配子體。第9 天見(jiàn)到卵圓形的卵囊。3 次試驗(yàn)結(jié)果相同。子孢子發(fā)育成卵囊后,腎細(xì)胞開(kāi)始衰老變形,部分細(xì)胞脫落,有些形成空泡。
細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)育成的卵囊,孢子化后接種1 日齡來(lái)航雞。接種后第6 天,雛雞排血便。第7 天進(jìn)行糞檢,發(fā)現(xiàn)柔嫩艾羹耳球蟲(chóng)卵囊。
另外作者還指出,經(jīng)41 ℃培養(yǎng)9 天的孢子化卵囊不能感染雛雞。
呂文順等(1984) ,用體外脫囊的球蟲(chóng)子孢子5 ×l04 ~10 ×l04 個(gè)接種9 ~11 日齡雞胚的尿囊腔中,進(jìn)行柔嫩艾美耳球蟲(chóng)在雞胚培養(yǎng)中內(nèi)生性發(fā)育史的研究。觀察結(jié)果表明,球蟲(chóng)在絨毛尿囊膜(CAM) 細(xì)胞內(nèi)完成了無(wú)性世代和有性世代兩個(gè)發(fā)育階段,出現(xiàn)第1 、2 、3 代裂殖體和大配子體和小配子體以及卵囊,像在雞腸黏膜上皮細(xì)胞內(nèi)一樣完成全部?jī)?nèi)生發(fā)育史。成熟的卵囊最早出現(xiàn)于144h ,然后逐漸增多,到192h 不僅在CAM 上可見(jiàn)到密集的大量卵囊,在尿囊液和尿酸鹽沉淀物中也可以獲得集聚成堆的卵囊。培養(yǎng)獲得的卵囊在形態(tài)學(xué)上完全符合柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的特征。卵囊經(jīng)孢子發(fā)育完成后仍具有感染雛雞的能力,并可經(jīng)雞胚連續(xù)傳代。
李泳等(1985) 用電子顯微鏡觀察了柔嫩艾美耳球蟲(chóng)配子生殖的全過(guò)程,描述了雄配予體和雌配子體生殖過(guò)程超微結(jié)構(gòu)的變化。雄配子體經(jīng)過(guò)核分裂,細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)陷切割細(xì)胞質(zhì),細(xì)胞核遷移,支鏈淀粉粒形成,鞭毛體突起,配子軀干和鞭毛形成,最后雄配子成熟,離開(kāi)雄配子體殘余。雌配子體經(jīng)過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)折疊,形成大量的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)池,產(chǎn)生壁形成體Ⅰ和Ⅱ,雌配子從不規(guī)則的橢圓形發(fā)展到卵圓形,受精后,卵囊壁形成,壁形成體消失。
張振嵐等(1990) 對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)內(nèi)生階段超微結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行了研究。觀察結(jié)果,發(fā)現(xiàn)裂殖生殖過(guò)程是裂殖子或滋養(yǎng)體的核經(jīng)多次分裂后彤戚多核體或稱新生裂殖體。新形成的核被有雙層膜,每個(gè)核具有一個(gè)明顯的核仁。初生裂殖體從切面上看,有許多由單個(gè)限制膜構(gòu)成的裂縫或裂隙,似乎把多核體分成許多塊;有些裂隙或裂縫與裂殖體表面的限制膜相連,似乎由表面的限制膜內(nèi)陷而形成。在這些裂隙處和在多核體的表面一樣也可形成囊狀突起,并逐漸延長(zhǎng)而形成裂殖子。新生裂殖子脫離母體時(shí),其后端形成一電子密度增強(qiáng)的環(huán),謂之后極環(huán)。成熟的裂殖子的形態(tài)有細(xì)條形到矮胖形,日不同代之間無(wú)明顯差異。它們均被有一層由外膜和內(nèi)膜復(fù)合體構(gòu)成的表皮,以及類錐體、極環(huán)、微線粒、棒狀體和膜下微管構(gòu)成的頂端復(fù)合體。配子生殖過(guò)程是小配子細(xì)胞較大配子細(xì)胞小,被一層限制性單位膜,細(xì)胞核經(jīng)多次分裂后形成多核體與裂殖生殖過(guò)程中形成的多核體的區(qū)別在于這些新形成的核均定位于配予細(xì)胞的周邊,無(wú)核仁,有多個(gè)染色質(zhì)團(tuán)塊,核質(zhì)在邊緣區(qū)域較濃,隨后染色質(zhì)向外側(cè)集結(jié),周邊核延長(zhǎng)并向表面隆起而形成小配子的“芽體”。在核不斷向外延伸過(guò)程中,可能有一線粒體也伴隨外移,因在成熟的小配子前部有一個(gè)長(zhǎng)橢圓形而內(nèi)多嵴的線粒體緊靠著核。一個(gè)成熟的小配子主要由一個(gè)長(zhǎng)條形而電子致密的核和一個(gè)長(zhǎng)橢圓形的線粒體構(gòu)成。在其前端或頂器附著有3 根鞭毛,而胞質(zhì)含量很少。初生大配子細(xì)胞有一個(gè)大的核和一個(gè)呈顆粒狀的濃染的核仁,被有一層限制性單位膜,胞漿內(nèi)有大量?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體,但很少或幾乎沒(méi)有脂肪顆粒和多糖顆粒,這兩種成分在隨后的發(fā)育中逐漸增多起來(lái)。大配子細(xì)胞進(jìn)一步發(fā)育,胞漿中出現(xiàn)許多成囊顆粒Ⅱ(WFB Ⅱ) ,高倍鏡下,這些顆粒呈明暗交替的條帶狀結(jié)構(gòu)。每個(gè)WFB Ⅱ顆粒均位于一圍膜泡內(nèi),散布在胞漿基質(zhì)中,據(jù)此很容易與新生裂殖體及小配子細(xì)胞相區(qū)別。隨著大配子細(xì)胞進(jìn)一步發(fā)育,除大量卵圓形的多糖顆粒增加外,另一特征就是在胞漿的邊緣區(qū)域出現(xiàn)多個(gè)圓形致密而均勻的,但大小不等的成囊顆粒I (WFBI) ,它的出現(xiàn)標(biāo)志大配子的成熟。當(dāng)合子的外層限制膜分離開(kāi)來(lái),形成一環(huán)繞的胚膜,其本身又被覆一層新的限制膜時(shí),標(biāo)志卵囊形成的開(kāi)始。WFB Ⅰ顆粒物質(zhì)可能被輸送到膜I 和胰Ⅱ之間的區(qū)域內(nèi),隨著此外層的逐漸形成胞漿內(nèi)WFB Ⅰ逐漸減少或消失,原先所在的部位有時(shí)留下空泡。在外層形成的同時(shí),可觀察到合子的限制膜又經(jīng)多次復(fù)制而形成膜Ⅲ、膜Ⅳ和本身的限制膜Ⅴ。WFB Ⅱ顆粒物質(zhì)就可能被輸送到膜Ⅲ和膜Ⅳ之間的區(qū)域內(nèi)。WFB Ⅰ和WFB Ⅱ分別構(gòu)成卵囊壁的內(nèi)外層最初在形態(tài)上呈現(xiàn)不均勻狀態(tài),且厚度上也不一致,后經(jīng)進(jìn)一步融合、濃縮而構(gòu)成電子致密度高的外層和電子致密度稍低的內(nèi)層。
翁亞彪等(1992) 進(jìn)行了柔嫩艾美耳球蟲(chóng)配子形成階段的超微結(jié)構(gòu)的觀察,結(jié)果發(fā)現(xiàn),小配子體的發(fā)育是在盲腸上皮細(xì)胞核上方進(jìn)行。發(fā)育早期,核經(jīng)多次分裂成數(shù)個(gè)小核,小核無(wú)核仁,染色質(zhì)邊聚,并移至小配子體邊緣,延長(zhǎng)并向帶蟲(chóng)空泡突起,成為小配子的核。同時(shí),中心粒變?yōu)榛w,鞭毛從基體發(fā)出。小配子具有3 根鞭毛。大配子體的發(fā)育則是在盲腸上皮細(xì)胞核的下方進(jìn)行。早期大配子呈圓形或橢圓形,外被限制膜,膜周圍有許多細(xì)絲狀的微絨毛物。這些微絨毛狀物橫切面呈小點(diǎn)狀,縱切面呈絲狀,并與大配子相連。大配子內(nèi)有兩種成囊顆粒,成囊顆粒Ⅰ質(zhì)地均勻致密,強(qiáng)嗜餓酸性;成囊顆粒Ⅱ由細(xì)絲狀物盤(pán)曲、折疊而成。成熟的大配子內(nèi)含多量的多糖顆粒、一些小管、酯類包含體和半透明空泡,核位于中央。
朱彥鵬、華蘭英(1991) 報(bào)道了柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的早熟培育及其免疫原性試驗(yàn)。作者從我國(guó)河北省的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)蟲(chóng)株中發(fā)現(xiàn)了132 ~144h 成熟的早熟蟲(chóng)株,隨后進(jìn)行了早熟蟲(chóng)株的培養(yǎng),并對(duì)其致病力和免疫原性作了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn): (1 )在整個(gè)早熟培育過(guò)程中,感染2500 ~30000 個(gè)卵囊的雞均來(lái)呈現(xiàn)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病的任何臨診癥狀,剖檢時(shí)除個(gè)別雞的盲腸特膜上出現(xiàn)極輕微的粘膜肥厚和偶見(jiàn)小點(diǎn)出血外,未發(fā)現(xiàn)其他病理變化。(2) 分別接種第22 代和第23 代早熟培育蟲(chóng)株卵囊2 ×104 個(gè)的試驗(yàn)雞,接種后既未出現(xiàn)任何臨診癥狀,亦未發(fā)生死亡。而分別接種原始蟲(chóng)株卵囊5 ×103 和l ×l04 個(gè)的試驗(yàn)雞,在接種后第5 和第6 天分別死亡2 只和4 只。剖檢見(jiàn)盲腸病變記分均達(dá)到4 分。說(shuō)明早熟培育的蟲(chóng)株的致病力遠(yuǎn)比原始蟲(chóng)株低。(3) 早熟培育的蟲(chóng)株免疫接種的雞,于接種后的第17 天,口服攻擊感染原始蟲(chóng)株的孢子化卵囊5 ×104 個(gè),根據(jù)免疫接種后和攻擊感染后試驗(yàn)雞的死亡和盲腸病變記分來(lái)評(píng)價(jià),證明早熟培育蟲(chóng)株已完全喪失了免疫原性。作者認(rèn)為采用旱熟培育達(dá)到使球蟲(chóng)株的潛隱期逐漸縮短或使其致病力減弱的目的并非十分困難,但為保持早熟蟲(chóng)株原來(lái)的免疫原性卻不是很容易的,尚需進(jìn)行更深入的研究。
翁亞彪等(1992) 應(yīng)用單卵囊分離技術(shù)獲得純種柔嫩艾美耳球蟲(chóng)純種(廣州株)卵囊,進(jìn)行柔嫩艾美耳球蟲(chóng)早熟蟲(chóng)株的選育。試驗(yàn)結(jié)果表明,對(duì)該蟲(chóng)株進(jìn)行8 代的早熟選育,獲得了一個(gè)潛隱期為120h 的早熟蟲(chóng)株。以此早熟蟲(chóng)株感染雛雞,感染量為每只10 萬(wàn)個(gè)孢子化卵囊,臨診上不出現(xiàn)癥狀和病變;感染量提高到20 萬(wàn)個(gè)時(shí),也僅見(jiàn)盲腸粘膜有少量出血點(diǎn)。這表明該早熟蟲(chóng)株的致病力已明顯降低。每只雛雞經(jīng)口免疫接種該蟲(chóng)株5000 個(gè)孢子化卵囊,7 天后用8 萬(wàn)個(gè)原代孢子化卵囊攻擊,免疫雞不發(fā)病,剖檢見(jiàn)盲腸不呈現(xiàn)病變。說(shuō)明該早熟蟲(chóng)株具有良好的免疫原性。
謝明權(quán)等(1992) 用12 種脫囊液進(jìn)行廠柔嫩艾美耳球蟲(chóng)子孢子脫囊比較試驗(yàn),脫囊溫度均為40 ℃。結(jié)果說(shuō)明:0.25% 胰酶加0.75% ,膽鹽脫囊45 ~60min ,子孢子脫囊率達(dá)85% ~97% ;0.25% 胰酶加5% 雞膽汁脫囊75 ~90rnin ,脫囊率達(dá)65% ~95% ;0.25% 胰酶加5% 豬膽汁,脫囊75 ~90rmn ,脫囊率為91% ~96% ;0.25% 胰酶加5% 豬膽汁,脫囊90min 至105min ,脫囊率達(dá)51% ~75% ,0.25% 胰酶加10% 豬肝汁,脫囊90min ,脫囊率達(dá)89% ~97% 。其余的脫囊液如0.25% 胰酶加5% OP-10 ;0.25% 胰酶加5% 十二烷基苯磺酸鈉;0.25% 胰酶加10% 十二烷基苯磺酸鈉;0.25% 胰酶加10% 土耳其紅油等7 種均無(wú)脫囊效果。經(jīng)上述5 種脫囊液脫囊的子孢子接種,雞腎原代單層上皮細(xì)胞,接種后24h 用甲醇固定,子孢子染色法快速染色,再在高倍鏡下(400 倍)計(jì)算各組子孢子穿入細(xì)胞的數(shù)量,結(jié)果平均每個(gè)視野數(shù)分別為34.65 、33.62 、32.65 、33.32 和34.1 條,無(wú)顯著差異。證明上述5 種脫囊液脫囊的子飽子具有很好的活性。上述結(jié)果還說(shuō)明,在子孢子脫囊液中,胰酶是不可缺少的成分。胰酶加膽鹽,脫囊力量強(qiáng)。豬膽汁和雞膽汁與胰酶合用也有很好的脫囊效果,但消化時(shí)間需延長(zhǎng),而且高濃度的豬、雞膽汁(10%) 優(yōu)于低濃度的豬、雞膽汁(5% )。pH 低(6.7) 的脫囊液優(yōu)于pH 高的脫囊液。
陳淑玉等(1980) 報(bào)道了一個(gè)簡(jiǎn)便易行的雞球蟲(chóng)的單卵囊分離和感染法及其在種的鑒定上的應(yīng)用。文章詳細(xì)介紹了球蟲(chóng)單卵囊的分離方法,即用干凈的滴管,吸取在2% 重鉻酸鉀溶液中已培養(yǎng)4 ~7 天的孢子化卵囊1 小滴于載玻片上,并加l 滴生理鹽水稀釋,使在低倍鏡下觀察時(shí),一個(gè)視野中只有1 ~2 個(gè)卵囊,以便于分離。然后在顯微鏡下,右手持玻璃毛細(xì)吸管,當(dāng)毛細(xì)噴管的尖端正對(duì)視野中一個(gè)卵囊時(shí),將吸管向卵囊伸過(guò)去。由于毛細(xì)管現(xiàn)象,卵囊隨水分上升到毛細(xì)管內(nèi)。隨后把毛細(xì)吸管中的液體,吹落到鋪有瓊脂薄膜的載玻片上,置顯微鏡下觀察,確認(rèn)是1 個(gè)卵囊時(shí),單卵囊分離即告完畢。用細(xì)的解剖針在含有單卵囊的小液滴玻片上的瓊脂薄膜周圍劃出,以小液滴為中心,將前后左右的瓊脂薄膜折疊覆蓋起來(lái),喂給1 日齡雞。感染后的雛雞隔離飼養(yǎng),并于感染后第3 天開(kāi)始每天檢查糞便,觀察結(jié)果。試驗(yàn)感染14 只雛雞,結(jié)果有9 只雛雞于感染后5 ~8 天,在糞檢中找到卵囊,成功率為64.3% 。
對(duì)所分離出的單一種,進(jìn)行了重復(fù)感染試驗(yàn),觀測(cè)了卵囊特征、潛隱期、孢子化時(shí)間、臨診癥狀和病理變化,就可用于球蟲(chóng)種類的鑒定。
殷佩云等(1980) 也報(bào)道了球蟲(chóng)單卵囊分離技術(shù)。其操作方法與陳淑玉等(1980) 基本相似,也取得好的結(jié)果。
白啟(1980) 報(bào)道雞艾美耳球蟲(chóng)單一種分離方法的探討。文中提出雞球蟲(chóng)種的鑒定需分離感單一種,再結(jié)合其他的幾項(xiàng)生物學(xué)特性方能準(zhǔn)確可靠。這幾項(xiàng)生物學(xué)特性包括(l) 潛隱期(preparent perid);(2) 孢子化時(shí)間;(3) 寄生部位、特殊病變及其形態(tài)特征。
近年來(lái),有許多試驗(yàn)證明艾美耳屬的幾種雞球蟲(chóng)可以體外培養(yǎng),把人工脫囊的球蟲(chóng)子孢子接種于雞胚尿囊腔中或雞腎細(xì)胞培養(yǎng)物上,能夠完成整個(gè)內(nèi)生性發(fā)育。這種方法已廣泛應(yīng)用于抗球蟲(chóng)藥物的評(píng)價(jià)、免疫學(xué)和球蟲(chóng)發(fā)育形態(tài)的研究等方面。
趙開(kāi)元等(1985) 報(bào)道了柔嫩艾美耳球蟲(chóng)子孢子體外脫囊試驗(yàn)及其對(duì)雞胚感染力的觀察。作者用離心洗凈的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊用4% 的次氯酸鈉液殺菌30min ,然后,加少許PBS 液,倒入玻璃乳缽中輕輕研磨。經(jīng)研磨20min ,卵囊破碎率可達(dá)88.8% ~90% ,30min 可達(dá)90% ~96% 以上。
游離出來(lái)的孢子囊用1% 胰酶加5% 雞膽汁溶液,在40 ℃水溶中孵育2h ,子孢予脫囊率可達(dá)92.6% 。鑒于雞膽汁產(chǎn)量小,曾用牛、羊膽汁進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果證明,子孢子脫囊率分別達(dá)70.6% 和65.4% ,還不如雞膽汁效果。
用1% 胰酶加5% 雞膽汁脫囊的子孢子對(duì)雞有感染力。將子孢子接種于雞胚尿囊腔中,在40 ℃下孵化7 天,子孢子在絨毛尿囊膜細(xì)胞中完成了全部?jī)?nèi)生性發(fā)育,最后形成第2 代卵囊。經(jīng)檢查,卵囊形成后不僅局限在絨毛尿囊膜細(xì)胞內(nèi),也可游離到尿囊液中。
張勤等(1980) 應(yīng)用柔嫩艾美耳球蟲(chóng)(保定株)進(jìn)行了雞胚傳代致弱培育的研究。其研究?jī)?nèi)容包括(1) 雞胚內(nèi)的發(fā)育;(2) 雞胚傳代株的建立和第35 代雞胚傳代株的致病力;(3) 免疫原性的測(cè)定。結(jié)果表明柔嫩艾美耳球蟲(chóng)(保定株)經(jīng)雞胚傳38 代后,又通過(guò)小雞繁殖了一次,接著連續(xù)通過(guò)雞胚傳到47 代。在傳代過(guò)程中觀察了柔嫩艾美耳球蟲(chóng)在雞胚內(nèi)發(fā)育的各階段,隨著傳代次數(shù)的增加,柔嫩艾美耳球蟲(chóng)在雞胚內(nèi)的卵囊產(chǎn)量和回收卵囊的孢子形成率隨傳代經(jīng)過(guò)逐漸增高,終于顯示出對(duì)雞胚的良好“適應(yīng)”。
在雞胚內(nèi)傳了35 代的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)雞胚傳代株跟未經(jīng)傳代的原始蟲(chóng)株比較,傳代株對(duì)雞胚和小雞的致病力,尤其是對(duì)小雞的致病力顯著地降低了。投給104 個(gè)雞胚傳代株卵囊的小雞經(jīng)3 周后以6 ×104 個(gè)未經(jīng)傳代的原始蟲(chóng)株攻擊,顯示出有高度的保護(hù)作用。
自Long (1965) 首次完成用脫囊的柔嫩艾羹耳球蟲(chóng)子孢子,感染雞胚成功之后,國(guó)內(nèi)外的學(xué)者相繼用他的方法或略加改進(jìn),成功地進(jìn)行了多種雞艾美耳球蟲(chóng)的雞胚培養(yǎng)。但Long 的方法獲得的子孢子懸浮液中,糞渣等雜質(zhì)較多,雖然對(duì)雞胚的感染影響不大,但不適于進(jìn)行球蟲(chóng)免疫學(xué)、組織培養(yǎng)和生化分析。因此提純有活力的球蟲(chóng)子孢子,是進(jìn)行上述試驗(yàn)研究的基礎(chǔ)。
田廣孚、田增義(1989) 進(jìn)行了柔嫩艾美耳球蟲(chóng)子孢子的提純?cè)囼?yàn)。作者崩DEAE 纖維素(DF52) 柱層析柔嫩艾美耳球蟲(chóng)子孢子的粗提懸浮液,纖維素柱高5cm ,直徑2cm ,pH8.0 甘氨酸緩沖液作為洗脫液。流速為4ml/min ,每個(gè)集份10ml ,16 集份以后再未觀察到子抱子。子孢子回收率為62.94% 。純化后的子孢子懸浮液雜質(zhì)極少,達(dá)到了純化的目的。顯微鏡下可看到純化后的子孢子蠕動(dòng)。
蔣建林等(1994) 用改進(jìn)的DEAE-Cellulose 52 柱層法純化柔嫩艾美耳球蟲(chóng)子孢子。纖維素柱高5cm ,管的直徑1.6cm ,洗脫液為pH8.0 Tris-Hel 等滲緩沖液,流速為1ml/min ,得到了極純的子孢子,且子孢子運(yùn)動(dòng)性好,回收率在63% 以上。作者認(rèn)為子孢子之所以能用DEAE-Cellulose 52 來(lái)純化,是因?yàn)樽渔咦拥倪\(yùn)動(dòng)和電荷差異擺脫了DE-52 的離子交換吸附,并且體積小,能通過(guò)纖維素形成的篩網(wǎng),而卵囊、卵囊壁、孢子囊、孢子囊壁及其他一些有機(jī)物卻被纖維素網(wǎng)擋住和離子交換吸附上去了,于是只有子孢子被洗脫下來(lái)。
翁亞彪等(1992) 通過(guò)經(jīng)口感染的方法,使每只雞感染10 萬(wàn)個(gè)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊,然后觀察感染雞的血細(xì)胞的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)感染雞的紅細(xì)胞數(shù)于感染后第4 天開(kāi)始降低,第5 天降到147.35 萬(wàn)/mm3 (感染前為296.09 萬(wàn)/mm3 ),笫6 天后逐漸回升,第10 天時(shí)恢復(fù)到感染前的水平。凝血細(xì)胞數(shù)在感染前為2.60 萬(wàn)/mm3 ,感染后第5 、6 天有所減少,分別為2.06 萬(wàn)/mm3 和2.19 萬(wàn)/mm3 。白細(xì)胞總數(shù)感染前為3.38 萬(wàn)/mm3 ,感染后第4 天開(kāi)始升高,第8 天高達(dá)4.05 萬(wàn)/mm3 ,第10 天后逐日回降。在白細(xì)胞分類中,異嗜性白細(xì)胞的比例感染前為24.6% ,感染后第5 天增至31.7% ;而淋巴細(xì)胞感染前為64.4%. 感染后第5 天則下降到54.5% ;嗜酸性白細(xì)胞感染前為0.2% ,感染后第4 天開(kāi)始增加,第10 天時(shí)增至7.7% ;嗜堿性白細(xì)胞為l.5% ,單核細(xì)胞為5.9% ,感染前后沒(méi)有明顯的變化。
瀕死雞的紅細(xì)胞數(shù)為82 萬(wàn)/mm3 ,與感染前相比,降低了72.3% ,表明柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病雞的致死原因主要是失血過(guò)多。瀕死期白細(xì)胞總數(shù)為3.85 萬(wàn)/mm3 ,顯著高于存活雞的2.75 萬(wàn)/mm3 ,這與在許多疾病中,動(dòng)物在瀨死時(shí)白細(xì)胞數(shù)通常下降的現(xiàn)象有所不同。
謝明權(quán)等(1993) 用純化的孢子化的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊(威斯康星株)和裂殖子,經(jīng)用C-50 超聲波粉碎機(jī)處理后,進(jìn)行了水解氨基酸和游離氨基酸的測(cè)定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊有6 種游離氨基酸(天門(mén)冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、賴氨酸和異亮氨酸),其中以異亮氨酸含量較高,為0.072 ;檢出l5 種水解氨基酸,其中異亮氨酸含量較高,為0.688 。柔嫩艾美耳球蟲(chóng)第2 代裂殖子檢出11 種游離氨基酸,其中精氨酸含量最高,為0.13 ;檢出17 種水解氨基酸,其中以谷氨酸含量較高為1.397 。
謝明權(quán)等(1992) 在“不同血清在細(xì)胞培養(yǎng)中對(duì)球蟲(chóng)子孢子的活力及發(fā)育相關(guān)試驗(yàn)”一文中指出: 采用雞血清、小牛血清、兔血清及豬血清作球蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基成分,然后比較這4 種血清(各有2 種濃度:5% 和10% )對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的子孢子活力及其在細(xì)胞中發(fā)育的作用。檢測(cè)指標(biāo)為(a) 接種后l 、4 、8 、12 、24h ,細(xì)胞內(nèi)子孢子數(shù)量差異。(b) 第Ⅰ代成熟裂殖子數(shù)量變化。(c) 第Ⅱ代成熟裂殖體數(shù)量變化。結(jié)果表明:(1) 雞血清培養(yǎng)蒸在113 種指標(biāo)上均高于另外3 種血清,而豬血清培養(yǎng)基均低于別的血清;(2) 含5% 血清與10% 血清培養(yǎng)基在這3 個(gè)指標(biāo)上無(wú)顯著差異;(3) 予孢子在接種后4h ,穿透細(xì)胞的數(shù)目達(dá)到高峰,此后有所下降。作者認(rèn)為采用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)作抗球蟲(chóng)藥篩選,可首先選用雞血清作培養(yǎng)基成分。
段嘉樹(shù)、張秀云(1992) 報(bào)道了次氯酸鈉處理對(duì)柔搬艾美耳球蟲(chóng)卵囊活力的影響,用10% 和20% 的次氯酸鈉溶液對(duì)收集的新鮮柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊液,分別處理10min 和20min. 然后用常規(guī)方法徹底清洗后放在2.5% 重鉻酸鉀溶液中,置29 ℃溫度下培養(yǎng)48h ,觀察卵囊孢子發(fā)育率。以生物統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明各處理組間無(wú)顯著差異。
有人對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的致病力進(jìn)行過(guò)研究,如黃兵等(1994) 從現(xiàn)場(chǎng)采集分離獲得的純種柔嫩艾美耳球蟲(chóng),孢子化后,分別以每只雞感染1 萬(wàn)、5 萬(wàn)、10 萬(wàn)和20 萬(wàn)個(gè)的不同劑量,人工感染10 ~13 日齡的伊莎公雞,感染后7 天結(jié)束試驗(yàn),最后以平均增重、死亡率和病變記分作致病力的判定指標(biāo)。試驗(yàn)結(jié)果顯示柔嫩艾美耳球蟲(chóng)致病力很強(qiáng),感染10 萬(wàn)個(gè)孢子化卵囊的死亡率為50% ;感染20 萬(wàn)個(gè)的死亡率達(dá)75% ;感染5 萬(wàn)個(gè)孢子化卵囊的平均增重極顯著低于不感染對(duì)照組(P <0.01) 。4 個(gè)不同感染劑量的腸道病變記分為2.75 ~3.92 。
汪明等(1994) 也報(bào)道了柔嫩艾美耳球蟲(chóng)致病力的試驗(yàn)。作者采用單卵囊分離技術(shù)從雞場(chǎng)的混合卵囊中提純出柔嫩艾美耳球蟲(chóng)。卵囊孢子化后,按每只5 萬(wàn)、7.5 萬(wàn)、10.5 萬(wàn)和20 萬(wàn)個(gè)的不同感染量人工感染14 日齡的AA 肉雞。結(jié)果致死率分別為10% 、20% 、40% 和50% 。試驗(yàn)說(shuō)明柔嫩艾美耳球蟲(chóng)是致病力很強(qiáng)的一種球蟲(chóng)。
有人研究抗球蟲(chóng)藥對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的影響,如張振嵐等(1991) 報(bào)道了尾卡巴嗪l.25 ×10-4 能引起柔嫩艾美耳球蟲(chóng)裂殖生殖階段的滋養(yǎng)體或初生裂殖體及裂殖子的線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等膜結(jié)構(gòu)系統(tǒng)和核異常變化。1.68 ×10-4 磺胺喹 惡啉對(duì)裂殖生殖階段的影響主要表現(xiàn)為核膜的增生復(fù)制等一系列核的異常變化;對(duì)配子生殖階段的影響表現(xiàn)為Ⅰ型和Ⅱ型卵囊壁形成顆粒 (WFB Ⅰ,WFB Ⅱ) 的異常變化。8 ×10-5 鹽霉素對(duì)上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞(IEL) 中的子孢子及黏膜中成熟裂殖子的影響表現(xiàn)為表皮的分離或破裂及胞漿內(nèi)微線粒和多糖顆粒等的輪廓模糊。
謝明權(quán)等(1994) 應(yīng)用3 種聚醚類抗生素和7 種化學(xué)合成的抗球蟲(chóng)劑作用于柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的裂殖子30min ,然后用Hank's 平衡鹽溶液洗去藥物再接種10 ~11 日齡的雞胚。2.5 天后收集雞胚中的卵囊,以卵囊生成數(shù)判斷藥物的效果。結(jié)果證明,除氨丙啉外,其余的抗球蟲(chóng)劑對(duì)裂殖子是有效的。各種藥物的最低濃度,拉沙菌素、鹽霉素、莫能霉素、殺球靈 (Diclazuril) 、常山酮為10ug/ml ;氯苯胍、乙羥喹酯(Decoquinate )為l00ug/ml ;氯吡醇(Clopidol) 為500ug/ml 和尼卡巴嗪為1000ug/ml 可以降低裂殖子的活力,但不明顯。當(dāng)拉沙菌素、鹽霉素、莫能霉素、殺球靈、常山酮、氯苯胍的劑量分別提高到350 、150 、120 、200 、500 和700ug/ml 時(shí),可以殺死裂殖子。作者還進(jìn)行了藥物作用方式的比較,一種是如前述的藥物直接作用于裂殖子,然后接種于雞胚;另一種是先將子孢子接種于雞胚后3 天,當(dāng)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)第2 代裂殖體發(fā)育時(shí),從尿囊腔注入藥物。結(jié)果發(fā)現(xiàn)10ug/ml 的常山酮對(duì)上述兩種方法均有很好的抗球蟲(chóng)效果。10ug/ml 的殺球靈或100ug/ml 的氯苯胍直接作用于裂殖子時(shí),顯示出很好的效果,但在第二種方法中則未顯示抗球蟲(chóng)效力。尼卡巴嗪在以上兩種投藥方法均無(wú)效。作者提出雞胚是球蟲(chóng)進(jìn)行體外培養(yǎng)的模型,然而有些藥物需在雞體內(nèi)轉(zhuǎn)化后方能發(fā)揮作用,故雞胚模型作為篩選抗球蟲(chóng)藥是有一定價(jià)值的,但真正確定藥物劑量和最終確定棄留,最好在雞體中作鑒別。
球蟲(chóng)的抗藥性是生產(chǎn)中的課題,國(guó)內(nèi)外不少的寄生蟲(chóng)學(xué)者都很注意。我國(guó)對(duì)這問(wèn)題近年來(lái)也有些研究資料。
秦澤云等(1992) 應(yīng)用國(guó)內(nèi)不同地區(qū)分離到的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)進(jìn)行了對(duì)氯苯胍和克球粉的抗藥性檢測(cè)。每只2 周齡雛雞感染6 ×104 個(gè)孢子化卵囊,以美國(guó)默克公司的抗球蟲(chóng)指數(shù)(ACI) 作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。ACI 大干160 ,判為無(wú)抗藥性;介于160 和120 之間的,判為有部分抗藥性;小于120 的則判為具有抗藥性。結(jié)果表明,克球粉1.25 ×10-4 對(duì)3 株柔嫩艾美耳球史的抗球蟲(chóng)指數(shù)分別為182 、141 和l83 ,說(shuō)明克球多對(duì)其中一株柔嫩艾美耳球蟲(chóng)已具有部分抗藥性。氯苯胍6.6 ×l0-5 對(duì)3 株柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的抗球蟲(chóng)指數(shù)分別為120 、68 和193 ,這表明其中2 株已對(duì)氯苯胍產(chǎn)生抗藥性,比推薦用量3.3 ×l0-5 高出一倍已無(wú)抗球蟲(chóng)作用。試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明國(guó)內(nèi)存在球蟲(chóng)抗藥性問(wèn)題,有必要作進(jìn)一步調(diào)查。
孔繁瑤等(1994) 對(duì)我國(guó)12 個(gè)省、區(qū)的15 株柔嫩艾美耳球蟲(chóng)對(duì)5 種抗球蟲(chóng)藥的抗藥性進(jìn)行了調(diào)查研究. ,文中提出“最適抗球蟲(chóng)活性百分率( POAA) 、病變記分減少率(RLS) 和相對(duì)盲腸卵囊產(chǎn)量(ROP)3 項(xiàng)參數(shù)指標(biāo)為綜合判定球蟲(chóng)對(duì)藥物的抗藥性(或敏感性),具體判定標(biāo)準(zhǔn)為,+: 輕度抗藥;++: 中度抗藥;+++: 嚴(yán)重抗藥;-: 敏感。(1) POAA= (感染用藥組GSR- 感染不用藥對(duì)照組CSR )/ (不感染不用藥對(duì)照組GSR- 感染不用藥對(duì)照組CSR )×100% 。GSR= 籠末重/ 籠初重。POAA ≤50%: 有抗藥性;>50%: 無(wú)抗藥性。(2) RLS= (感染不用藥對(duì)照組平均病變記分- 感染用藥組平均病變記分)/ (感染不用藥對(duì)照組平均病變記分)×100% 。RLS ≥50%: 無(wú)抗藥性;<50%: 有抗藥性。(3)ROP= 感染用藥組平均卵囊百萬(wàn)數(shù)/ 感染不用藥組平均卵囊百萬(wàn)數(shù)×100% 。ROP ≥15%: 有抗藥性;<15%: 無(wú)抗藥性。
作者通過(guò)15 株柔嫩艾美耳球蟲(chóng)對(duì)5 種抗球蟲(chóng)藥的敏感性檢測(cè),首次實(shí)驗(yàn)證實(shí)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的抗藥性在我國(guó)12 個(gè)省、區(qū)普遍存在。試驗(yàn)提出的結(jié)論是:(1) 實(shí)驗(yàn)證實(shí)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)對(duì)莫能霉素、氨丙啉、克球粉和氯苯胍(均用推薦劑量)的抗藥性在我國(guó)l2 個(gè)省、區(qū)普遍存在。(2) 不用地區(qū)蟲(chóng)株的抗藥譜不同,抗性程度亦不同。多數(shù)蟲(chóng)株對(duì)2 種或2 種以上的抗球蟲(chóng)藥有復(fù)合抗藥性。(3)8 株柔嫩艾美耳球蟲(chóng)對(duì)殺球靈(Diclazuril )均無(wú)抗藥性。(4) 研究制訂了比較適用的檢測(cè)球蟲(chóng)抗藥性的判定方法和標(biāo)準(zhǔn),即以POAA 、RLS 和ROP 3 項(xiàng)參數(shù)指標(biāo)綜合判定球蟲(chóng)對(duì)藥物的抗藥性(或敏感性)。
作者在討論中提到,對(duì)于現(xiàn)場(chǎng)雞球蟲(chóng)的抗藥性,幣同研究者所采用的抗藥性劃定指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)不盡相同。國(guó)外采用的判定標(biāo)準(zhǔn)包括(1) 卵囊產(chǎn)量: 用藥組的每克糞便的卵囊數(shù)≥50000 ,判為有抗藥性;或用藥組的卵囊總數(shù)大于或等于感染不用藥對(duì)照組的5% ,判為有抗藥性;或當(dāng)使用2 倍推薦量藥物時(shí)仍有卵囊產(chǎn)生者判為有抗藥性。(2) 病變?cè)u(píng)分: 用藥組的病變計(jì)分比感染不用藥對(duì)照組減少不足50% 者為有抗藥性。(3) 增重: 用藥組增重低于不感染不用藥對(duì)照組增重的75% ,劃為有抗藥性;或用藥組增重不顯著高于感染不用藥對(duì)照組為有抗藥性,高于感染不用藥對(duì)照組但低于不感染不用藥對(duì)照組為有部分抗藥性。(4) 最適抗球蟲(chóng)活性百分率小于或等于50% ,判為有抗藥性。(5) 糞便評(píng)分: 用藥組平均糞便計(jì)分大于或等于感染不用藥對(duì)照組50% ,判為有抗藥性。(6) 抗球蟲(chóng)指數(shù): 如果抗球蟲(chóng)指數(shù)小于120 ,判為有抗藥性;介于121 ~159 之間,判為有部分抗藥性。
由于藥物在實(shí)用條件下不可能完全排除卵囊產(chǎn)生,且目前還沒(méi)有一種藥物(除殺球靈外)在養(yǎng)禽場(chǎng)按規(guī)定濃度使用時(shí)能完全阻止卵囊產(chǎn)生,所以,若以卵囊產(chǎn)量為標(biāo)準(zhǔn)判定球蟲(chóng)的抗藥性,很可能產(chǎn)生抗藥性蟲(chóng)株比率增高的后果。試驗(yàn)觀察,某些蟲(chóng)株在用藥情況下雖仍有一定量的卵囊產(chǎn)生,但不影響增重,且有少量蟲(chóng)體的存在還會(huì)有益于雞免疫力的產(chǎn)生,所以,如固有卵囊排放而判為有抗藥性并否定藥物效用似亦欠妥;但另一方面,如用藥后雖增重正常,但有大量卵囊產(chǎn)生,則存在著病原散播、污染環(huán)境的潛在威脅,故增重與卵囊產(chǎn)量二者應(yīng)作為兩個(gè)藥效指標(biāo)綜合評(píng)定。有鑒于此,作者建議以最適抗球蟲(chóng)活性百分率、相對(duì)卵囊產(chǎn)量和病變記分減少率3 項(xiàng)指標(biāo)綜合判定球蟲(chóng)的抗藥性,并擬制了判定標(biāo)準(zhǔn)。
李淥等(1986) 報(bào)道了蒽環(huán)類抗生素80334 對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)作用后裂殖體階段超微結(jié)構(gòu)的觀察。作者觀察到用藥后,藥物對(duì)球蟲(chóng)裂殖體起作用,導(dǎo)致裂殖體的自身裂解。同時(shí),在后期大量的白細(xì)胞位于盲腸的固有膜層,寄生有蟲(chóng)體的宿主細(xì)胞破裂死亡,巨噬細(xì)胞向蟲(chóng)體逼近并吞噬。證明80334 對(duì)球蟲(chóng)有很好的防治效果。對(duì)照組,觀察到的是密集的,正在發(fā)育過(guò)程中的裂殖體,大而清晰,巨噬細(xì)胞沒(méi)機(jī)會(huì)同裂殖體接觸,所以就沒(méi)有上述情況出現(xiàn)。
曾明華、沈詠舟(1991) 對(duì)疑似對(duì)氨丙啉和氯甲吡啶酚產(chǎn)生耐藥性的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)蟲(chóng)株(安徽株)進(jìn)行了研究。試驗(yàn)研究用的敏感蟲(chóng)株是由上海農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所球蟲(chóng)病組提供,試驗(yàn)用藥物氨丙啉(上海紅衛(wèi)獸藥廠),氯甲吡啶酚(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)藥理組提供),以球蟲(chóng)引起的死亡率、病變記分、盲腸內(nèi)容物中的卵囊數(shù)、增重率、飼料利用率和抗球蟲(chóng)指數(shù)為藥效判定指標(biāo)。試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn),在使用推薦劑量的藥物時(shí),接種柔嫩艾美耳球蟲(chóng)敏感株和疑似耐藥株,其上述各項(xiàng)指標(biāo)均有顯著差異,從而說(shuō)明作者從雞場(chǎng)分離的柔嫩美耳球蟲(chóng)株對(duì)氨丙啉和氯甲吡啶酚都產(chǎn)生了耐藥性。從實(shí)際情況來(lái)看,該雞場(chǎng)應(yīng)用該兩種抗球蟲(chóng)藥已有5 年以上,由于球蟲(chóng)長(zhǎng)期接觸這些低濃度藥物而產(chǎn)生了耐藥性。所以盡管在飼料中添加上述抗球蟲(chóng)藥,仍然會(huì)因球蟲(chóng)病而造成大批雛雞發(fā)病和死產(chǎn)。
(三)、流行情況
世界上幾乎每一個(gè)國(guó)家都有雞球蟲(chóng)病發(fā)生,可以說(shuō),只要有雞,就有球蟲(chóng)存在( 鄒瑩,1988) 。雞球蟲(chóng)在我國(guó)的分布情況,也證實(shí)了這一點(diǎn)。我國(guó)從南到北,從東到西均有雞球蟲(chóng)存在,每年都有球蟲(chóng)病爆發(fā)的報(bào)道,只有程度上的不同。造成經(jīng)濟(jì)損失的大小隨各地獸醫(yī)技術(shù)力量的不同而不同,可惜我國(guó)無(wú)全面精確的統(tǒng)計(jì)。
我國(guó)公開(kāi)報(bào)道的文獻(xiàn),雞球蟲(chóng)病幾乎皆集中在柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病和毒害艾美耳球蟲(chóng)病。誠(chéng)然這兩種艾美耳球蟲(chóng)病確是雞的9 種艾美耳球蟲(chóng)中致病力最強(qiáng)的,常引起顯著的臨診癥狀,并導(dǎo)致大批雞只發(fā)生死亡,易為人們所認(rèn)識(shí)和重視。巨型艾美耳球蟲(chóng)病和堆型艾美耳球蟲(chóng)病臨診表現(xiàn)較輕微,死亡率不如上述兩種球蟲(chóng)病高,在生產(chǎn)中容易被忽視。據(jù)調(diào)查,我國(guó)華北地區(qū)雛雞爆發(fā)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病大多是在3 ~6 周齡,少數(shù)是在2 周齡或95 日齡(張守發(fā)等,1990 )。毒害艾美耳球蟲(chóng)病發(fā)生在6 周齡以上的雞。曾在北京地區(qū)發(fā)現(xiàn)110 日齡的大中雛發(fā)生毒害艾美耳球蟲(chóng)病,死亡率高達(dá)10% ~15% 。
球蟲(chóng)病的發(fā)生季節(jié),一般在每年的4 ~9 月,而以6 ~7 月最為嚴(yán)重。我國(guó)地域跨度大,球蟲(chóng)病的發(fā)生季節(jié),南北方會(huì)有所不同。密閉式大規(guī)模集約化雞舍,則長(zhǎng)年都可發(fā)生。但在溫度高、濕度大的季節(jié)發(fā)病較厲害。
雞球蟲(chóng)的感染率有人作過(guò)調(diào)查,如左仰賢等(1986) 對(duì)云南的312 只雞進(jìn)行球蟲(chóng)調(diào)查時(shí),發(fā)現(xiàn)有252 只雞感染球蟲(chóng),總的感染率為80.8% ,其中20 ~60 日齡雞感染率為84.1% ,90 ~120 日齡雞感染率為83.9% ,1 ~1.5 年的雞感染率為57.6% 。
張寶祥等(1986) 報(bào)道,陜西省400 份雞糞樣檢查結(jié)果,發(fā)現(xiàn)感染率為74.75% ,感染強(qiáng)度平均為37600 個(gè)卵囊/1g 糞便,范圍在100 ~1440000 個(gè)/1g 糞便。調(diào)查還發(fā)現(xiàn)2 月齡以下的雛雞感染率和感染強(qiáng)度均比成年雞要高得多。從上可見(jiàn),雞球蟲(chóng)在我國(guó)的雞群中的感染率是很高的。
(四)、防治
迄今為止。國(guó)內(nèi)外對(duì)雞球蟲(chóng)病的防治主要是依靠藥物。使用的藥物有化學(xué)合成的和抗生素兩大類,從1936 年首次出現(xiàn)專用抗球蟲(chóng)藥以來(lái),已報(bào)道的抗球蟲(chóng)藥達(dá)40 余種(鄒瑩,1988 ),現(xiàn)今廣泛使用的不下20 種左右。我國(guó)養(yǎng)雞生產(chǎn)上使用的抗球蟲(chóng)藥品種,包括進(jìn)口和國(guó)產(chǎn)的,估計(jì)也有10 余種,介紹如下。
張勤等(1986) 進(jìn)行了速丹(Stenorol) 對(duì)雞的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)和堆型艾美耳球蟲(chóng)混合感染的抗球蟲(chóng)效力籠飼試驗(yàn)和田間試驗(yàn)。以可愛(ài)丹和氯苯胍做了比較?;\飼試驗(yàn)結(jié)果表明: 于人工感染前2 天日糧中投給3 ×10-6 的速丹,直到感染后l4 天結(jié)束,完全防止了由球蟲(chóng)病引起的死亡,同飼喂1.25 ×10-4 可愛(ài)丹和3 ×10-5 氯苯胍的組和感染不給藥組比較,不論是增重和飼料利用率的提高,還是腸道病變程度的減輕都是明顯的,唯有感染后第5 ~11 天期間的卵囊排出總數(shù)高于可愛(ài)丹和氯苯胍組。
2000 只白來(lái)航雛雞進(jìn)行田間試驗(yàn)的結(jié)果是在4 ~8 周期喂3 ×10-6 速丹的組比可愛(ài)丹和氯苯胍組救果更好。
張勤等(1986) 報(bào)道了速丹和鹽霉素對(duì)籠飼肉雞混合球蟲(chóng)感染的療效對(duì)比試驗(yàn)。結(jié)果表明,速丹的抗球蟲(chóng)效果比鹽霉素好。3 ×l0-6 和6 ×10-6 的速丹完全有效地防止了4 種球蟲(chóng)(Eimeria tenella 、E.necatrix 、E.acervulina 和E.maxima )混合感染引起的死亡,3 ×10-6 在提高增重和飼料利用率方面優(yōu)于6 ×10-6 ,但在消除卵囊產(chǎn)生和控制病變發(fā)生上不如6 ×10-6 。鹽霉素(5 ×10-5 和1 ×10-4 )都沒(méi)有完全控制球蟲(chóng)病引起的死亡。5 ×10-5 不論是對(duì)增重和飼料利用率的提高,還是病變記分和卵囊產(chǎn)量的降低都不如1 ×10-4 。l ×10-4 的鹽霉素的增重和飼料利用率水平和3 ×10-6 速丹組的接近,說(shuō)明1 ×10-4 的鹽霉素是防治雞球蟲(chóng)病的最有效的劑量。
孫浴東等(1986) 用常山酮(4 ×10-6) 、可愛(ài)丹(0.05%) 和氯苯胍(3.3 ×10-5) 對(duì)自然感染的雞球蟲(chóng)病進(jìn)行了療效試驗(yàn)。藥物混入飼料中喂服,連喂1 個(gè)月。試驗(yàn)結(jié)果表明:3 個(gè)喂藥組雞的藥前球蟲(chóng)感染率分別為50% 、60% 和40% ,用藥后下降到0 ,其療效均顯著。而不喂藥組球蟲(chóng)感染率保持在80% 。常山酮、可愛(ài)丹、氯苯胍組平均增重分別為735g 、630g 、705g ,而不喂藥組平均增重為540g 。以上3 種抗球蟲(chóng)藥防治雞球蟲(chóng)病的效果顯著。以常山酮效果最好,可愛(ài)丹、氯苯胍次之。
孫浴東等(1986) 報(bào)道了常山酮、可愛(ài)丹、沙氏三球粉(Unistat )3 種抗球蟲(chóng)藥對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病的預(yù)防效果的對(duì)比試驗(yàn)。結(jié)果表明: 連續(xù)喂服8 天含5 ×10-6 常山酮的15 只雞,僅在感染后第4 天發(fā)現(xiàn)3 堆血糞。試驗(yàn)雞精神、食欲、增重均正常。感染后第9 天剖檢7 只雞,腸道均無(wú)病變,腸內(nèi)容物和排出的糞便中均查不到卵囊。余下的8 只雞,放養(yǎng)于污染的環(huán)境中,仍連續(xù)喂藥22 天后剖檢,腸道均無(wú)病變,糞便中查不到卵囊??蓯?ài)丹與常山酮的療效對(duì)比試驗(yàn)的結(jié)果大體相似,唯在感染后第4 天發(fā)現(xiàn)血便比常山酮多1 倍,并有1 只雞的糞便中有少量球蟲(chóng)的卵囊。沙氏三球粉組中,少數(shù)雞既有臨診癥狀,又有較重的病變,體重略有降低,并有個(gè)別雞死亡,僅有一定的預(yù)防效果。
史天衛(wèi)等(1985 )對(duì)國(guó)產(chǎn)尼卡巴嗪防治雞球蟲(chóng)病進(jìn)行了二批籠飼試驗(yàn),以抗球蟲(chóng)指數(shù)(相對(duì)增重率+ 存活率)- (病變值+ 卵囊值)作為療效標(biāo)準(zhǔn),結(jié)果表明,國(guó)產(chǎn)尼卡巴嗪屬高效抗球蟲(chóng)藥物。其抗球蟲(chóng)指數(shù)分別為191.25 和190.56 。從試驗(yàn)結(jié)果看,該藥物l.25:10-4 的劑量不但不影響雞只增重,還能促進(jìn)生長(zhǎng)。作者曾以1.5 ×10-4 的劑量作試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)雞只增重更明顯,其抗球蟲(chóng)指數(shù)超過(guò)200 ,達(dá)到210.47 。但文中指出,根據(jù)對(duì)該藥物進(jìn)行安全試驗(yàn)結(jié)果看,加大劑量亦會(huì)出現(xiàn)體重下降,1.25 ×l0-4 足以對(duì)付球蟲(chóng)病對(duì)雞的危害。
林盂初等(1986) 對(duì)江蘇省江都合成獸藥廠生產(chǎn)的數(shù)種抗球蟲(chóng)藥。進(jìn)行抗柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的效果試驗(yàn)。試驗(yàn)證明,所試藥物中具有十分滿意效果的藥物依次為: 強(qiáng)效氨丙啉預(yù)混劑(0.5g/kg 飼料),常山酮預(yù)混劑(0.5mg/kg 飼料),強(qiáng)效氨丙啉預(yù)混劑(0.5g/kg 飼料)?;前粪?/font>惡啉 5 份+ DVD 1 份(0.12g/kg 飼料)4 種。單用磺胺喹 惡啉 (0.12g/kg 飼料) 不易控制雛雞盲腸球蟲(chóng)病。
史天衛(wèi)等(1986) 報(bào)道了國(guó)產(chǎn)尼卡巴嚷(Nicarbazin )防治雞球蟲(chóng)病的田間試驗(yàn)與對(duì)雞的安全試驗(yàn)研究。作者通過(guò)10967 只雞的田間試驗(yàn)證明,在飼料中添加1. 25 ×10-4 的尼卡巴嗪,存活率比可愛(ài)丹、球蟲(chóng)寧、痢特靈、鹽霉素組增加1.19% ;相對(duì)增重每只增加達(dá)100g 左右。飼料利用率尼卡巴嗪組與可愛(ài)丹、球蟲(chóng)寧、痢特靈、鹽霉素組差異不明顯。
飼料中尼卡巴嚷,以含量分別為1.25 ×10-4 ,2.5 ×l0-4 ,6. 25 ×10-4 ,1.25 ×10-3 任雞自由采食60 天,臨診上未發(fā)現(xiàn)各組雞有中毒癥狀。各組雞只進(jìn)行組織切片觀察,未發(fā)現(xiàn)肌胃、腸、腎有任何明顯的中毒性病變。1.25 ×10-3 組,有腸絨毛斷裂,腸腔內(nèi)有漿液性滲出物,集合管上皮也見(jiàn)脫落。
史天衛(wèi)等(1986) 進(jìn)行了球蟲(chóng)酯(Ethopabate )防治雞球蟲(chóng)病的舍飼試驗(yàn)、藥物比較試驗(yàn)、對(duì)雞的安全試驗(yàn)。舍飼試驗(yàn)表明: 氨丙啉(1.25 ×10-4 )加球蟲(chóng)酯(4 ×10-6) 的抗球蟲(chóng)結(jié)果與可愛(ài)丹(2.5 ×l0-4) 相近似或略強(qiáng)一些。藥物比較試驗(yàn),以抗球蟲(chóng)指數(shù)(Anticoccidial Index ,ACI) 作為判定標(biāo)準(zhǔn),結(jié)果以氨丙啉+ 球蟲(chóng)酯(1.25 ×10-4+4 ×10-6) 為最高,達(dá)239 。球蟲(chóng)寧的ACI 僅為105.33 。安全試驗(yàn)結(jié)果是1 ×10-4 ,2 ×10-4 的球蟲(chóng)酯對(duì)雞是安全的,4 ×10-4 ,雞的體重有所減輕。組織切片觀察,肌胃、肝、脾、肺、腎、腺胃、腸、腦、腔上囊,均未發(fā)現(xiàn)各組器官有任何中毒性病變,只有輕度出血,淋巴細(xì)胞漫潤(rùn)。
殷佩云等(1986) 報(bào)道了鹽霉素對(duì)球蟲(chóng)病的療效。5 ×10-5 、7 ×10-5 、9 ×10-5 的鹽霉素混于飼料中皆有預(yù)防雞球蟲(chóng)?。ㄈ崮郯蓝蛳x(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)和巨型艾美耳球蟲(chóng))的效果,能控制或降低死亡率,減輕或不產(chǎn)生病變,使排出的卵囊數(shù)目減少,并有促進(jìn)增重和提高飼料轉(zhuǎn)化率的作用。其中以7 ×10-5 效果最好,其次為9 ×10-5 和5 ×10-5 。
試驗(yàn)結(jié)果證明使用低劑量的鹽霉素知5 ×10-5 ,其增重?cái)?shù)值與不感染不給藥組幾乎相等,相當(dāng)于不感染不給藥組的92% 或99% 。反之,高劑量時(shí)則影響增重,如使用9 ××10-5 ,則相當(dāng)于不感染不給藥組的82% 或89% 。所以使用鹽霉素劑量不能高于9 ×10-5 。
林昆華等(1990) 進(jìn)行了鹽霉素預(yù)防肉雞球蟲(chóng)病的田間試驗(yàn)。試驗(yàn)雞為羅曼肉雞,第一組給予5 ×10-5 鹽霉素,第二組投予7 ×10-5 鹽霉素。兩組雞均從1 日齡開(kāi)始到51 日齡止,連續(xù)投藥。各組試驗(yàn)雞均于0 、14 、28 、42 和56 日齡時(shí)各抽樣(100 只)稱重;l4 、28 、42 和56 日齡各進(jìn)行糞檢卵囊一次。試驗(yàn)過(guò)程中死亡的雞均進(jìn)行剖檢,以確定死因。試驗(yàn)所得數(shù)據(jù),以統(tǒng)計(jì)學(xué)方法處理。試驗(yàn)結(jié)果是:
1.5 ×10-5 或7 ×10-5 組的試驗(yàn)雞均未見(jiàn)因球蟲(chóng)病死亡的,亦未見(jiàn)因藥物中毒死亡的。
2. 每只雞的平均增重和料肉比,不論是5 ×10-5 或是7 ×10-5 組,在1 ~6 周齡時(shí),無(wú)顯著差異。7 ~8 周齡時(shí),7 ×10-5 組比5 ×10-5 組試驗(yàn)雞每只平均增重和料肉比差異顯著。
3.14 、28 和42 日齡3 次糞檢結(jié)果,兩組對(duì)比無(wú)明顯差異,但在56 日齡糞檢時(shí),5 ×10-5 組每克糞便卵囊數(shù)卻比7 ×10-5 組明顯增多,且有10% 的糞樣有不同程度帶血。
殷佩云等(1986) 進(jìn)行了莫能霉素對(duì)人工引發(fā)的雞球蟲(chóng)病的療效觀察。試驗(yàn)以鹽霉素和氨丙啉作對(duì)比。結(jié)果證明: 莫能霉素接1 ×10-4 ,1.1 ×10-4 ,11 ×10-4 ,2 ×10-4 混于飼料中給予,皆有預(yù)防雞混合型球蟲(chóng)病的效果。其中以1.1 ×10-4 效果最好。從相對(duì)增重率和飼料轉(zhuǎn)化率結(jié)果來(lái)看,莫能霉素的適宜劑量為l ×10-4 ~1.1 ×10-4 。
林昆華等(1990) 報(bào)道了國(guó)產(chǎn)莫能霉素預(yù)防肉雞球蟲(chóng)病的田間試驗(yàn)。試驗(yàn)以克球粉(1.25 ×10-4) 為對(duì)比,莫能霉素劑量為1.1 ×10-4 。試驗(yàn)雞從17 ~51 日齡連續(xù)投藥。克球粉組雞在4 周齡時(shí),由于某些原因停藥7 天,導(dǎo)致發(fā)生了急性球蟲(chóng)病,經(jīng)治療,死亡86 只。
試驗(yàn)結(jié)果以統(tǒng)計(jì)學(xué)方法處理。得出的結(jié)果:
1.4 周齡前兩組雞在增重上無(wú)顯著差異,5 ~6 周齡時(shí)差異極顯著,7 ~8 同齡時(shí)其差異又趨不顯著。56 天試驗(yàn)期間,莫能霉素組比克球粉組增重率高13% 。
2. 整個(gè)試驗(yàn)期間,兩組的料肉比值間差異極顯著。
3. 21 ~49 日齡檢查,克球粉組試驗(yàn)雞的糞便性狀有變化的堆數(shù)比莫能霉素組高。
殷佩云等(1986) 報(bào)道了國(guó)產(chǎn)球痢靈(Zoalene) 中試產(chǎn)品對(duì)雞球蟲(chóng)病的療效試驗(yàn),試驗(yàn)分預(yù)防和治療兩項(xiàng),無(wú)論預(yù)防或治療試驗(yàn),試驗(yàn)雞(除不感染不給藥組外)皆采用人工感染卵囊的方法。
試驗(yàn)結(jié)果證明1.25 ×10-4 ,1.5 ×10-4 和2 ×10-4 的球痢靈混于飼料中喂服,對(duì)單一感染柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊l ×105 個(gè)或感染混合卵囊3 ×l05 個(gè)引起的雞球蟲(chóng)病均有良好的預(yù)防作用,但l.5 ×10-4 和2 ×10-4 對(duì)增重有些影響,因此生產(chǎn)上應(yīng)用以l.25 ×10-4 為適宜劑量。
試驗(yàn)結(jié)果還證明,球痢靈的服藥時(shí)間以在感染卵囊前或感染當(dāng)天為宜。隨著服藥時(shí)間的推后,其發(fā)病程度、相對(duì)增重率和排出卵囊數(shù)量即隨之加重、降低和增多,所以在生產(chǎn)中球痢靈用于雞球蟲(chóng)病的預(yù)防為最好。
楊振中等(1986) 報(bào)道了國(guó)產(chǎn)尼卡巴嗪對(duì)雞球蟲(chóng)病的防治研究。作者以1 ×10-4 ~4 ×10-4 劑量分批進(jìn)行籠飼試驗(yàn),結(jié)果表明l.25 ×10-4 的劑量對(duì)盲腸球蟲(chóng)和小腸球蟲(chóng)都有效。田間試驗(yàn)以克球粉為對(duì)照。結(jié)果是以1.25 ×10-4 連續(xù)投服50 天,雞群因球蟲(chóng)病死亡6 只,為試驗(yàn)雞的0.3% ,平均增重為1400g 。對(duì)照組因球蟲(chóng)病死亡21 只,死亡率為2.3% ,平均增重為1175 克。
作者還以小鼠、雞對(duì)國(guó)產(chǎn)尼卡巴嗪進(jìn)行了急性和慢性毒性試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明: 小鼠的急性毒性試驗(yàn),每公斤體重2400mg 、4800mg 是安全的;雞的急性毒性試驗(yàn),每公斤體重2400mg 、3000mg 、4800mg ,9600mg 也是安全的。雞的慢性毒性試驗(yàn),藥的劑量為2 ×10-4 、4 ×10-4 、8 ×10-4 ,連續(xù)投服40 天,無(wú)中毒死亡,生長(zhǎng)發(fā)育與不給藥對(duì)照雞相似。至于肉雞體內(nèi)尼卡巴嚓的殘留測(cè)定,采用紫外分光方法測(cè)定結(jié)果,除了腹脂在停藥0 天和1 天有殘留外,停藥2 天后各組織內(nèi)的殘留量已全部消失。
據(jù)現(xiàn)有抗雞球蟲(chóng)藥研究的資料表明,各種抗球蟲(chóng)藥,均有在球蟲(chóng)生活史的特定時(shí)期發(fā)揮最大作用的活性峰期。樊生超(1990) 用雞胚感染球蟲(chóng)子孢子作為實(shí)驗(yàn)?zāi)P?,探討了其用于測(cè)定抗球蟲(chóng)藥活性峰期的可能性。作者將孵化至10 日齡的雞胚、蛋殼用碘酊消毒后,給每一雞胚無(wú)菌注入2000 個(gè)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的子孢子和青霉素、鏈霉素各2000 單位于尿囊腔內(nèi),然后分別在感染的當(dāng)天,第2 天,第3 天和第4 天注入抗球蟲(chóng)藥,放入40 ℃溫度孵化箱內(nèi)培養(yǎng)。在感染后第8 天。將不同注藥時(shí)間的各組雞胚逐只剖檢,回收并計(jì)卵囊數(shù),以感染不給藥組的卵囊產(chǎn)量為100% ,最后根據(jù)不同注藥時(shí)間的雞胚卵囊抑制率來(lái)判定藥物作用的活性蜂期。作者共測(cè)試了8 種抗球蟲(chóng)藥。結(jié)果如下: 氯甲吡啶酚和丁氧喹啉的作用峰期在球蟲(chóng)生活史的第1 天,卵囊抑制率分別為100% 和99.97% ;奠能霉素和鹽霉素的活性峰期為第2 天,卵囊抑制率分別為100% 和99.97% ;氨丙啉和四環(huán)素的峰期是第3 天,卵囊抑制率均為100% ;尼卡巴嗪和磺胺二甲基嘧啶的活性峰期在第4 天,其卵囊抑制率分別為99.98% 和98.68% 。試驗(yàn)結(jié)果與Reid (1975) 報(bào)道的用其他方法測(cè)得的結(jié)果基本一致,證明了本方法的可用性。
是薛患等(1990) 進(jìn)行了水溶性氨丙啉治療雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病的籠飼試驗(yàn)。試驗(yàn)以抗球蟲(chóng)指數(shù)為判定藥效標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)結(jié)果表明20% 水溶性氨丙啉的抗球蟲(chóng)指數(shù)為188. 01 ,達(dá)到高效水平。從試驗(yàn)組和對(duì)照組飲水量測(cè)定,沒(méi)有明顯的差別,說(shuō)明水溶性氨丙啉溶于水后不產(chǎn)生異味。
蔣金書(shū)等(1991) 報(bào)道了殺球靈(Diclazuril ,商品名Clinacox ,刻利禽)對(duì)雞球蟲(chóng)病的防治效果?;\飼試驗(yàn)結(jié)果表明: 殺球靈l ×10-6 混于飼料,連續(xù)喂服,可完全有效地控制雞盲腸球蟲(chóng)病和堆型艾美耳球蟲(chóng)病的發(fā)生和死亡。5 批試驗(yàn)的抗球蟲(chóng)指數(shù)為195.7~207.9 ,比同時(shí)試驗(yàn)的對(duì)照藥物莫能霉素(1.2 ×10-4) ,氨丙啉(l.25 ×10-4) ,腐霉素(1.8 ×10-4) ,拉抄洛菌素(1 ×10-4) ,拉那菌素(8 ×10-5) ,尼卡巴囔(1.25 ×10-4) 的效果好。
平養(yǎng)肉雞的田間試驗(yàn)表明: 以1 ×10-6 的殺球靈混入飼料中,連續(xù)服用,可完全控制雞球蟲(chóng)病的發(fā)生。其飼料報(bào)酬、病變記分和糞便中的卵囊數(shù),均較對(duì)照藥物克球粉(1.25 ×10-4) 的效果好。
黃兵等(1990) 用殺球靈在兩個(gè)雞場(chǎng)進(jìn)行了防治雞球蟲(chóng)病的田間試驗(yàn)。試驗(yàn)組用殺球靈1 ×10-6 ,對(duì)照組兩組,一組用克球粉(2.5 ×10-4) ,二組用尼卡巴嗪(1.3 ×10-4) 。試驗(yàn)組和對(duì)照組雞均從1 日齡開(kāi)始投藥,隨到56 日齡試驗(yàn)結(jié)束。以雞只體重、死亡率、腸道病變記分、每克糞便的卵囊數(shù)和料肉比作為效果判定指標(biāo)。結(jié)果為:1. 系球靈組平均體重超過(guò)克球粉組;死亡率和料肉比則分別低于克球粉組0.6% 和0.278 ;腸道病變記分和每克糞便卵囊數(shù)皆明顯低于克球粉組。2. 殺球靈組平均體重比尼卡巴嗪組高;死亡率比尼卡巴嗪組高1.231% ;腸道均未發(fā)現(xiàn)球蟲(chóng)引起的病變;殺球靈組糞檢未查到卵囊,尼卡巴唪組有少量卵囊。兩藥組的料肉比幾乎無(wú)差異。試驗(yàn)結(jié)果證明殺球靈防治雞球蟲(chóng)病的效果接近或超過(guò)所用對(duì)照藥物的水平。
俞海等(1991) 就殺球靈對(duì)雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的殺滅作用,作用峰期及停藥后持續(xù)時(shí)間作了試驗(yàn)觀察。以1 ×10-6 濃度混入飼科,于感染前2 天和感染當(dāng)天開(kāi)始給藥組,臨診和盲腸病變檢查未發(fā)現(xiàn)異常,盲腸組織學(xué)檢查也未發(fā)現(xiàn)任何發(fā)育階段的球蟲(chóng)。感染后l 天開(kāi)始喂藥組,盲腸組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)變性和發(fā)育不良的裂殖體,可認(rèn)為殺球靈抗球蟲(chóng)作用峰期在子孢子和第一代裂殖體早期階段,對(duì)其呈殺滅作用。試驗(yàn)雞在給藥期和停藥后始終未檢出卵囊,說(shuō)明其殺滅作用極強(qiáng)。本藥持效時(shí)間短,停藥l 天明顯減弱,停藥2 天即基本消失,提示此藥在用藥期間不可間斷。
陳淑玉等(1992) 對(duì)殺球靈進(jìn)行了抗雞球蟲(chóng)病的籠飼試驗(yàn)和圍欄試驗(yàn)?;\飼試驗(yàn)結(jié)果表明: 殺球靈組對(duì)每只雞感染5 萬(wàn)個(gè)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊的保護(hù)率為100% ,而感染不給藥組死亡率達(dá)45% ;與不感染不給藥組相比,殺球靈組感染后第7 天的相對(duì)增重率為95% ,而感染不給藥組相對(duì)增重率僅68.7% ;殺球靈組感染后第7 天的盲腸病變值和卵囊值均為零,感染不給藥組盲腸病變值為34.5 ,卵囊值為20 。殺球靈組的抗球蟲(chóng)指數(shù)為195.6 ,表明有顯著抗球蟲(chóng)效力。圍欄試驗(yàn)結(jié)果表明: 當(dāng)采用每只雞混合感染孢子化卵囊(柔嫩艾美耳球蟲(chóng)5 萬(wàn)個(gè),堆型艾美耳球蟲(chóng)10 萬(wàn)個(gè)和巨型艾美耳球蟲(chóng)5 萬(wàn)個(gè))時(shí),殺球靈組的平均增重和飼料報(bào)酬明顯高于速丹組和感染不給藥組;殺球靈組在感染后第7 天和第14 天的病變記分為零,而速丹組分別為4 和1.0 ,感染不給藥組為4 和1.3 ;殺球靈組的死亡率為零,速丹組為40.83W ,感染不給藥組為62.08% ;殺球靈組在整個(gè)飼養(yǎng)期間都無(wú)卵囊排出,而速丹組和感染不給藥組在感染后的第7 天均有大量卵囊排出,第14 天仍有不少卵囊排出。以上結(jié)果表明,殺球靈防治雞球蟲(chóng)病效果理想,值得推廣。
劉毅等(1990) 報(bào)道了湖南省化工研究所研制的阿克洛胺(Aklomide) 對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病的防治效果。試驗(yàn)雞每只感染柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊3 萬(wàn)個(gè)(除不感染不給藥組外),感染卵囊前2 天在飼料中拌入0.1% ,0.05% ,0.025% 的阿克洛胺,以氯苯胍組(3.3 ×10-5) 作藥物對(duì)照。試驗(yàn)以平均只增重、血糞記分、病變記分、飼抖報(bào)酬等作療效判定指標(biāo)。結(jié)果表明: 不感染不給藥組的平均只增重為86 克,飼料報(bào)酬為3.95 。0.05% 和0.l% 的阿克洛胺組無(wú)血糞,盲腸無(wú)肉眼可見(jiàn)球蟲(chóng)病變,平均其增重分別為70.9 和82.9 ,飼料報(bào)酬分別為5.4 及4.02 ,比0.025% 組及氯苯胍組為優(yōu)。作者認(rèn)為該藥以0.05% 濃度加入飼料中對(duì)于防治雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病有良效。
張勤等(1990) 報(bào)道了菌必滅對(duì)雞的試驗(yàn)性盲腸球蟲(chóng)病的治療效果。菌必滅為磺胺二甲基嘧啶制劑,配制成濃度為0.15% 的溶液,飲水給藥,連飲7 天。結(jié)果證明從感染前l 天開(kāi)始給藥直到感染后72h 開(kāi)始給藥,都能有效地消除血糞排出和防止球蟲(chóng)病引起的死亡。
孫浴東等(1990) 報(bào)道了鹽霉素、康樂(lè)安對(duì)內(nèi)用仔雞防治球蟲(chóng)病的試驗(yàn)。飼喂時(shí)間49 天,7 日齡開(kāi)始投藥,上市前5 天停藥。從成活率、飼料轉(zhuǎn)化率、增重及屠宰測(cè)定看,鹽霉素組比康樂(lè)安組要好。
孫寶貴蕁(1990) 報(bào)道了二甲硫胺與其他抗球蟲(chóng)藥對(duì)人工感染柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病的療效對(duì)比試驗(yàn)。作者采用人工感染卵囊的方法,試驗(yàn)雞于感染前l 天投藥。試驗(yàn)結(jié)果證明,二甲硫胺6.2 ×10-5 ,氯苯胍3.3 ×10-5 ,氨丙啉l ××10-4 ,對(duì)5 萬(wàn)個(gè)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊攻擊的雛雞,都有明顯的保護(hù)作用,3 種藥物組雞的增重率均比不感染不給藥組為高,說(shuō)明這3 種藥物不僅能預(yù)防雞球蟲(chóng)病,并有增重效果。試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明呋喃唑酮2 ×10-4 、復(fù)方敵苗凈2 ×10-4 拌飼,不能使感染雛雞得到完全保護(hù)。隨明這兩種藥物長(zhǎng)期應(yīng)用,產(chǎn)生了抗藥性蟲(chóng)株。
孫寶貴、何新民(1990) 應(yīng)用二甲硫胺6.2 ×10-5 進(jìn)行對(duì)自然感染雞球蟲(chóng)病的預(yù)防試驗(yàn)。以氯苯胍3.3 ×10-5 作藥物對(duì)照,另設(shè)不用藥對(duì)照組。藥效判定按死亡率、增重、卵囊數(shù)3 項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行考核。試驗(yàn)結(jié)果證明,6.2 ×10-5 二甲硫胺拌飼,完全可以控制生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)雞球蟲(chóng)病的發(fā)生,而且安全。
童村等(1984) 報(bào)道了蒽環(huán)類抗生素防治雞球蟲(chóng)病的初步研究。文中介紹80334 菌種是從我國(guó)湖北省襄樊地區(qū)的土壤中分離獲得的一株鏈霉素菌,它產(chǎn)生紅色蒽環(huán)類抗生素80334 (相似于1- 羥基阿克拉霉素)。經(jīng)初步試驗(yàn)表明: 抗生素80334 對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)具有明顯的防治作用。
史天衛(wèi)等(1984) 進(jìn)行了蒽環(huán)類抗生素防治雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的籠飼試驗(yàn)。試驗(yàn)“鹽霉素(7.5 ×10-5) 為藥對(duì)組。試驗(yàn)結(jié)果表明,80334 菌絲體組的臨診血便、死亡率與鹽霉素組無(wú)顯著差異。盲腸病變80334 菌絲體組略好于鹽霉素組,增重80334 菌絲體組則比鹽霉素組差。為了彌補(bǔ)80334 菌絲體減重的缺點(diǎn),作者在試驗(yàn)組里又增加了其他抗生素(青霉素與潔霉素),將以上兩種抗生素混合于80334 菌絲體中進(jìn)行藥物對(duì)比試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明,其臨診血便、死亡率、盲腸病變記分均與以前未加青霉素、潔霉素的試驗(yàn)結(jié)果相同,但其增重則超過(guò)了鹽霉素組15.2% ~19.45% 。
李揚(yáng)等(1986) 以常山酮、可愛(ài)丹和上海獸藥廠生產(chǎn)的強(qiáng)效氨丙啉對(duì)雛雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病進(jìn)行了藥效對(duì)比試驗(yàn)。藥效以抗球蟲(chóng)指數(shù)為判定標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)結(jié)果,常山酮的抗球蟲(chóng)指數(shù)為205.59 ,可愛(ài)丹為169.6 ,強(qiáng)效氨丙啉為160.14 (每公斤飼料0.5g 藥飼)。作者文中提到另一試驗(yàn)中,每公斤飼料加1g 強(qiáng)效氨丙啉藥飼,則有十分滿意的抗球蟲(chóng)效果。
楊振中等(1980) 對(duì)國(guó)產(chǎn)氨丙啉進(jìn)行了抗柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病的舍飼試驗(yàn)。試驗(yàn)用21 日齡來(lái)航雛雞,分國(guó)產(chǎn)氨丙啉1 ×10-4 組和不用藥對(duì)照組兩個(gè)組,每組100 只雞,每組雞群都掛有一鐵絲籠,籠內(nèi)飼養(yǎng)3 只雞,每只經(jīng)人工感染4 萬(wàn)個(gè)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊的“種子雞”,感染卵囊后第5 天掛入,連續(xù)掛籠25 天?!胺N子雞”籠下雞舍地面木屑上每天噴灑適量的水,以保持有利于卵囊發(fā)育的濕度?!胺N子雞”掛入后的第10 、15 、20 、25 、30 天每次分別剖檢5-10 只雞,作病變觀察和卵囊檢查,試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)以群體稱重各一次。
通過(guò)試驗(yàn)表明:1. 氨丙啉1 ×10-4 混入飼料內(nèi)進(jìn)行1 個(gè)月的喂雞試驗(yàn),因球蟲(chóng)病引起死亡的為1% ,不用藥對(duì)照組因球蟲(chóng)病致死為10% ,兩組相比差異顯著。2. 解剖雞的盲腸病變與卵囊檢出相符合;氨丙啉組剖檢40 只雞中觀察到有輕微病變,又在盲腸內(nèi)容物中查到卵囊的僅1 例,占2.5% 。對(duì)照組剖檢的40 只雞中盲腸病變嚴(yán)重的有38 例(同時(shí)都查到多量的球蟲(chóng)卵囊),占抽殺剖檢雞的85% 。兩組相比差異非常顯著。3. 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)兩組的實(shí)際增重?cái)?shù)值也有明顯的差別。不用藥對(duì)照組平均增重142.5 克作為100% ,氨丙啉組平均增重165 克,為對(duì)照組增重116.2% 。
呂文順等(1981) 對(duì)進(jìn)口的強(qiáng)力氨丙啉作了抗球蟲(chóng)病效力和毒性試驗(yàn)。強(qiáng)力氨丙啉分6.3 ×10-5 、1.25 ×10-4 、2.5 ×10-4 、,5 ×10-4 、和l ×10-3 (以Amprolium 計(jì)算)5 個(gè)組,以氯苯胍3 ×10-5 、和6 ×10-5 為對(duì)照組。藥物均勻混于飼料中喂服,人工感染球蟲(chóng)卵囊前2 日投喂,直到試驗(yàn)結(jié)束。除不感染不給藥組外,各組雞均經(jīng)口感染孢子化的混合種球蟲(chóng)卵囊(柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)、和緩艾美耳球蟲(chóng)、布氏艾美耳球蟲(chóng)、變位艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)和早熟艾美耳球蟲(chóng))10 萬(wàn)個(gè)。試驗(yàn)結(jié)果: 感染不給藥組于人工感染卵囊后第5 天全部發(fā)病,死亡8/10 ,剖檢證實(shí)皆死于盲腸球蟲(chóng)和小腸球蟲(chóng)病。強(qiáng)力氨丙啉6.3 ×10-5 、組保護(hù)5/5 ,1.25 ×10-4 、組保護(hù)10/10 ,2.5 ×10-4 、、5 ×10-4 、1 ×10-3 組各保護(hù)5/5 ,氯苯胍3 ×10-5 、和6 ×10-5 組保護(hù)10/10 。各試驗(yàn)組感染后第5 ~7 天的增重率,強(qiáng)力氨丙啉6.3 ×10-5 組為68.1% ,1.25 ×10-4 組平均為96.8% ,2.5 ×10-4 組為113.6% ,5 ×10-4 和1 ×10-3 組為102.2% ;氯苯胍3 ×10-5 、6 ×10-5 組平均為97.8% 。試驗(yàn)證明,強(qiáng)力氨丙啉是一種較好的抗雞球蟲(chóng)病藥物,1.25 ×10-4 以上濃度拌料飼喂,可抗大量艾美耳球蟲(chóng)混合種卵囊的感染,防止球蟲(chóng)病的發(fā)生。本藥安全幅度大,1 ×10-3 連續(xù)飼喂16 天,2.5 ×10-4 連續(xù)喂18 日齡小雞40 天未見(jiàn)有毒性反應(yīng)。
張毅強(qiáng)等(1980) 報(bào)道了國(guó)產(chǎn)氯苯胍 對(duì)雛雞球蟲(chóng)病的療效和毒性試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明:l. 國(guó)產(chǎn)氯苯胍對(duì)人工感染引發(fā)的雛雞球蟲(chóng)病以3.3 ×10-5 的劑量混飼、飲服和混飼加飲服3 個(gè)治療組的防病率分別為92% 、100% 和95.5% ;保護(hù)率分別為96% 、100% 和100% ,證明國(guó)產(chǎn)氯苯胍對(duì)雞球蟲(chóng)有滿意的抑制作用,其中飲服效果更為滿意。增重方面,試驗(yàn)結(jié)束后3 個(gè)治療組每雛平均增重率分別為24.1% 、24.1% 和14.5% ,與不感染不給藥組(增重率為31.9% )相比稍差,但與感染不給藥組(增重率為5.3% )相比就好多了。2. 自然感染試驗(yàn)中,以3.3 ×10-5 劑量混飼,防病率為92% ,保護(hù)率為96% ,增重率為31.6% ,與對(duì)照組(發(fā)病率81.1% ,死亡率24.3% ,減重率5.9% )相比,效果顯著。這證明國(guó)產(chǎn)氯苯胍對(duì)雞球蟲(chóng)病有很高的預(yù)防作用。3. 毒性試驗(yàn)以治療量的4 倍、6 倍、8 倍和10 倍的劑量連續(xù)服用10 天,各組受試雞在整個(gè)試驗(yàn)期間食欲正常,耐受良好,除發(fā)現(xiàn)3.3 ×10-4 組在試驗(yàn)后期體重降低外。其余各組雞生長(zhǎng)發(fā)育良好,未發(fā)病任何中毒和死亡現(xiàn)象,與不用藥對(duì)照組相比無(wú)差別。證明國(guó)產(chǎn)氯苯胍毒性較小安全范圍較大,接3.3 ×10-4 劑量混飼防治雞球蟲(chóng)病是安全的。
張紹昌(1988) 進(jìn)行了磷酸伯氨喹對(duì)籠養(yǎng)雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病的療效試驗(yàn)。試驗(yàn)以氯苯胍為對(duì)照藥物。結(jié)果在發(fā)病率、死亡率、病變記分方面與氯苯胍組無(wú)差異,而相對(duì)增重率、飼料利用率均優(yōu)于氯苯胍組,接近不感染不給藥組,但排出球蟲(chóng)卵囊數(shù)較高。
吳薛忠等(1994) 用我國(guó)研制成功的代號(hào)為 AC- Ⅰ的抗球蟲(chóng)藥,作了防治雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病的籠飼試驗(yàn),試驗(yàn)共進(jìn)行了4 批。一、二批的試驗(yàn)單用AC- Ⅰ感染卵囊前24h 開(kāi)始服藥,直至感染后第7 天結(jié)束,每只雞人工感染5 萬(wàn)個(gè)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊(除白對(duì)照組雞外),療效評(píng)定以抗球蟲(chóng)指數(shù)(ACI) 為標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)結(jié)果顯示1 、2 批AC- Ⅰ的抗球蟲(chóng)指數(shù)為191.6 和196 67 ,而感染不用藥組為113.6 和140. 91 。第3 、4 批試驗(yàn),以同患產(chǎn)品Diclazuril 進(jìn)行對(duì)比,結(jié)果AC- Ⅰ的抗球蟲(chóng)指數(shù)為194.36 和194.25 ,Diclazuril 的抗球蟲(chóng)指數(shù)為193 .88 和194. 12 ,感染不用藥組僅為77.54 和58.07 。結(jié)果表明我國(guó)合成的AC- Ⅰ性能穩(wěn)定,效果可靠,與國(guó)外同類產(chǎn)品Diclazuril 的抗球蟲(chóng)水平完全一致。
吳薛忠等(1994) 報(bào)道了我國(guó)自行研制的抗球蟲(chóng)新藥- 海南霉素預(yù)混劑(商品名為雞球素)對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)和變位艾美耳球蟲(chóng)籠飼試驗(yàn)研究。海南霉素用了兩種劑量,一為5 ×10-6 另一為7.5 ×10-6 ,以鹽霉素6 ×10-5 作藥物對(duì)照。感染卵囊前l 天開(kāi)始服藥,喂至感染后7 ~8 天試驗(yàn)結(jié)束。療效評(píng)定以抗球蟲(chóng)指數(shù)(ACI) 為標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4-! 。
表4-1 海南霉素療效評(píng)定結(jié)果
整個(gè)試驗(yàn)結(jié)果表明海南霉素對(duì)雞的主要5 種球蟲(chóng)都有明顯的抗球蟲(chóng)效果,是一種值得推廣的高效低量的抗球蟲(chóng)藥物。
聶奎等(1994) 報(bào)道丁海南霉素對(duì)雞球蟲(chóng)病治療和預(yù)防效果。作者對(duì)發(fā)病雞群施用海南霉素7.5 ×10-6 拌料喂服,用藥后第1 天雞死亡率下降,第3 天后停止死亡。用藥后共死7 只(藥前3 天已死亡38 只)。對(duì)飼喂在同一雞場(chǎng)的l200 只伊莎雛雞(10 日齡)及200 只雅康雛雞(7 日齡)給予海南霉素5 ×10-6 ,拌飼喂服,結(jié)果無(wú)一死亡,存活率100% 。
聶奎等(1994) 用海南霉素進(jìn)行預(yù)防柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病的療效試驗(yàn)。l5 日齡無(wú)球蟲(chóng)雞每只人工感染柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢于化卵囊10 萬(wàn)個(gè),給予5 ×10-6 的海南霉素拌飼,有很好的預(yù)防效果,其存活率為100% ,血便記分0.44 ,病變記分1.13 ,抗球蟲(chóng)指數(shù)為172.75 。與感染不給藥組抗球蟲(chóng)指數(shù)相比,差異極顯著(P <0.01) 。作者將海南霉素與氯苯胍聯(lián)合使用,顯示出很好的相加作用,病變記分0.38 ,血便記分0.13 ,比海南霉素單用為低;抗球蟲(chóng)指數(shù)為180.25 ,比海南霉素單用時(shí)為高。而氯苯胍因長(zhǎng)期單一使用和不合理使用,柔嫩艾美耳球蟲(chóng)對(duì)它已產(chǎn)生耐藥性,單用氯苯胍死亡率高達(dá)62.5% ,血便記分l.59 。病變記分3.63 ,抗球蟲(chóng)指數(shù)僅達(dá)28.25 。
黃兵等(1994) 在人工感染柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊下,對(duì)殺球靈、常山酮、氯羥吡啶、馬杜拉霉素和鹽霉素5 種抗球蟲(chóng)藥,進(jìn)行了3 批防治雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病的療效對(duì)比試驗(yàn)。療效評(píng)定以抗球蟲(chóng)指數(shù)為標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)結(jié)果顯示上述5 種抗球蟲(chóng)藥的抗球蟲(chóng)指數(shù)分別為,殺球靈195.52 ,195.29 和192.74 ;常山酮為200.60 、199.04 和187.45 ;氯羥吡啶為179. 64 ,174.42 和167.93 ;馬杜拉霉素為194.23 ,194.23 和198.89 ;鹽霉素為167.32 ,170.95 和164.82 。用之為對(duì)照的感染不給藥組的抗球蟲(chóng)指數(shù)分126.50 ,130.97 和93.31 。殺球靈、常山酮和馬杜拉霉素的抗柔嫩艾美耳球蟲(chóng)效果非常好,抗球蟲(chóng)指數(shù)超過(guò)190 ;氯羥吡啶和鹽霉素的效果次之,其抗球蟲(chóng)指數(shù)在160 ~180 之間。
吳兆敏(1990) 報(bào)道了短小棒狀桿菌菌苗(CPV) 預(yù)防雛雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病的研究。作者通過(guò)對(duì)不同時(shí)期(4 ,7 ,15 天)小雞血清中溶菌酶含量的測(cè)定,顯示出CPV 對(duì)小雞腹腔巨噬細(xì)胞有明顯的激活作用。通過(guò)試驗(yàn)組,腹腔注射40 億CPV/ 只,血清溶菌酶的含量平均為18. 00 ±0.43 。對(duì)照組腹腔注射同量的生理鹽水,血清溶菌酶的含量平均為10.20 ±0.11 。溶菌酶含量的顯著增高尤以注射CPV 后第4 天最為明顯。到2 周仍維持在一定水平上。試驗(yàn)設(shè)兩組,每組20 只雞,同時(shí)口服接種柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊(1.5 萬(wàn)/ 只)。試驗(yàn)組于接種后1 天腹腔注射40 億CPV/ 只,7 天后計(jì)算死亡率。對(duì)照組不注射CPV 。試驗(yàn)結(jié)果對(duì)照組死亡率達(dá)80% ,并伴有大量血便,而試驗(yàn)組無(wú)一死亡,也未見(jiàn)血便。在初次感染后2 周,每只雞用15 萬(wàn)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊攻擊,試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明試驗(yàn)雞對(duì)再感染具有100% 保護(hù)率,而健康對(duì)照組雞95% 死亡,僅有5% 雖未死亡,但大量排血便,奄奄一息。說(shuō)明CPV 對(duì)小雞腹腔巨噬細(xì)胞有明顯激活作用,從而增強(qiáng)了小雞對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病的抵抗能力。這一結(jié)果與Eng-Hong-Lee 等研究的Carragenan 有破壞和殺傷雞腹腔巨噬細(xì)胞的功能,以致使球蟲(chóng)感染大大增強(qiáng)的報(bào)道是一致的。
陳國(guó)慶等(1992) 進(jìn)行了不同飼料營(yíng)養(yǎng)成分抗球蟲(chóng)效力對(duì)比試驗(yàn)。試驗(yàn)選用塔特姆(Tatum) 品種商品代同一批雛雞50 只,雌雄各半,發(fā)育良好,初生重均在0.041 ~0.042kg 。按雌雄各半,隨機(jī)將50 只雛雞分為5 個(gè)組,即對(duì)照l 組,對(duì)照2 組,試驗(yàn)1 ,2 、3 組,每組10 只,均飼養(yǎng)在經(jīng)消毒處理后的鐵絲籠中。試驗(yàn)1 組喂飼魚(yú)粉蛋白型飼料配方組合的日糧,試驗(yàn)2 組喂飼植物蛋白型(大豆餅)飼料配方組合的日糧,試驗(yàn)3 組喂飼酵母蛋白型飼料配方組合的日糧。試驗(yàn)1 、2 、3 組的飼料中,按等量遞加法加入同一種代號(hào)為E 的高效添加劑(內(nèi)含超標(biāo)多維,礦微及限制性氨基酸,促進(jìn)生長(zhǎng)的藥物和抗球蟲(chóng)藥物)。飼養(yǎng)管理及免疫程序按肉用仔雞生產(chǎn)常規(guī)進(jìn)行。
雛雞喂至14 日齡時(shí),除對(duì)照1 組外,其余各組雞每只均經(jīng)口感染10 萬(wàn)個(gè)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊。試驗(yàn)結(jié)果: 對(duì)照1 組,對(duì)照2 組,試驗(yàn)1 、2 、3 組相對(duì)增重率分別為100 ,43.3 ,108 ,79.4 ,82.3 ;存活率分別為100 ,50 ,100 ,100 ,90 ;病變值分別為0 ,3.9 ,1 ,5.5 ,5.0 ;卵囊值分別為0 ,4 ,0 ,5 ,5 ;抗球蟲(chóng)指數(shù)分別為200 ,85.4 ,207.6 ,168.9 ,162.3 。由此可見(jiàn)同一種具有高效抗球蟲(chóng)藥添加到不同飼料營(yíng)養(yǎng)成分所組成的肉用仔雞日糧中,通過(guò)喂飼之后,肉雞所獲得的抗球蟲(chóng)效力是不同的。
林昆華等(1993) 對(duì)國(guó)產(chǎn)馬杜拉霉素的純結(jié)晶體、馬杜拉霉素菌絲體、馬杜拉霉素粗提液進(jìn)行了預(yù)防肉用仔雞球蟲(chóng)病的療效試驗(yàn),共進(jìn)行兩個(gè)試驗(yàn),試驗(yàn)一,每只雛雞人工感染柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊7 萬(wàn)個(gè),試驗(yàn)二的感染卵囊量提高高10 萬(wàn)個(gè)。試驗(yàn)以進(jìn)口的同類產(chǎn)品“加?!睘樗幬飳?duì)照。療效評(píng)定以抗球蟲(chóng)指數(shù)(ACI) 為標(biāo)準(zhǔn)。服藥組雞于人工感染卵囊前2 天開(kāi)始喂藥,直到試驗(yàn)結(jié)束,即感染卵囊后第8 天。
試驗(yàn)一3 批雞試驗(yàn)結(jié)果表明,國(guó)產(chǎn)馬杜拉霉素純結(jié)晶體5 ×10-6 。和馬杜拉霉素菌絲體5 ×10-6 的抗柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的效力可與“加?!毕噫敲?。馬杜拉霉素純結(jié)晶體的ACI 分別為199.5 、197.1 和199.8 ,馬杜拉霉素純結(jié)晶體的ACI 分別為198.2 、199.2 和199.6 ,加福ACI 分別由199.4 、195.1 和197.0 ,均屬高效抗球蟲(chóng)藥物。馬杜拉霉素粗提液5 ×10-6 混飼,所得抗球蟲(chóng)指數(shù)分別為189.2 、191.2 和189.2 ,不如馬杜拉霉素純結(jié)晶體和菌絲體,相對(duì)增重率較低。
試驗(yàn)二試驗(yàn)結(jié)果顯示,國(guó)產(chǎn)馬杜拉霉素純結(jié)晶體和菌絲體1% 預(yù)混劑,按5 ×10-6 劑量混飼,對(duì)人工感染10 萬(wàn)個(gè)/ 只柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊的雛雞,可有效地防止球蟲(chóng)病的發(fā)生,盲腸不產(chǎn)生病變,糞便中不出現(xiàn)卵囊,對(duì)增重?zé)o不良影響,抗球蟲(chóng)指數(shù)達(dá)到或超過(guò)美國(guó)氰胺公司生產(chǎn)的加福。馬杜拉霉素粗提液1% 預(yù)餛劑,按5 ×10-6 飼,可預(yù)防雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病的發(fā)生,但盲腸出現(xiàn)輕微病變,糞便中出現(xiàn)少量卵囊,適口性稍差,對(duì)增重有一定影響。
林昆華等(1994) 報(bào)道,在籠飼試驗(yàn)中,曾應(yīng)用國(guó)產(chǎn)馬杜拉霉素(商品名抗球王)和加福各3 ×10-6 、4 ×10-6 、7 ×10-6 、9 ×10-6 和1.5 ×10-5 的劑量進(jìn)行試驗(yàn),取得滿意的結(jié)果,唯9 ×10-6 和1.54 ×10-5 的結(jié)果與美國(guó)氰胺公司報(bào)告的材料不一致,可能是籠飼試驗(yàn)用藥時(shí)間短的緣故。為了解釋這一問(wèn)題,作者做了不同劑量的國(guó)產(chǎn)馬杜拉霉素在肉雞生產(chǎn)全程應(yīng)用的試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果顯示,以雞增重率、相對(duì)增重率(以推薦劑量5 ×10-6 作基礎(chǔ)算)有隨藥物濃度的增高,呈下降趨勢(shì)。與5 ×10-6 組相比,使用9 ×10-6 劑量的相對(duì)增重率要損失12 個(gè)百分點(diǎn)。抗球王1.5 ×10-5 組、加福1.5 ×10-5 組的增重率和相對(duì)增重率與5 ×10-6 、7 ×10-6 、9 ×10-6 組相比,差異甚大,但抗球王組比加福組顯得要好些。從臨診表現(xiàn)來(lái)看,抗球王5 ×10-6 、7 ×10-6 、9 ×10-6 組雞只均顯示正常;抗球王1.5 ×10-5 和加福l.5 ×10-5 組雞只的精神、食欲均明顯較差。生長(zhǎng)緩饅,羽毛無(wú)光澤,較零亂,加福1.5 ×10-5 組比抗球土1.5 ×10-5 組顯得更為嚴(yán)重,但沒(méi)有發(fā)生死亡。
汪明等(1994) 進(jìn)行了國(guó)產(chǎn)馬杜拉霉素(抗球王)結(jié)晶體5 ×10-6 、菌絲體(5 ×10-6) 預(yù)防肉雞球蟲(chóng)病的田間試驗(yàn)。試驗(yàn)以加福(5 ×10-6) 為對(duì)照。試驗(yàn)結(jié)果是:1.1 ~43 日齡7 次抽樣稱重的數(shù)據(jù)顯示,在投藥期間,馬杜拉霉素結(jié)晶體組平均增重1480g 、菌絲休組為1475g ,加福組為1521g ,加福組略高于結(jié)晶體和菌絲體組,統(tǒng)計(jì)分析表明,3 組之間無(wú)顯著差異。2. 糞便卵囊檢查結(jié)果,3 組在1 、14 、38 和45 日齡,每克糞便卵囊數(shù)均為0 ,說(shuō)明馬杜拉霉素結(jié)晶體、菌絲體和加福都有好的抗球蟲(chóng)效果。3. 在整個(gè)試驗(yàn)期間,試驗(yàn)組和對(duì)照組均未發(fā)現(xiàn)毒副反應(yīng),也未發(fā)現(xiàn)因球蟲(chóng)病死亡的雞只。
林昆華等(1994) 對(duì)德國(guó)拜耳藥廠生產(chǎn)的新抗球蟲(chóng)藥百球清(Baycox ,為Toltrazuril2.5% 溶液)進(jìn)行了抗球蟲(chóng)效果的驗(yàn)證試驗(yàn)。試驗(yàn)以加福(美國(guó)氰胺公司生產(chǎn)的馬杜拉霉素1% 預(yù)混劑)為對(duì)照藥物。百球清2.5 ×10-5 飲服,于人工感染柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊后第3 、4 兩天給藥,馬杜拉霉素5 ×10-6 混飼,于人工感染柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊前2 天開(kāi)始服藥,直至試驗(yàn)結(jié)束。卵囊感染量為每只8 萬(wàn)個(gè)。療效判定以抗球蟲(chóng)指數(shù)(ACI) 為標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)結(jié)果: 百球清組3 批試驗(yàn)所得ACI 分別為188.9 、197.3 和196.7 ;馬杜拉霉素組的ACI 分別為175.7 、193.1 和195.7 ;感染不給藥組分別為80.4 、111.1 和91.5 。
謝明權(quán)等(1989) 進(jìn)行了球安(Avatec) 防治雞球蟲(chóng)病的試驗(yàn)。球安有效成分為拉薩洛菌素( Lasalocid) 。以抗球蟲(chóng)指數(shù)(ACI) 為療效判定標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)結(jié)果表明:7.5 ×10-5 球安效果達(dá)優(yōu)秀水平,5 批試驗(yàn)的ACI 分別為236.5 ,186.9 ,196.6 ,195.1 和198.9 而感染不給藥組的ACI 分別為108.8 ,23.2 ,107 ,5 ,531 和58 。
田間試驗(yàn),對(duì)照組球蟲(chóng)病死亡率達(dá)46.53% ~55.84% ,而球安組則無(wú)一例因雞球蟲(chóng)病死亡的。
黃兵等(1991) 對(duì)加福(Cygro 馬杜拉霉素)用3 批共150 只21 日齡伊莎公雞人工感染柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊8 萬(wàn)個(gè),進(jìn)行了抗球蟲(chóng)的籠飼試驗(yàn),以鹽霉素(6 ×10-5) 和克球多(Clopidol ,1.25 ×10-4 )為藥物對(duì)照,以抗球蟲(chóng)指數(shù)(ACI) 為療效判定標(biāo)準(zhǔn),3 批試驗(yàn)結(jié)果: 加福的抗球蟲(chóng)指數(shù)分別為193.51 、190.05 和199.23 ;鹽霉素的抗球蟲(chóng)指數(shù)分別為168.74 、168.24 和179.43 ;克球多的抗球蟲(chóng)指數(shù)分別為176.84 、183.05 和171.26 。證明加福能有效預(yù)防柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病,其效果優(yōu)于鹽霉素和克球多。
史天衛(wèi)等(1992) 進(jìn)行的田間試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明,5 ×10-6 的馬杜拉霉素混飼,可預(yù)防雞球蟲(chóng)病,對(duì)雞增重、育成率,飼料利用率無(wú)不良影響。試驗(yàn)結(jié)果比呋喃唑酮預(yù)防雞球蟲(chóng)病的效果更好。
謝明權(quán)等(1987) 用速丹(3 ×10-6) ,球凈(Necoxine ,1.25 ×10-4) ,球安( Avatec ,7.5 ×10-5 ,優(yōu)素精(Salinomycin ,5 ×10-5 ),加強(qiáng)安保樂(lè)(1.55 ×10-4) ,欲可胖(Coban ,l ×l0-4) ,球痢靈(1.25 ×10-4) ,敵球素(Doccox ,3 ×l0-5) ,氯苯胍(3.3 ×10-5)9 種抗球蟲(chóng)藥對(duì)廣東省惠陽(yáng)和湛江兩地的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室和叫間的預(yù)防試驗(yàn)。藥物療效以抗球蟲(chóng)指數(shù)( ACI) 為考核標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)結(jié)果: 速丹、球凈,球安3 種藥物對(duì)惠陽(yáng)、湛江兩地的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)效果均非常好,抗球蟲(chóng)指數(shù)均達(dá)到優(yōu)秀水平(180 以上)。加強(qiáng)安保樂(lè)對(duì)湛江的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)效果很好,ACI 達(dá)優(yōu)秀水平,但對(duì)惠陽(yáng)蟲(chóng)株效果較差,其ACI 僅為151 。優(yōu)素精對(duì)惠陽(yáng)的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)很敏感,ACI 達(dá)196.78 ,但對(duì)湛江蟲(chóng)株則效果較差,其ACI 僅這133.3 。其他3 種藥物(欲可胖、球痢靈、氯苯胍)則對(duì)惠陽(yáng)、湛江兩地的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)效果均差。
田間試驗(yàn)結(jié)果,從增重和飼料報(bào)酬比較,各組雞全期平均日增重以球痢靈、速丹、敵球素、球安為優(yōu),而球凈則增重較少,但經(jīng)方差分析,僅球痢靈組與球凈組有顯著差異,其他均顯差異不顯著。從料肉比結(jié)果看,速丹、敵球素、球痢靈、球安較其他組為低,而球凈較高。各組在排血便、球蟲(chóng)病死亡和糞檢卵囊數(shù)結(jié)果,速丹、球凈、敵球素、球安組在整個(gè)試驗(yàn)期間均無(wú)發(fā)現(xiàn)球蟲(chóng)病。從糞便卵囊數(shù)看,速丹、球凈、敵球素、優(yōu)素精、氯苯胍組數(shù)較低。
作者認(rèn)為,廣東省面臨港、澳,引入新一代球蟲(chóng)藥時(shí)間較長(zhǎng),目前為止,國(guó)際上常用的球蟲(chóng)藥,除極少數(shù)以外,如加福,大部分已在省內(nèi)部分飼料廠和雞場(chǎng)進(jìn)行了不同程度的驗(yàn)證或使用。生產(chǎn)單位對(duì)球蟲(chóng)藥性能及使用方法不十分了解,故往往出現(xiàn)盲目用藥現(xiàn)象。有些雞場(chǎng)長(zhǎng)期使用一種可愛(ài)丹或優(yōu)素精,盡管使用初期效果好,但不久便產(chǎn)生抗藥性,療效迅速下降。在試驗(yàn)中,球痢靈、氯苯胍等的療效差是由于這個(gè)原因引起。克服抗藥性產(chǎn)生的主要方法是選擇幾種較好抗球蟲(chóng)藥進(jìn)行交互使用,但適合大面積使用而抗球蟲(chóng)效果優(yōu)秀的藥物種類并不多,故在交互使用時(shí),可在球蟲(chóng)病低發(fā)季節(jié)使用抗球蟲(chóng)效果較差的藥物,這樣既可防止球蟲(chóng)病嚴(yán)重暴發(fā),又可延長(zhǎng)球蟲(chóng)藥使用的壽命。
為了全面控制雞球蟲(chóng)病,國(guó)外一直在探索雞球蟲(chóng)病的免疫問(wèn)題,近十幾年來(lái)進(jìn)行了大量研究工作,取得不少成果。我國(guó)對(duì)雞球蟲(chóng)病的免疫研究,起步較晚,但也獲得一些可喜的成績(jī)。
王宗儀等(1986) 進(jìn)行了雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)計(jì)劃感染免疫的研究。作者以雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊有計(jì)劃地感染21 日齡來(lái)航雛雞,有3 組每雞分別以500 、5000 、50000 個(gè)卵囊一次經(jīng)口感染;另一組每雞以500 、5000 、50000 個(gè)卵囊每隔10 天依次感染。上述3 組雞均于感染10 天后以50000 個(gè)同種孢子化卵囊經(jīng)口進(jìn)行攻擊,依次感染組于第3 次感染后的第10 天再以50000 個(gè)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢予化卵囊進(jìn)行攻擊,最后于感染后或攻擊后觀察血便和體重變化,每克糞便卵囊數(shù)和盲腸病變記分為免疫效果的評(píng)判內(nèi)容。結(jié)果表現(xiàn)了初次投服的卵囊數(shù)量越多,耐過(guò)的雛雞所獲得的免疫力就越大些,但初次以較大劑量卵囊投服,對(duì)機(jī)體有不良影晌,甚至可造成死亡。而通過(guò)依次增加卵囊的數(shù)量反復(fù)輕微感染雛雞對(duì)機(jī)體的正常生理狀態(tài)幾乎無(wú)不良影響,并且獲得的免疫力也較牢固。
田廣孚(1986) 報(bào)道了用柔嫩艾美耳球蟲(chóng)子孢子接種雞胚對(duì)雛雞進(jìn)行免疫的探索。作者用孵化11 天的雞胚,每胚接種2000 個(gè)子孢子。接種后第7 天解剖3 只活雞胚,均在尿囊膜上發(fā)現(xiàn)裂殖體、大小配子、合子或未成熟卵囊,證明接種成功。接種的雞胚和未接種的雞胚兩者孵化率比較沒(méi)有顯著差異。對(duì)接種子孢子后孵出的2 周齡雛雞,每只用80000 個(gè)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化的卵囊攻擊,與對(duì)照雞比較,其死亡率、盲腸病變、體重、排出的卵囊數(shù)和卵囊孢子化率均無(wú)顯著差異,而只有血便堆數(shù)接種的雞比對(duì)照雞的排出量多。分析試驗(yàn)結(jié)果,認(rèn)為用2000 個(gè)子孢子接種雞胚孵出雛雞,對(duì)80000 個(gè)孢子化卵囊的一次性攻擊,和對(duì)照雞比較來(lái)看出具有免疫力。
吳兆敏等(1990 )應(yīng)用化學(xué)誘變劑N-metheyl-N-nitroso-guanidine (簡(jiǎn)稱NTC )處理雞柔嫩艾姜耳球蟲(chóng)卵囊,以5ug/ml 、10ug/ml 、20ug/ml 、40ug/ml 、80ug/ml 、100ug/ml 濃度。處理30min 、60 min 、120min 、240min ,處理溫度為4 ℃,37 ℃兩種。處理過(guò)的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊反復(fù)漂洗3 次以上。然后口服接種2 周齡小雞(5000 個(gè)卵囊/ 只) ,1 周后再口服接種相同劑量的卵囊。在初次感染后3 周,用10 萬(wàn)個(gè)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊/ 只口服攻擊小雞,觀察其保護(hù)效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn),NTG 處理濃度在5ug/ml ,4 ℃,120min 或者5ug/ml ,37 ℃,30rnin 的兩組均具有100% 的保護(hù)力,而相應(yīng)對(duì)照雛雞僅有10% 保護(hù)力。但NTG 20ug/ml 濃度處理30min ,37 ℃,卵囊已開(kāi)始出現(xiàn)破損,溶解。隨著處理濃度的增高,卵囊破壞數(shù)也增高。與此同時(shí),作者對(duì)二次口服免疫接種后雛雞盲腸病變作了觀察,發(fā)現(xiàn)免疫組盲腸30% 未見(jiàn)病變,65% 有輕度病變、5% 病變略為明顯;而對(duì)照組雞盲腸95% 嚴(yán)重病變,大量出血,僅5% 病變較輕。說(shuō)明NTG 對(duì)雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)有明顯的致弱效果,但仍保持其抗原性水變,具有對(duì)攻擊感染極好的保護(hù)力。
陳明勇、蔣金書(shū)(1990) 通過(guò)利用雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊及子孢子可溶性抗原,成功地建立了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELSA) ,確定了試驗(yàn)最適條件,并用于幾種不同的免疫方法免疫雞血清抗體的檢測(cè)。結(jié)果表明,卵囊和子孢子可溶性抗原的最適工作濃度分別為33ug/ml 和28ug/ml ;兩種抗原在最適包被濃度工作時(shí)檢測(cè)雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)血清抗體,效價(jià)幾乎一致(陽(yáng)性血清為1:640 ~1:5120 )。運(yùn)用卵囊抗原檢測(cè)3 種免疫方法免疫雞血清抗體,一次免疫呈現(xiàn)很高的抗體水平(1:160 ~1:2560) ,二次免疫可以出現(xiàn)再次反應(yīng)(1:1280 ~1:5120) ,而涓滴免疫血清抗體效價(jià)很低(1:80) ,試驗(yàn)對(duì)照組(即藥物預(yù)防對(duì)照和紅對(duì)照組)只有極弱陽(yáng)性反應(yīng)(1:10 ~1:20) ,不免疫不攻擊組呈陰性。試驗(yàn)表明,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)便,靈敏度高,所需抗原量少,適合于雞球蟲(chóng)血清抗體水平的檢測(cè)。
陳明勇等(1990) 研究了分別使用一次、二次和涓滴免疫方法對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊活苗免疫白來(lái)航雛雞的保護(hù)性,以兩種抗球蟲(chóng)藥作為對(duì)照,對(duì)死亡率、病變、增重、飼料報(bào)酬、卵囊排出量、免疫器官重量及白細(xì)胞數(shù)等指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。結(jié)果表明涓滴免疫和一次免疫獲得了完全的保護(hù)性,二者的免疫保護(hù)性效果幾乎一致,均好于一次免疫。一次免疫只能給予一定程度的保護(hù)。免疫劑量,免疫宿主日齡及免疫間隔時(shí)間等相關(guān)因素均對(duì)宿主免疫保護(hù)性呈現(xiàn)不同程度的影響。
各項(xiàng)監(jiān)測(cè)指標(biāo)比較,所有免疫組較感染對(duì)照組呈現(xiàn)顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05 或0.01) ;涓滴免疫、—二次免疫及1250 、2500 、3750 、5000 個(gè)/ 只一次免疫劑量組多項(xiàng)指標(biāo)均優(yōu)于l.25 ×10 -4 克球多( Clopidol) 和莫能霉素藥物預(yù)防組,而100 、500 個(gè)/ 只一次免疫組的保護(hù)效果優(yōu)于克球多藥物預(yù)防組,接近于莫能霉素藥物預(yù)防組。
試驗(yàn)證明,二次免疫和涓滴免疫方法一樣均能刺激機(jī)體產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答,對(duì)大劑量卵囊的攻擊產(chǎn)生完全的保護(hù)作用;對(duì)于一次免疫,只要取得合適的相關(guān)因素,還是可以給予相當(dāng)程度乃至完全的免疫保護(hù)。
段嘉樹(shù)等(1990) 采用一次多量卵曩(5000 個(gè))或初生后1 周內(nèi)每日小量卵囊(總量為210 個(gè))的所謂涓滴方法對(duì)1 日齡或7 日齡雛雞進(jìn)行免疫。14 日齡以10 萬(wàn)個(gè)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊(毒株)攻擊,然后根據(jù)增重與盲腸病變判斷免疫效果。
試驗(yàn)結(jié)果表明:1 日齡和7 日齡一次毒株卵囊免疫組產(chǎn)生有效的保護(hù)作用;1 日齡一次致弱株免疫組和毒株涓滴免疫組可產(chǎn)生部分保護(hù)作用。7 日齡一次致弱株免疫組和致弱株涓滴免疫組未產(chǎn)生保護(hù)作用。
林孟初等(1986) 報(bào)道15 日齡雛雞以11500 個(gè)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊感染后,不論是自然康復(fù)的或以強(qiáng)效氨丙啉藥飼康復(fù)的鴉,于35 日齡時(shí)對(duì)372000 個(gè)同種卵囊的再感染均有良好的保護(hù)力。藥飼康復(fù)雞的增重率略低于自然康復(fù)雞,而排血糞堆數(shù)和排卵囊數(shù)則略高,但兩組間差異不顯著。
黃希寶等(1990) 報(bào)道了對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)幾個(gè)不同發(fā)育階段的抗原性分析及球蟲(chóng)接種免疫反應(yīng)比較。作者通過(guò)SDS-PAGE 分析比較了柔嫩艾美耳球蟲(chóng)生活史中成熟卵囊、未成熟卵囊和裂殖子的可溶性抗原的抗原圖譜,進(jìn)而作硝酸纖維素膜轉(zhuǎn)移電泳鑒定其免疫原性。同時(shí)用Dot-ELISA 方法檢測(cè)了3 種可溶性抗原的存在并對(duì)雞球蟲(chóng)的免疫抗體進(jìn)行了研究。從電泳圖譜和分子量對(duì)數(shù)及遷移率圖看出,其中有12 條蛋白帶為共同抗原,但未成熟卵囊的蛋白帶最多,至少有20 條。硝酸纖維素膜轉(zhuǎn)移后,檢測(cè)到蛋白帶中一條分子量為42000D 的有效抗原,這是一條主帶,并且是共同抗原條帶,經(jīng)Dot-ELISA 檢測(cè)3 種可溶性抗原均具有與雞抗球蟲(chóng)抗體反應(yīng)的抗原存在,其抗原性強(qiáng)弱的順序是: 成熟卵囊>裂殖子>未成熟卵囊。用ELISA 方法對(duì)雞球蟲(chóng)免疫抗體的研究證實(shí):(1) 在一定范圍內(nèi)的感染強(qiáng)度,對(duì)雞死亡率有明顯影響,而對(duì)抗體散價(jià)消長(zhǎng)無(wú)明顯差異。(2) 在最初1 、2 周感染后可引起抗體效價(jià)急劇上升,到4 周后達(dá)高峰,以后即使用高劑量同種球蟲(chóng)卵囊攻擊,抗體效價(jià)也趨于穩(wěn)定,有時(shí)略有下降,但都已具備對(duì)再感染的高度保護(hù)力。(3) 重鉻酸鉀保存卵囊的理想時(shí)間是不超過(guò)3 個(gè)月,但其抗原性在一年內(nèi)不受影響。
谷胱甘肽(Glutaihion ,GSH) ,它廣泛存在于生物細(xì)胞內(nèi),是由γ- 谷氨酸、半胱氨酸和甘氨組成的三肽分子。近年來(lái)國(guó)外學(xué)者應(yīng)用選擇性升高或降低體內(nèi)谷胱甘肽水平的方法,對(duì)GSH 的功能有了進(jìn)一步的認(rèn)識(shí),除傳統(tǒng)所認(rèn)為的抗氧化作用外,GSH 還具有抗毒、抗痛、抗衰老、抗癌作用,參與DNA 的合成,影響酶的活性,在提高細(xì)胞防衛(wèi)功能方面,其作用更為明顯。正由于GSH 的功能廣泛多樣,近年來(lái)引起各國(guó)學(xué)者極大興趣。金衛(wèi)東等(1990) 進(jìn)行了谷胱甘肽水平與雞球蟲(chóng)免疫的相關(guān)性研究。試驗(yàn)用28 ~48 日齡,50 ~70 日齡尼克公雛,共140 只,隨機(jī)分組,給予不同的處理。分別用馬拉酸二乙酯(Dithylmaleale ,DEM) 及Buthionine Sufoximine(BSO) 來(lái)選擇性降低血漿中谷胱甘肽水平,用蛋氨酸添加劑維持谷胱甘肽水平。對(duì)比了試驗(yàn)組和對(duì)照組因GSH 水平的不同,在感染雞球蟲(chóng)后,對(duì)死亡率、增重效率、細(xì)胞免疫、體液免疫、抗球蟲(chóng)藥效等方面產(chǎn)生的影響。采用酶催化法監(jiān)測(cè)血漿中谷胱甘肽的水平,應(yīng)用火箭免疫電泳技術(shù),ANAE 染色法檢測(cè)抗體IgG 水平和T 細(xì)胞百分率的變化。試驗(yàn)結(jié)果表明:1. 本試驗(yàn)對(duì)細(xì)胞免疫和體液免疫進(jìn)行了檢測(cè),對(duì)雞球蟲(chóng)感染的全過(guò)程進(jìn)行了分析,認(rèn)為IgG 抗體與球蟲(chóng)免疫關(guān)系不大,而細(xì)胞免疫在抗雞球蟲(chóng)感染中起主導(dǎo)作用。2. 雞感染球蟲(chóng)時(shí),谷胱甘肽水平的降低,會(huì)減弱細(xì)胞免疫的效果,二者呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)r=0.93 左右,而且呈直線回歸,說(shuō)明谷胱甘肽能提高機(jī)體的細(xì)胞免疫力,抵抗球蟲(chóng)感染。3. 球蟲(chóng)感染的最初4 天,谷胱甘肽消耗最多,此期是影響病情發(fā)展的敏感階段,也是決定免疫保護(hù)作用強(qiáng)弱的關(guān)鍵階段,因此,在球蟲(chóng)感染之前預(yù)防用藥方能起到更好的保護(hù)作用。4. 含硫氨基酸,在機(jī)體感染球蟲(chóng)時(shí),能轉(zhuǎn)化為半胱氨酸來(lái)維持GSH 的正常水平,它們?cè)跍p少死亡和促進(jìn)增重兩方面均有較好的效果,因此,在球蟲(chóng)易感染期應(yīng)增加飼料中含硫氨基酸數(shù)量,蛋氨酸添加劑效果較好。5.GSH 能影響呋哺唑酮藥物的抗球蟲(chóng)作用。GSH 在正常水平時(shí),呋喃唑酮才有較好的抗球蟲(chóng)效果。
黃兵等(1994) 進(jìn)行柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)和變位艾美耳球蟲(chóng)交叉免疫試驗(yàn)。每個(gè)蟲(chóng)種設(shè)3 個(gè)免疫組和1 個(gè)不免疫組,各蟲(chóng)種免疫劑量均為1 萬(wàn)個(gè)。28 日齡進(jìn)行攻擊,每個(gè)蟲(chóng)種的3 個(gè)免疫組各攻擊1 個(gè)蟲(chóng)種,3 個(gè)不免疫組也各攻擊1 個(gè)蟲(chóng)種,作為免疫攻擊組的對(duì)照。柔嫩艾美耳球蟲(chóng)和毒害艾美耳球蟲(chóng)的攻擊劑量為1000 個(gè),變位艾美耳球蟲(chóng)為1 萬(wàn)個(gè)。攻擊后第4 天起,每日收集各組糞便,用McMaster's 計(jì)數(shù)法計(jì)算每克糞便卵囊數(shù)和每日每只雞排卵囊總量,至攻擊后第11 天結(jié)束試驗(yàn),以卵囊相對(duì)減少率(保護(hù)率)作為試驗(yàn)指標(biāo)。結(jié)果顯示: 柔嫩艾美耳球蟲(chóng)免疫組抗同種攻擊的保護(hù)率為92.25% ,抗毒害艾美耳球蟲(chóng)攻擊的保護(hù)率為30.24% ,與變位艾美耳球蟲(chóng)攻擊不存在交叉保護(hù)。毒害艾差耳球蟲(chóng)免疫組抗同種攻擊的保護(hù)率為86.16% ,與變位艾美耳球蟲(chóng)和柔嫩艾美耳球蟲(chóng)攻擊的交叉保護(hù)率分別為30.37% 和63.42% 。變位艾美耳球蟲(chóng)免疫組對(duì)同種攻擊的保護(hù)率達(dá)99.98% ,對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)攻擊無(wú)交叉保護(hù),對(duì)毒害艾美耳球蟲(chóng)攻擊的保護(hù)率為43.28% 。文中還討論了毒害艾美耳球蟲(chóng)與柔嫩艾美耳球蟲(chóng)和變位柔嫩艾美耳球蟲(chóng)存在一些相互交叉保護(hù)的原因。
韓謙等(1994) 報(bào)道了北京農(nóng)業(yè)大學(xué)研制的球蟲(chóng)活苗的實(shí)驗(yàn)室免疫效果研究。試驗(yàn)設(shè)4 組,即不免疫不給藥組,活苗免疫組(雞10 日齡時(shí)飲水免疫). 藥物對(duì)照組(飼料中添加5 ×10-6 馬杜拉霉素),以上3 組雞于52 日齡時(shí),用柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)和堆型艾美耳球蟲(chóng),按每只20 萬(wàn)的劑量攻擊,另設(shè)一對(duì)照組(飼料中添加5 ×10-6 馬杜拉霉素,不攻擊),攻擊后第8 天剖殺全部試驗(yàn)雞只,計(jì)算各組抗球蟲(chóng)指數(shù),判定免疫效果。試驗(yàn)結(jié)果表明: 球蟲(chóng)活苗免疫組的雞只可完全抵抗20 萬(wàn)個(gè)上進(jìn)4 種球蟲(chóng)混合卵囊的攻擊,保護(hù)率為100% ,未出現(xiàn)臨診癥狀,腸道病變值低于1 分,增重率與藥物對(duì)照組和不免疫不給藥組無(wú)明顯差異,抗球蟲(chóng)指數(shù)達(dá)186 。本試驗(yàn)還對(duì)墊料中球蟲(chóng)卵囊數(shù)量進(jìn)行了監(jiān)測(cè),活苗免疫組在免疫后第2 周達(dá)到高峰,每克糞便中卵囊數(shù)為20000 個(gè),第3 周降至5000 ,以后保持平穩(wěn)下降。試驗(yàn)證明,北京農(nóng)業(yè)大學(xué)研制的球蟲(chóng)活蟲(chóng)苗接種是成功的,使用是安全的,可以進(jìn)行田間擴(kuò)大試驗(yàn)。
孫維東等(1992) 介紹了吉林省獸醫(yī)研究所從國(guó)外引進(jìn)多種球蟲(chóng)混合蟲(chóng)苗技術(shù),試制了一批弱毒蟲(chóng)苗,經(jīng)實(shí)驗(yàn)室初步觀察,效果良好。該弱毒蟲(chóng)苗含7 種雞球蟲(chóng)卵囊,定量裝入一個(gè)特制顆粒中,混入飼料內(nèi)投給雛雞,保護(hù)率達(dá)85% ~100% 。輕度污染的雞場(chǎng)應(yīng)用,劑量為每日每只雞l 粒,連喂7 天,可控制球蟲(chóng)病的發(fā)生;嚴(yán)重污染的雞場(chǎng)應(yīng)用,劑量為每日每只雞1 粒,連續(xù)投料2 周,預(yù)防效果可達(dá)100% 。該蟲(chóng)苗于4 ℃環(huán)境中可保持半年。
陳金偉等(1992) 報(bào)道了雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)雞胚致弱蟲(chóng)苗飲水免疫、灌服免疫和拌料免疫方法的比較試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明,球蟲(chóng)蟲(chóng)苗飲水免疫方法免疫預(yù)防球蟲(chóng)病效果好,使用方便,省時(shí)省力,適用于各養(yǎng)雞場(chǎng)。
楊振中等(1985) 報(bào)道了自上海市某雞場(chǎng)分離到的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)株,經(jīng)雞胚傳代培育,然后對(duì)培育株進(jìn)行了安全性和免疫原性測(cè)定以及野外免疫試驗(yàn)。安全性測(cè)定用雞胚傳代到74 代和77 代的蟲(chóng)株,免疫原性測(cè)定用的蟲(chóng)株是84 ~100 代的。試驗(yàn)結(jié)果:1. 雛雞安全性測(cè)定除74 代有1 只雛雞(1/20) 由球蟲(chóng)引起死亡外,其余均無(wú)臨診血便和盲腸病變,盲腸內(nèi)容物進(jìn)行球蟲(chóng)卵囊檢查,其指數(shù)平均都在7.5 左右,而強(qiáng)毒對(duì)照組的球蟲(chóng)病死亡數(shù)為2/10 ,臨診上都有大量血便,剖檢見(jiàn)盲腸腫大有血芯或血便,卵囊指數(shù)都高達(dá)16 ,由此可見(jiàn)74 代和77 代基本是安全的。2.84 代蟲(chóng)株一次免疫接種卵囊數(shù)量為4.5 萬(wàn)后,以強(qiáng)毒株卵囊攻擊后雞只未出現(xiàn)死亡,血便記分為0 ,盲腸病變記分為0.2 ,平均卵囊數(shù)為3.5 ;而強(qiáng)毒株死亡了10% ,血便記分為3 ,盲腸病變記分為3.5 ,平均卵囊教為14.3 。作者在另一試驗(yàn)中,測(cè)定了84 代蟲(chóng)株用3 次免疫(卵囊數(shù)量為1500/ 次)后。強(qiáng)毒株(4.5 萬(wàn)的數(shù)量)攻擊,結(jié)果死亡1/20 ,血便記分為0 ,盲腸病變記分為0.1 ,平均卵囊數(shù)為5.0 。為了世一步確證蟲(chóng)株的免疫性,作者對(duì)雞胚傳代傳了86 ~100 代的蟲(chóng)株各批次蟲(chóng)苗進(jìn)行了重復(fù)試驗(yàn)。免疫雞于免疫結(jié)束后的l4 天以強(qiáng)毒株(4.5 萬(wàn))攻擊,分7 、14 、21 天3 次剖撿,均取得很好的結(jié)果。3. 蟲(chóng)苗在野外現(xiàn)場(chǎng)試用,雛雞從7 日齡(隔天1 次,3 次免疫)開(kāi)始免疫,直到肉雞上市。保護(hù)率高達(dá)99% ,從糞便抽樣檢查球蟲(chóng)卵囊的結(jié)果來(lái)看,免疫效果顯著。
1986 年楊振中等對(duì)雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)(上海株)致弱苗的保存期和免疫期進(jìn)行了試驗(yàn)。保存期測(cè)試選用了85 、86 、89 、95 代次蟲(chóng)苗,在4 ℃普通冰箱內(nèi)分別保存36 ~360 天,分別以l500 劑量對(duì)雛雞隔日1 次,于11 日齡內(nèi)3 次口服免疫,進(jìn)行5 批測(cè)試,免疫后經(jīng)14 天再行強(qiáng)毒卵囊4.5 萬(wàn)攻擊(毒害等5 種小腸球蟲(chóng)9.5 萬(wàn)攻擊),結(jié)果未發(fā)生死亡,亦無(wú)病變,具良好的免疫力。免疫期測(cè)試,選用91 代、95 代次蟲(chóng)苗,1000 或1500 致弱卵囊,分6 批對(duì)70 只雛雞進(jìn)行免疫接種,免疫31 、75 、105 、133 、150 、215 天后,每雞以5 萬(wàn)~10 萬(wàn)強(qiáng)毒卵囊一次攻擊,除第一組非球蟲(chóng)死亡1 只外,其余各組都存活,臨診無(wú)血便,剖檢無(wú)病變,盲腸內(nèi)容物也未查到球蟲(chóng)卵囊。根據(jù)測(cè)試結(jié)果,均具有堅(jiān)強(qiáng)的保護(hù)力。
作者指出,通過(guò)雞胚培養(yǎng)傳代致弱的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)弱毒蟲(chóng)苗,保存在4 ℃普通冰箱內(nèi)1 年,仍具有堅(jiān)強(qiáng)的免疫力。經(jīng)6 批免疫期測(cè)試,免疫有效時(shí)間可達(dá)7 個(gè)月。因此,該蟲(chóng)苗適用于肉雞和產(chǎn)蛋雞的免疫預(yù)防。
楊振中等(1987) 對(duì)柔嫩艾美珥球蟲(chóng)(上海株)致弱蟲(chóng)苗的最小免疫量和免疫力產(chǎn)生期進(jìn)行了測(cè)定。測(cè)定結(jié)果表明: 柔嫩艾美耳球蟲(chóng)(上海株)弱毒蟲(chóng)苗最小的免疫量為800 個(gè)卵囊,以70000 個(gè)強(qiáng)毒卵囊攻擊沒(méi)有出現(xiàn)病雞。蟲(chóng)苗劑量加大到5000 個(gè)也證明是安全的。不經(jīng)免疫的對(duì)照組,以相同劑量的強(qiáng)毒卵囊攻擊時(shí),雛雞全部發(fā)病。因此,選用1000 個(gè)致弱卵囊為免疫劑量是適當(dāng)?shù)?。試?yàn)結(jié)果證明,雛雞免疫后第7 天已產(chǎn)生免疫力,第14 天,免疫雞經(jīng)5 萬(wàn)個(gè)強(qiáng)毒攻擊,除1 只雞盲腸有輕微病變外,其余免疫雞的盲腸均正常。免疫后第21 天和28 天,用同樣劑量強(qiáng)毒卵囊攻擊,免疫雞都能得到保護(hù)。由此也可說(shuō)明,經(jīng)致弱后的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)(上海株)的免疫力是穩(wěn)定的。
彭德旺、楊廷桂(1990) 報(bào)道了3 群自然暴發(fā)雞球蟲(chóng)病的850 其雞用速丹3 ×10-6 的濃度混飼進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)治療試驗(yàn)。以臨診癥狀、死亡情況、血糞堆數(shù)和卵囊數(shù)的變化判定療效。試驗(yàn)結(jié)果,投藥后第2 天血糞和卵囊明顯減少;第3 天血糞消失,雞群狀況好轉(zhuǎn),食欲開(kāi)始恢復(fù),第4 天糞中仍有少量卵囊。3 群雞除死亡8 只外,余均得到保護(hù)。治愈率為89.65% ~100% 。
赫怡、張學(xué)斌(1986) 應(yīng)用河北省畜牧獸醫(yī)研究所的雞胚傳代致弱的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)株( P158) 進(jìn)行了免疫試驗(yàn)。供試驗(yàn)1 日齡雛雞400 只,分成兩組,一為免疫組,另一為對(duì)照組。試驗(yàn)雞飼于無(wú)球蟲(chóng)污染的舍內(nèi)。免疫組雞于14 日齡每只飲水接種3000 個(gè)P158 卵囊。接種后l 周和3 周,每組隨機(jī)抽取l5 只雞剖檢,均未發(fā)現(xiàn)盲腸球蟲(chóng)病病變。又從各組捕取12 只雞,分別飼養(yǎng)于單籠中,每只雞以20 萬(wàn)個(gè)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)強(qiáng)毒株卵囊進(jìn)行攻擊,于攻擊后1 周內(nèi)觀察發(fā)病和死亡情況,至攻擊后第7 天將未死亡的試驗(yàn)雞進(jìn)行剖檢,按盲腸病變程度記分,免疫組與對(duì)照組比較。結(jié)果免疫組死亡率為8.33% ,病變記分為22 分;對(duì)照組死亡率為41.67% ,病變記分36 分。接種后3 周抽樣攻擊,免疫組死亡率為0 ,病變記分為27 ;對(duì)照組死亡率為8 ,33% ,病變記分為29 分。接種后5 周進(jìn)行攻擊,免疫組和對(duì)照組均無(wú)死亡,病變記分免疫組為10 分,對(duì)照組為l5 分。
沈瑞洲等(1988) 報(bào)道了3 種復(fù)方藥物對(duì)雛雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)病的療效。供試雛雞每只人工接種柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊5 萬(wàn)個(gè)。3 種復(fù)方藥物為:1. 氨丙啉+ 磺胺喹 惡啉(各 1.8 ×10-4 ),飲服,連用7 天;2. 三甲氧芐胺嘧啶+ 磺胺喹 惡啉 (1:3.25) 2.5 ×10-4 ,混飼,連用7 天;3. 乙胺嘧啶十磺胺喹 惡啉( 1:5 )2 ×10-4 ,混飼,連用7 天。以抗球蟲(chóng)指數(shù)的高低作為判定療效標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果表明3 種復(fù)方藥物均可完全控制因球蟲(chóng)病引起的死亡。增重方面,前兩個(gè)組與不感染不給藥組相比差異不顯著,后一組療教雖高,但對(duì)增重有明顯的抑制作用。
林昆華等(1991) 進(jìn)行了后備種雞球蟲(chóng)病的預(yù)防試驗(yàn)。供試雞共4 組,每組300 只雞。第1 組l 從4 ~20 周齡,連續(xù)投服1.25 ×10-4 氨丙啉;第2 組雞4 ~12 周齡時(shí),連續(xù)投服1. 25 ×10-4 氨丙啉,13 ~14 周齡,氨丙啉劑量減為8 ×10-5 ,15 ~16 周齡藥量減至6 ×10-5 ,17 周齡停藥;第3 組雞4 ~10 周齡,連續(xù)投服1.25 ×10-4 尼卡巴嗪,11 ~20 周齡改投1.25 ×10 -4 克球粉;第4 組雞不給藥。以球蟲(chóng)病控制情況和體重為療效判定標(biāo)準(zhǔn)。各試驗(yàn)組,20 周齡試驗(yàn)結(jié)束后,各隨機(jī)抽取5 只,分別飼于籠內(nèi),隔3 日后,每只雞人工感染7 萬(wàn)個(gè)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊。觀察停藥后有無(wú)抗球蟲(chóng)的免疫力。試驗(yàn)結(jié)果表明:1. 雞從4 ~20 周齡,連續(xù)或從4 ~12 周齡,13 ~14 周齡,15 ~16 周齡逐漸減量投服氨丙啉,均可有效地預(yù)防種雞群在育成期暴發(fā)球蟲(chóng)病,且對(duì)雞不產(chǎn)生不良影響。停藥后,雞具有抗球蟲(chóng)感染的免疫力。2. 尼卡巴嗪和克球粉“穿梭”用藥,有很好的抗球蟲(chóng)感染的作用,可防止種雞群在育成期暴發(fā)球蟲(chóng)病,對(duì)雞無(wú)不良影響。停藥后,雞具有抗球蟲(chóng)攻擊的足夠強(qiáng)的免疫力。
劉群、韓謙(1994) 報(bào)道了自行研制的球蟲(chóng)苗飲用佐劑的效果。在相同條件下,自制飲用佐劑對(duì)卵囊的漂浮效果相當(dāng)于甚至優(yōu)于美國(guó)產(chǎn)球蟲(chóng)苗穩(wěn)定劑。在田間試驗(yàn)時(shí),將飲用佐劑用于5000 只種雞的球蟲(chóng)苗的飲水免疫。免疫后2 周檢查雞舍各處糞便,結(jié)果發(fā)覡每克糞便的卵囊數(shù)均勻,所有雞在產(chǎn)蛋前均未發(fā)生球蟲(chóng)病。
雞的其他致病力強(qiáng)的球蟲(chóng)種類的研究,國(guó)內(nèi)也有一些報(bào)道,下面僅就收集到的作個(gè)介紹。
秦建華等(1992) 進(jìn)行了堆型艾美耳球蟲(chóng)早熟減毒株的選育。作者用早熟選育方法對(duì)堆型艾美耳球蟲(chóng)保定株進(jìn)行了12 代早熟選育,獲得了潛隱期為74h 和62h 兩個(gè)早熟株。兩個(gè)早熟株不經(jīng)選擇傳遞2 代,仍保持了早熟的特性。早熟株較其親代株繁殖能力下降,致病力降低,但仍然保持了良好的免疫原性。早熟選育改變了蟲(chóng)體的內(nèi)生性發(fā)育過(guò)程,引起了潛隱期的縮短。潛隱期為74h 的蟲(chóng)株的裂殖生殖為3 代,62h 的蟲(chóng)株的裂殖生殖為2 代。
熊大仕、林昆華(1965) 報(bào)道了堆型艾美耳球蟲(chóng)和早熟艾美耳球蟲(chóng)孢子形成過(guò)程朗初步觀察。初排出的卵囊,原生質(zhì)團(tuán)內(nèi)的顆粒是較分散的,培養(yǎng)一定時(shí)間后,原生質(zhì)團(tuán)內(nèi)的顆粒就向中間聚縮,細(xì)胞核開(kāi)始分裂。細(xì)胞核分裂的同時(shí),原生質(zhì)團(tuán)的膜發(fā)生橫向和縱向的內(nèi)陷,使原生質(zhì)團(tuán)出現(xiàn)4 個(gè)洼陷。當(dāng)固定一個(gè)觀察面觀察時(shí),是橫向比縱向的內(nèi)陷的速度更快。當(dāng)橫向洼陷形成裂縫而到達(dá)原生質(zhì)團(tuán)的中央部時(shí),則使原生質(zhì)團(tuán)呈現(xiàn)“四葉狀”. 即4 個(gè)小團(tuán)塊樣。在此基礎(chǔ)上原生質(zhì)團(tuán)進(jìn)一步分裂成4 個(gè)圓形細(xì)胞。圓形細(xì)胞繼而變成橢圓,最后形成孢子囊。與此同時(shí),原生質(zhì)團(tuán)內(nèi)的顆粒也發(fā)生變化,粗顆粒逐漸融合成更大的顆粒;細(xì)顆粒逐漸減少,以致完全消失。每個(gè)孢子囊的尖端頂部均出現(xiàn)一無(wú)原生質(zhì)顆粒的空白明亮部分,即為斯氏體(Stiedai body )。4 個(gè)孢子囊之間未見(jiàn)有殘?bào)w存在。根據(jù)對(duì)這兩種球蟲(chóng)孢子形成的坫果來(lái)分析,作者認(rèn)為可能雞的艾美耳屬的各種球蟲(chóng)孢子形成的過(guò)程是相似的。但由于各種球蟲(chóng)孢子發(fā)育完成所需的時(shí)間長(zhǎng)短不一,因此在一定時(shí)間內(nèi)的發(fā)育進(jìn)度存在著差異。
汪明等(1994) 測(cè)定了來(lái)自雞場(chǎng)的堆型艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)和巨型艾美耳球蟲(chóng)的毒力和這3 種混合球蟲(chóng)的毒力。結(jié)果表明: 接種30 萬(wàn)、60 萬(wàn)、90 萬(wàn)、150 萬(wàn)堆型艾美耳球蟲(chóng)卵囊給14 日齡AA 肉雞雛未引起死亡,小腸病變記分分別為1.4 、1.8 、2.3 和2.9 ,增重明顯下降;接種5 萬(wàn)、10 萬(wàn)、20 萬(wàn)、40 萬(wàn)毒害艾美耳球蟲(chóng)卵囊給l4 日齡AA 肉雞雛,致死率分別為0 、20% 、50% 和60% ;接種30 萬(wàn)、60 萬(wàn)、90 萬(wàn)、200 萬(wàn)巨型艾美耳球蟲(chóng)卵囊給14 日齡AA 肉雞雛,均未引起死亡,小腸病變記分分別為1.5 、2.2 、2.8 和3.2 ,增重明顯下降?;旌戏N卵囊分別按10 萬(wàn)、20 萬(wàn)、40 萬(wàn)、80 萬(wàn)個(gè)接種14 日齡肉雞,致死率分別為0 、10% 、30% 和30% ,小腸和盲腸病變綜合記分分別為1.5 、2.4 、2.9 和3.3 。
黃兵等(1994) 從現(xiàn)場(chǎng)采集分離獲得的毒害艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、變位艾美耳球蟲(chóng)和堆型艾美耳球蟲(chóng)純種,采用人工感染方法,分別以每只雞1 萬(wàn)、5 萬(wàn)、10 萬(wàn)和20 萬(wàn)個(gè)孢子化卵囊,感染10 ~13 日齡伊莎公雛,觀察各蟲(chóng)種不同劑量對(duì)雞致病情況。人工感染后7 天結(jié)束試驗(yàn),以平均增重、死亡率和腸道病變記分作為試驗(yàn)指標(biāo)。結(jié)果顯示毒害艾美耳球蟲(chóng)毒力最強(qiáng),感染10 萬(wàn)死亡率為41.67 % ,感染20 萬(wàn)死亡率為50% 。感染l 萬(wàn)個(gè)毒害艾美耳球蟲(chóng)的雞平均增重極明顯低于不感染對(duì)照組。毒害艾美耳球蟲(chóng)4 個(gè)感染劑量組的腸道病變記分為1.33 ~3.83 。巨型艾美耳球蟲(chóng)致病力次之,感染20 萬(wàn)組的死亡率為16.67% ,4 個(gè)感染劑量組的增重與不感染對(duì)照組的差異為感染1 萬(wàn)組顯著,5 萬(wàn)~20 萬(wàn)組極顯著,其病變記分為1.33 ~3.08 。堆型艾美耳球蟲(chóng)和變位艾美耳球蟲(chóng)高劑量感染引起死亡的很少見(jiàn),但增重與不感染對(duì)照組相比下降明顯,5 萬(wàn)組減少顯著,10 萬(wàn)~20 萬(wàn)組則極顯著。這兩個(gè)蟲(chóng)種各感染組的腸道病變記分1.25 ~3.08 和0.75 ~2.07 。
汪明等(1992) 進(jìn)行了雞巨型艾美耳球蟲(chóng)內(nèi)生發(fā)育的研究。作者應(yīng)用單卵囊接種技術(shù)分離出純種巨型艾美耳球蟲(chóng),繼代收集卵囊后,按30 萬(wàn)~60 萬(wàn)個(gè)卵囊/ 只劑量接種雛雞24 只,8 只不感染作對(duì)照。感染后1 ~8 天定時(shí)剖檢感染雞和對(duì)照雞,取腸道組織,10% 福爾馬林固定,石蠟包埋,制戚切片,切片以HE 染色,光鏡下觀察發(fā)育史。結(jié)果發(fā)現(xiàn)巨型艾美耳球蟲(chóng)有2 代裂殖生殖,多出現(xiàn)在小腸絨毛上皮。第一代裂殖體出現(xiàn)在感染后的第2 ~3 天,第二代裂殖體出現(xiàn)在感染后的第3 ~5 天。裂殖體體積較小,大小約8.8um ×6.4um 。配子體出現(xiàn)在感染后的第5 ~8 天,主要發(fā)生于小腸的固有膜內(nèi),少數(shù)在腸腺細(xì)胞內(nèi)。大配子體細(xì)胞內(nèi)含有明顯的成囊體,小配子體含有許多紫色的小核。在感染后6 ~8 天,觀察到合子和卵囊。
余銳萍等(1992) 觀察了人工感染純種巨型艾美耳球蟲(chóng)后不同時(shí)間雞的腸道組織病理學(xué)變化。結(jié)果表明: 巨型艾差耳球蟲(chóng)主要寄生于雞的十二指腸及空腸中。子孢子主要在腸粘膜上皮細(xì)胞的頂端發(fā)育,引起粘膜上皮脫落。在裂殖生殖階段,裂殖子不僅寄生于上皮細(xì)胞內(nèi),還可穿過(guò)粘膜上皮進(jìn)入固有膜和深部的腸腺上皮細(xì)胞內(nèi),此時(shí)可見(jiàn)固有膜內(nèi)小血管損傷,呈點(diǎn)狀出血,粘膜上皮大量脫落伴隨粘膜上皮顯著增生及單核細(xì)胞浸潤(rùn)。裂殖生殖后蟲(chóng)體繼續(xù)在上述組織細(xì)胞中發(fā)育成配子體及配子。此階段可見(jiàn)腸黏膜絨毛頂部變短寬,固有膜內(nèi)淋巴管高度擴(kuò)張,出現(xiàn)明顯的炎性水腫?;啬c粘膜內(nèi)未見(jiàn)蟲(chóng)體寄生。盲腸扁桃體內(nèi)淋巴濾泡生發(fā)中心消失,淋巴細(xì)胞排空,并見(jiàn)大量異嗜細(xì)胞浸潤(rùn)。
徐鑌蕊等(1994) 利用組織化學(xué)技術(shù)對(duì)巨型艾美耳球蟲(chóng)內(nèi)生發(fā)育階段細(xì)胞內(nèi)的多糖、核酸、堿性核蛋白、非特異性酯酶、堿性磷酸酶和酸性磷酸酶分布定位進(jìn)行了研究,結(jié)果如表4-2 。
表4-2
王江青等(1991) 進(jìn)行了巨型艾美耳球蟲(chóng)早熟減毒株的選育試駐。試驗(yàn)結(jié)果表明巨型艾美耳球蟲(chóng)(長(zhǎng)春株)經(jīng)20 代的早熟選育,其潛隱期由132h 縮短到116h ,成為早熟株。該早熟株不經(jīng)選擇傳遞2 代,仍保持了早熟的特性。早熟株比其親代株的繁殖力下降74% ,致病力降低,但仍保持其免疫原性。
趙樹(shù)英等(1990) 報(bào)道了殺球靈(Diclazuril) 等5 種藥物對(duì)堆型艾美耳球蟲(chóng)的抗球蟲(chóng)效力。供試雞每只人工感染堆型艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊37.6 萬(wàn)個(gè)。以抗球蟲(chóng)指數(shù)為藥效判定標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果表明:l ×10-6 的殺球靈效力最強(qiáng),抗球蟲(chóng)指數(shù)是203 ,腸道未發(fā)現(xiàn)病變,糞中未檢出卵囊。馬杜拉霉素、那拉霉素、拉薩洛菌素的抗球蟲(chóng)指數(shù)分別為290.2 、193.5 和190.5 。尼卡巴嗪效力較差,抗球蟲(chóng)指數(shù)僅達(dá)136.2 。
段嘉樹(shù)等(1990) 對(duì)殺球靈和4 種聚醚類抗球蟲(chóng)藥物馬杜拉霉素、那拉霉素、拉薩洛菌素和莫能霉素的抗巨型艾美耳球蟲(chóng)效力進(jìn)行了籠飼試驗(yàn)。在重度感染情況下,5 ×10-6 馬杜拉霉素,8 ×10-5 那拉菌素,1 ×10-4 拉薩洛菌素和l ×10-4 莫能霉素均可防止雞只死亡,改善增重,減弱腸道病變和減少卵囊數(shù)量。1 ×10-6 殺球靈組出現(xiàn)10% 死亡,但從增重和病變來(lái)看,雞只仍然受到保護(hù),糞便中卵囊少。對(duì)腸粘膜涂片的觀察顯示殺球靈明顯抑制了巨型艾美耳球蟲(chóng)的有性生殖,即配子生殖階段的發(fā)育。
從抗球蟲(chóng)指數(shù)來(lái)看,以上5 種藥對(duì)巨型艾美耳球蟲(chóng)的效力依次為: 拉薩洛菌素,馬杜拉霉素,殺球靈,那拉霉素和莫能霉素。
吳薛忠等(1994) 報(bào)道了海南霉素(商品名為雞球素)對(duì)毒害艾美耳球蟲(chóng)、巨型艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)和變位艾美耳球蟲(chóng)的籠飼試驗(yàn)。海南霉素用5 ×10-6 和7.5 ×10-6 ,以鹽霉素6 ×10-5 為藥物對(duì)照組。人工感染各蟲(chóng)種卵囊的劑量為: 毒害艾美耳球蟲(chóng)5 萬(wàn)個(gè)/ 只,巨型艾美耳球蟲(chóng)10 萬(wàn)個(gè)/ 只,堆型艾美耳球蟲(chóng)15 萬(wàn)個(gè)/ 只,變位艾美耳球蟲(chóng)12 萬(wàn)個(gè)/ 只。人工感染卵囊前1 天開(kāi)始投服藥物,感染后7 ~8 天結(jié)束試驗(yàn)。藥效判定以抗球蟲(chóng)指數(shù)(ACI) 為標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)結(jié)果: 對(duì)毒害艾美耳球蟲(chóng)的ACI ,海南霉素5 ×10-6 為186.1 ,7.5 ×10-6 為l85.3 ,鹽霉素為155.1 ;對(duì)巨型艾美耳球蟲(chóng)的ACI ,海南霉素5 ×10-6 為182.2 ,7.5 ×10-6 的為180.8 ,鹽霉素195.4 ;對(duì)堆型艾美耳球蟲(chóng)的ACI ,海南霉素5 ×10-6 為193.2 ,7.5 ×10-6 的為185 ,鹽霉素為189.8 ;對(duì)變位艾美耳球蟲(chóng)的ACI ,海南霉素5 ×10-6 為196.8 ,7.5 ×10-6 的189.6 ,鹽霉素205.2 ,整個(gè)結(jié)果顯示海南霉素對(duì)上述雞球蟲(chóng)均有明顯的抗球蟲(chóng)效力。
謝明權(quán)等(1993) 應(yīng)用人工感染后,定期剖殺試驗(yàn)雞,取寄生部位腸粘膜直接涂片,在顯微鏡下觀察裂殖體成熟程度及密度,確定最適收集時(shí)間的方法,對(duì)毒害艾美耳球蟲(chóng)、堆型艾美耳球蟲(chóng)和布氏艾美耳球蟲(chóng)裂殖子進(jìn)行純化試驗(yàn)。選取材料的位置,毒害艾美耳球蟲(chóng)在小腸中段,堆型艾美耳球蟲(chóng)在小腸前段,布氏艾美耳球蟲(chóng)在小腸后段。感染球蟲(chóng)的腸道用剪刀縱向剪開(kāi),棄去腸內(nèi)容物,用PBS (pH7.2) 洗2 ~3 次后,以刀片輕刮腸粘膜,置含0.25% 胰酶加0.75% 膽酸鈉消化液中,40 ℃消化30 ~40min 。當(dāng)大多數(shù)裂殖體破裂后即停止消化。消化渣用Hank’s 平衡鹽溶髓稀釋,200rpm 離心淘洗2 ~3 次,每次10min. 最后用紅細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)算收獲的裂殖子數(shù)量。結(jié)果是堆型艾美耳球蟲(chóng)裂殖子最適收獲時(shí)間是人工感染后80 ~84h ,毒害艾美耳球蟲(chóng)是在人工感染后120h ,布氏艾美耳球蟲(chóng)是95h 。作者提出裂殖子的收獲量與人工感染的卵囊數(shù)量成正相關(guān)。供感染的雞日齡最好是3 周齡的。感染卵囊數(shù)量,毒害艾美耳球蟲(chóng)40 萬(wàn)/ 只,堆型艾美耳球蟲(chóng)是60 萬(wàn)/ 只,布氏艾美耳球蟲(chóng)是80 萬(wàn)/ 只,便能獲得較理想的感染腸道,供分離裂殖子用。
國(guó)內(nèi)有幾篇關(guān)于藥物殺滅雞球蟲(chóng)卵囊的報(bào)告。曾衡秀等(1988) 報(bào)道了國(guó)產(chǎn)消毒劑- “速爾”抑殺微生物和球蟲(chóng)卵囊的試驗(yàn)。報(bào)告中提到用國(guó)產(chǎn)速爾1% 的濃度,可抑殺97.5% 的球蟲(chóng)卵囊,用2% 的濃度則可100% 抑殺球蟲(chóng)卵囊,使之不能進(jìn)行孢子化,試驗(yàn)結(jié)果與國(guó)外同類產(chǎn)品相比,其效力相當(dāng)。
劉毅等(1990) 也對(duì)國(guó)產(chǎn)消毒劑- “速爾1 號(hào)”進(jìn)行抑殺雞球蟲(chóng)卵囊的試驗(yàn)。試驗(yàn)與農(nóng)樂(lè)、日本產(chǎn)速爾、新浩爾滅、燒堿等(推薦濃度)作了對(duì)比。結(jié)果證明,遞爾1 號(hào)在2.5% 、3% 的濃度時(shí)能抑殺試管內(nèi)的所有卵囊,0.3% 以上的濃度時(shí)能使90% 的試管內(nèi)卵囊滅活,2.5% 的濃度時(shí)能殺滅試驗(yàn)環(huán)境及雞場(chǎng)現(xiàn)場(chǎng)中的球蟲(chóng)卵囊。在60 天的試驗(yàn)期內(nèi),試驗(yàn)組雞無(wú)球蟲(chóng)感染。速爾l 號(hào)的抑殺雞球蟲(chóng)卵囊的效果與農(nóng)樂(lè)和日本產(chǎn)速爾相似。推薦濃度的新潔爾滅及燒堿對(duì)雞球蟲(chóng)卵囊無(wú)作用。
汪明等(1994) 用英國(guó)出品的體外殺滅球蟲(chóng)卵囊的消毒藥劑OO-cide( 殺卵靈) 進(jìn)行了殺滅雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)卵囊的試驗(yàn)。試驗(yàn)表明: 經(jīng)殺卵靈處理過(guò)的未孢子化卵囊的孢子化率為2% ,對(duì)照卵囊的孢子化率為80% ,孢子化減少率為97.6% ;用殺卵靈處理過(guò)的孢子化卵囊,按10 萬(wàn)/ 只劑量接種雛雞,第8 天剖殺試驗(yàn)雞,計(jì)算出抗球蟲(chóng)指數(shù)為169 ,試驗(yàn)雞無(wú)臨診癥狀,盲腸病變記分不超過(guò)1 分,對(duì)照組ACI 為121 ,臨診癥狀明顯。
(林昆華)
作者: lzm_001 時(shí)間: 2013-12-2 08:20
球蟲(chóng)養(yǎng)雞很普遍。如果嚴(yán)重的,死雞也不少的。一般常見(jiàn)的就是盲腸球蟲(chóng)和小腸球蟲(chóng)。
作者: 高永長(zhǎng) 時(shí)間: 2013-12-2 11:33
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