關(guān)于豆粕蛋白溶解度測定的關(guān)鍵點(diǎn)

liangruilan

一般是粉碎小就溶出來的效果好一點(diǎn)，你可以對比不粉碎和粉碎后的效果，差很多的
我之前都做了一個(gè)溶解度很低的，找原因應(yīng)該與可能溫度有關(guān)，第二次做又正常了

liangruilan

是攪拌時(shí)候的溫度

柳粒橙

恩，我覺得與攪拌也有關(guān)系，時(shí)間和溫度。

510228206

粉碎的過程也要影響結(jié)果的，粉碎機(jī)發(fā)熱會(huì)引起偏低，最好是手中，雖然麻煩但是結(jié)果準(zhǔn)確些

weihua0608

粉碎的過程中免不了會(huì)發(fā)熱吧.,可是不粉碎..不過60目篩,結(jié)果還是產(chǎn)生誤差....另外想問的是,一定要取15ML上清液嗎???????

iron-monkey

1 前言
豆粕是家禽口糧中非常重要的、也是質(zhì)量最好的
植物蛋白飼料。豆粕質(zhì)量一方面受各種營養(yǎng)素含量的
影響，如能量、蛋白質(zhì)、纖維素等；另一方面 它在
很大程度上還受加工程度的影響。適度加熱是豆粕加
工的關(guān)鍵，加熱不足或過度都會(huì)降低豆粕的營養(yǎng)價(jià)
值。尿酶活性測定值是傳統(tǒng)的用以鑒定豆粕加熱程度
的指標(biāo)。但尿酶沒有負(fù)值，它對任何過熟豆粕的最低
值均顯示為零。所以它對評價(jià)豆粕加熱過度是無用
的。許多發(fā)達(dá)國家因此引入了蛋白溶解度的概念。蛋
白溶解度是指溶于0.2％KOH溶液中的蛋白質(zhì)占豆粕
總粗蛋白質(zhì)含量的百分比。它會(huì)隨加熱時(shí)間的延長而
明顯穩(wěn)定地下降。其接近 100％，表示豆粕是生的，
而低于65％可以肯定是加熱過度。因此，測定蛋白
溶解度可以克服尿酶活性測定值的局限性，兩者同時(shí)
測定，可以正確評估豆粕的加工質(zhì)量，確保豆粕中氨
基酸與氨基酸利用率未因加熱過度或不足而受損。
20世紀(jì)60年代末，蛋白質(zhì)溶解度首次被PURANA公司
作為評定豆粕加工適宜度的方法，之后該項(xiàng)技術(shù)基本
為私人公司所采用，近十幾年才被發(fā)達(dá)國家采用，美
國的科研文獻(xiàn)在20世紀(jì)80年代末才開始出現(xiàn)對它的評
估。2001年以來，日本、韓國、馬來西亞、印尼等國
家對我國向其出口的豆粕也提出增加對蛋白溶解度的
檢測，而我國尚無此檢驗(yàn)方法。為滿足國外要求，我
們參考了美國大豆協(xié)會(huì)提供的蛋白溶解度的測定方
法，并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況，經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)摸
索，以解決操作中的一些具體問題，得出了一套比較
滿意的方法，滿足了出口檢測要求。
2 實(shí)驗(yàn)條件與方法
2.1 儀器及用具
1093型氣旋磨(帶60目篩網(wǎng))；HZS-H型恒溫水浴
振蕩器；AND-HM 200型電子天平(感量0.0001g)；高
速離心機(jī)；移液管( 1 5 m L 、5 0 m L ) ；帶蓋離心管
(50mL)；錐形瓶、容量瓶、燒杯等。
其他儀器及用具與粗蛋白測定相同(SN/T0800·
3-1999) 。
2.2 試劑
2.2.1 0.2％KOH溶液：稱取2.873g純度為82% 的分析
純K0H，加水溶解，定容至1000mL(該溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)
配)。
2.2.2 其他試劑：同粗蛋白測定(SN/T0800.3-1999)。
2.3 方法
2.3.1 將待測樣品粉碎，使之全部通過60目標(biāo)準(zhǔn)篩，
混合均勻。
2.3.2 稱取1.5000±0.0002g樣品于250mL錐形瓶中，
準(zhǔn)確加入75mL新配制的0.2%KOH溶液，立即置于
18℃左右的恒溫水浴振蕩器上，在約170 r/min的轉(zhuǎn)速
下振蕩20min。
2.3.3 移取2.3.2溶液50mL于離心管中，以2700 r/min
的速度離心10min；
2.3.4 將上清液到入小燒杯中，準(zhǔn)確移取15mL上清液
至消化管內(nèi)。
2.3.5 以下按照粗蛋白的測定步驟測定堿溶蛋白P1，注
意應(yīng)將其置于消化塊上之后由室溫開始升溫消化，
以免液體爆沸，同時(shí)測定豆粕粗蛋白P。粗蛋白的測
定參照SN/T0800.3-1999?！哆M(jìn)出口糧食、飼料粗蛋
白質(zhì)檢驗(yàn)方法》。
2.4 結(jié)果計(jì)算
蛋白質(zhì)溶解度(PS)(％)＝P1 /P×l00
式中 P1——堿溶蛋白的含量，％
P ——豆粕粗蛋白的含量，％
　　　　　　　
式中：C——鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液濃度，mol/L
V——滴定時(shí)所消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL 　
Vo——空白試驗(yàn)所消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL 　
0.014——每毫摩爾質(zhì)量氮的克數(shù)
K——氮換算成蛋白質(zhì)的系數(shù)，(此處取K＝6.25)
m——試樣的質(zhì)量，g 　　　
50/75；15/50——移取樣液的體積比　
堿溶蛋白P1的平行試驗(yàn)允許誤差參照粗蛋白的要
求(SN/T 0800·3-1999)。
堿溶蛋白P1及粗蛋白P均取平行試驗(yàn)結(jié)果的算術(shù)
平均值作為結(jié)果，保留三位小數(shù)，最終蛋白溶解度Ps
的結(jié)果保留兩位小數(shù)。
3 結(jié)果與討論 　　
在測定豆粕蛋白質(zhì)溶解度的過程中，有一些因素
會(huì)對其測定結(jié)果產(chǎn)生較大影響，注意對這些關(guān)鍵點(diǎn)
加以控制，可獲得較好的準(zhǔn)確度和精密度。
3.1 制樣粒度
豆粕樣品的粉碎粒度會(huì)影響其蛋白質(zhì)溶解度的
值， 隨粒度的縮小蛋白質(zhì)溶解度的值會(huì)增大，當(dāng)粒
度過 60目篩后，蛋白溶解度趨于定值。因此，測定
蛋白質(zhì)溶解度時(shí)的堿溶蛋白和粗蛋白的待測樣品比
較合理的制樣粒度應(yīng)控制在全部通過60目標(biāo)準(zhǔn)篩。
3.2 樣品質(zhì)量 　　
測定堿溶蛋白時(shí)，由于加入的75mL 0.2％KOH溶
液的量是固定的，故平行樣品的稱樣應(yīng)準(zhǔn)確在1.5000
±0.0002g范圍內(nèi)，以確保其較高的重現(xiàn)性。
3.3 0.2%KOH溶液
3.3.1 0.2%KOH溶液的配制
P1(％)＝ C × ( V — V o ) × 0 . 0 1 4 × K ×100
m×(50/75)×(15/50)
. 38 .
INSPECTION AND QUARANTINE SCIENCE 檢驗(yàn)檢疫科學(xué)Vol.17 No.1-2 2007年第1-2期
美國大豆協(xié)會(huì)提供的方法，要求KOH溶液的濃度
為0.2%，相當(dāng)于0.042當(dāng)量、pH值為12.5。以配制
1000mL 0.2%KOH溶液為例， 應(yīng)稱取KOH2.356g，但
市售的分析純的KOH一般純度為≥82％，如以82%為
基準(zhǔn)，則折算純度后實(shí)際應(yīng)該稱取KOH 2.873g，故在
稱量KOH時(shí)應(yīng)先對其純度進(jìn)行折算。
3.3.2 0.2％KOH溶液的放置時(shí)間
配制好的KOH溶液如果沒有一次性用完，那么放
置了一段時(shí)間的K O H 溶液是否會(huì)對測定結(jié)果產(chǎn)生影
響呢?我們對同一樣品進(jìn)行了對比試驗(yàn)。A 組采用新
配制的KOH溶液，B 組采用放置一天的KOH溶液，結(jié)
果(見表1)表明，同一樣品的粗蛋白含量變化基本不
38.648 38.722
38.860 38.892 38.771 46.567 83.26
38.694 38.808
37.915 38.153
38.078 37.952 38.037 46.679 81.49
38.185 37.936
表1 0.2%KOH溶液配制時(shí)間的影響
P1 平均P1 P PS
A
組
B
組
大，但B 組相對于A 組的堿溶蛋白數(shù)值減小，造成最
終蛋白質(zhì)溶解度的值偏低。我們分析可能是實(shí)驗(yàn)室
中的某些酸性氣體對其濃度造成一定影響。故建議
測定采用現(xiàn)配制的0.2%KOH溶液為宜。
3.4 豆粕樣品的振蕩
美國大豆協(xié)會(huì)提供的方法要求將75mL 0.2％KOH
溶液加入到樣品中后， 置于磁力攪拌器上攪拌
20min。但目前本實(shí)驗(yàn)室只有一臺(tái)磁力攪拌器，檢測
多個(gè)樣品時(shí)，勢必會(huì)影響檢測效率，且攪拌速度不
穩(wěn)定，造成平行樣品的重現(xiàn)性較差。我們認(rèn)為采用
此步驟的目的是在盡量短的時(shí)間內(nèi)，使蛋白質(zhì)充分
溶解在 0.2％KOH溶液中，我們采用恒溫水浴振蕩器
同樣達(dá)到了比較滿意的效果，且一次可同時(shí)振蕩多
達(dá)十個(gè)樣品，既提高了檢測速度，又提高了平行樣
品的重現(xiàn)性。以下是對恒溫振蕩器試驗(yàn)條件的摸索。
3.4.1 轉(zhuǎn)速
在室溫的條件下，分別以1 3 0 、1 4 0 、1 5 0 、
160、170、180、190、200r/min的轉(zhuǎn)速對同一樣品振
蕩20min，結(jié)果見表2。由表2可知：在130、140r/min
時(shí)，雖然平行性較好，但結(jié)果偏低；190、200r/min
表2 轉(zhuǎn)速的影響
轉(zhuǎn)速（轉(zhuǎn)/ 分） 130 140 150 160 170 180 190 200
137.825 38.317 38.757 38.747 38.594 38.617 38.406 38.269
37.953 38.388 38.462 38.550 38.606 38.774 38.760 39.080
P1 38.055 38.251 38.575 38.680 38.524 38.574 38.163 38.738
38.109 38.376 38.591 38.611 38.693 38.597 38.674 38.505
37.904 38.394 38.449 38.592 38.498 38.626 38.319 39.114
P 1平均值37.976 38.360 38.556 38.635 38.581 38.632 38.526 38.661
P 46.774
Ps 81.19 82.01 82.43 82.60 82.48 82.59 82.37 82.65
表3 振蕩時(shí)間的影響
振蕩時(shí)間(min) 12 14 16 18 20 22 24 26
P1 37.917 38.357 38.517 38.721 39.068 38.885 39.210 39.285
37.584 38.382 38.552 38.816 39.033 38.936 39.011 39.280
37.757 38.305 38.635 38.783 39.158 39.111 38.986 39.082
37.688 38.213 38.597 38.842 39.185 38.974 39.117 39.014
37.723 38.109 38.660 38.755 39.201 39.170 39.131 39.135
37.560 38.276 38.619 38.801 39.109 39.025 39.203 39.027
P 1平均值37.705 38.274 38.597 38.786 39.126 39.017 39.110 39.137
P 46.978
PS 80.26 81.47 82.16 83.56 83.29 83.05 83.25 83.31
2007年第1-2期 Vol.17 No.1-2 檢驗(yàn)檢疫科學(xué) INSPECTION AND QUARANTINE SCIENCE
. 39 .
隨溫度的升高，加熱的延長而下降。經(jīng)與權(quán)威實(shí)驗(yàn)
室對比后發(fā)現(xiàn)，振蕩溫度控制在18℃左右得到的數(shù)
據(jù)比較合理。
3.5 方法的準(zhǔn)確度與精密度
3.5.1 準(zhǔn)確度 　　
經(jīng)過多次對比，采用上述方法測定豆粕中蛋白溶
解度得到的結(jié)果數(shù)據(jù)與權(quán)威實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果數(shù)據(jù)十分
接近，說明該方法測得的分析結(jié)果比較可靠。
3.5.2 精密度
蛋白溶解度Ps的值是通過堿溶蛋白P1和粗蛋白P
的值得出的，粗蛋白P的測定用經(jīng)典法，其精密度不
必再討論，故對蛋白溶解度平行性的考察主要是針
對堿溶蛋白P1的。我們?nèi)∫痪鶆虻挠写硇缘臉悠罚?br /> 按該方法平行測定10次，其堿溶蛋白結(jié)果見表5。由
表5可以看出，該方法的精密度很高。
4 結(jié)論
該方法適用于豆粕的蛋白溶解度的測定，其精密
度較高、準(zhǔn)確度較好，能滿足進(jìn)出口檢驗(yàn)的需要。
參考文獻(xiàn)
[1] 美國大豆協(xié)會(huì).蛋白溶解度(Protain Solubity)的測定方法.
[2] 沈惠樂，楊秀文，豆粕質(zhì)量與尿酶活性和蛋白溶解度，
ASA—99.
[3] 周尊英主編，商品檢驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)指南，青島：海洋大學(xué)出
版社，1996.5.
表4 振蕩溫度的影響
振蕩溫度( ℃) 14 16 18 20 25 30 35 40
P1 38.444 38.746 39.007 39.468 39.897 40.591 41.462 41.875
38.435 38.662 38.940 39.664 39.862 40.397 41.573 41.670
37.362 38.804 39.126 39.530 40.179 40.457 41.352 41.789
38.507 38.613 39.011 39.562 39.914 40.584 41.535 41.757
38.432 38.694 38.974 39.441 40.000 40.496 41.383 41.818
38.519 38.701 38.993 39.673 39.920 40.413 41.447 41.732
P 1平均值38.450 38.703 39.009 39.556 39.962 40.490 41.459 41.774
P 46.978
Ps 81.85 82.39 83.04 84.20 85.07 86.19 88.25 88.92
表5 精密度試驗(yàn)
P1(%) P1平均值(%) 標(biāo)準(zhǔn)偏差相對標(biāo)準(zhǔn)偏差( % )
38.711 38.878 38.648 38.745 38.762
38.758 0.065 0.17
38.740 38.791 38.825 38.740 38.703
時(shí)由于轉(zhuǎn)速過高，有時(shí)部分樣品會(huì)粘在瓶壁上造成
溶解不完全， 導(dǎo)致結(jié)果平行性較差； 而采用
150~180r/min時(shí)可保證其較高的精密度和相對穩(wěn)定的
數(shù)據(jù)結(jié)果，因此我們選擇了170r/min左右的轉(zhuǎn)速進(jìn)行
振蕩。
3.4.2 振蕩時(shí)間 　　
在室溫條件下，以170r／min左右的轉(zhuǎn)速對同一
樣品摸索了振蕩時(shí)間的影響，結(jié)果見表3 。由表3 可
知，振蕩時(shí)間不夠時(shí)，溶解不充分，造成堿溶蛋白
數(shù)值偏低，而20min以后相對穩(wěn)定，當(dāng)然過長時(shí)間的
劇烈振蕩也會(huì)引起蛋白質(zhì)變性，故我們采用20min的
振蕩時(shí)間。
3.4.3 溫度控制
在摸索振蕩的轉(zhuǎn)速和時(shí)間時(shí)，都是在室溫條件下
進(jìn)行的，但室溫也是時(shí)常發(fā)生變化的，那么測定蛋
白質(zhì)溶解度時(shí)是否應(yīng)適當(dāng)控制振蕩溫度呢，我們進(jìn)
行了如下試驗(yàn)：
對同一豆粕樣品分別于14℃、16℃、18℃、20℃、
25℃、30℃、35℃、40℃恒溫水浴內(nèi)，以170r/min的
轉(zhuǎn)速振蕩20min，結(jié)果見表4。由表4可以看出，隨溫
度的升高，堿溶蛋白的值也逐漸升高，這種趨勢十
分明顯，說明在蛋白質(zhì)變性之前的溫度范圍內(nèi)，環(huán)
境溫度對蛋白質(zhì)溶解度有一定的影響。當(dāng)?shù)竭_(dá)變性
區(qū)域后，由于美拉德等反應(yīng)的影響，蛋白溶解度會(huì)

xiaohuli7710

真是太好的資料了  正愁沒有這樣的學(xué)習(xí)資料呢

xiaoxing12

國標(biāo)上是稱取一克樣品，加入50mlkoH,不知道這兩個(gè)版本有什么差異

zhangkezhang007

我們也用的上面的方法做的，結(jié)果還可以，如果偏低的話，可以懷疑豆粕的質(zhì)量不好

iron-monkey

3.1 制樣粒度
豆粕樣品的粉碎粒度會(huì)影響其蛋白質(zhì)溶解度的
值， 隨粒度的縮小蛋白質(zhì)溶解度的值會(huì)增大，當(dāng)粒
度過 60目篩后，蛋白溶解度趨于定值。因此，測定
蛋白質(zhì)溶解度時(shí)的堿溶蛋白和粗蛋白的待測樣品比
較合理的制樣粒度應(yīng)控制在全部通過60目標(biāo)準(zhǔn)篩。
3.2 樣品質(zhì)量 　　
測定堿溶蛋白時(shí)，由于加入的75mL 0.2％KOH溶
液的量是固定的，故平行樣品的稱樣應(yīng)準(zhǔn)確在1.5000
±0.0002g范圍內(nèi)，以確保其較高的重現(xiàn)性。
3.3 0.2%KOH溶液
3.3.1 0.2%KOH溶液的配制
美國大豆協(xié)會(huì)提供的方法，要求KOH溶液的濃度
為0.2%，相當(dāng)于0.042當(dāng)量、pH值為12.5。以配制
1000mL 0.2%KOH溶液為例， 應(yīng)稱取KOH2.356g，但
市售的分析純的KOH一般純度為≥82％，如以82%為
基準(zhǔn)，則折算純度后實(shí)際應(yīng)該稱取KOH 2.873g，故在
稱量KOH時(shí)應(yīng)先對其純度進(jìn)行折算。
3.3.2 0.2％KOH溶液的放置時(shí)間
配制好的KOH溶液如果沒有一次性用完，那么放
置了一段時(shí)間的K O H 溶液是否會(huì)對測定結(jié)果產(chǎn)生影
響呢?我們對同一樣品進(jìn)行了對比試驗(yàn)。A 組采用新
配制的KOH溶液，B 組采用放置一天的KOH溶液，結(jié)
果(見表1)表明，同一樣品的粗蛋白含量變化基本不
38.648 38.722
38.860 38.892 38.771 46.567 83.26
38.694 38.808
37.915 38.153
38.078 37.952 38.037 46.679 81.49
38.185 37.936
表1 0.2%KOH溶液配制時(shí)間的影響
P1 平均P1 P PS
A
組
B
組
大，但B 組相對于A 組的堿溶蛋白數(shù)值減小，造成最
終蛋白質(zhì)溶解度的值偏低。我們分析可能是實(shí)驗(yàn)室
中的某些酸性氣體對其濃度造成一定影響。故建議
測定采用現(xiàn)配制的0.2%KOH溶液為宜。
3.4 豆粕樣品的振蕩
美國大豆協(xié)會(huì)提供的方法要求將75mL 0.2％KOH
溶液加入到樣品中后， 置于磁力攪拌器上攪拌
20min。但目前本實(shí)驗(yàn)室只有一臺(tái)磁力攪拌器，檢測
多個(gè)樣品時(shí)，勢必會(huì)影響檢測效率，且攪拌速度不
穩(wěn)定，造成平行樣品的重現(xiàn)性較差。我們認(rèn)為采用
此步驟的目的是在盡量短的時(shí)間內(nèi)，使蛋白質(zhì)充分
溶解在 0.2％KOH溶液中，我們采用恒溫水浴振蕩器
同樣達(dá)到了比較滿意的效果，且一次可同時(shí)振蕩多
達(dá)十個(gè)樣品，既提高了檢測速度，又提高了平行樣
品的重現(xiàn)性。以下是對恒溫振蕩器試驗(yàn)條件的摸索。
3.4.1 轉(zhuǎn)速
在室溫的條件下，分別以1 3 0 、1 4 0 、1 5 0 、
160、170、180、190、200r/min的轉(zhuǎn)速對同一樣品振
蕩20min，結(jié)果見表2。由表2可知：在130、140r/min
時(shí)，雖然平行性較好，但結(jié)果偏低；190、200r/min時(shí)由于轉(zhuǎn)速過高，有時(shí)部分樣品會(huì)粘在瓶壁上造成
溶解不完全， 導(dǎo)致結(jié)果平行性較差； 而采用
150~180r/min時(shí)可保證其較高的精密度和相對穩(wěn)定的
數(shù)據(jù)結(jié)果，因此我們選擇了170r/min左右的轉(zhuǎn)速進(jìn)行
振蕩。
3.4.2 振蕩時(shí)間 　　
在室溫條件下，以170r／min左右的轉(zhuǎn)速對同一
樣品摸索了振蕩時(shí)間的影響，結(jié)果見表3 。由表3 可
知，振蕩時(shí)間不夠時(shí)，溶解不充分，造成堿溶蛋白
數(shù)值偏低，而20min以后相對穩(wěn)定，當(dāng)然過長時(shí)間的
劇烈振蕩也會(huì)引起蛋白質(zhì)變性，故我們采用20min的
振蕩時(shí)間。
3.4.3 溫度控制
在摸索振蕩的轉(zhuǎn)速和時(shí)間時(shí)，都是在室溫條件下
進(jìn)行的，但室溫也是時(shí)常發(fā)生變化的，那么測定蛋
白質(zhì)溶解度時(shí)是否應(yīng)適當(dāng)控制振蕩溫度呢，我們進(jìn)
行了如下試驗(yàn)：
對同一豆粕樣品分別于14℃、16℃、18℃、20℃、
25℃、30℃、35℃、40℃恒溫水浴內(nèi)，以170r/min的
轉(zhuǎn)速振蕩20min，結(jié)果見表4。由表4可以看出，隨溫
度的升高，堿溶蛋白的值也逐漸升高，這種趨勢十
分明顯，說明在蛋白質(zhì)變性之前的溫度范圍內(nèi)，環(huán)
境溫度對蛋白質(zhì)溶解度有一定的影響。當(dāng)?shù)竭_(dá)變性
區(qū)域后，由于美拉德等反應(yīng)的影響，蛋白溶解度會(huì)隨溫度的升高，加熱的延長而下降。經(jīng)與權(quán)威實(shí)驗(yàn)
室對比后發(fā)現(xiàn)，振蕩溫度控制在18℃左右得到的數(shù)
據(jù)比較合理。
3.5 方法的準(zhǔn)確度與精密度
3.5.1 準(zhǔn)確度 　　
經(jīng)過多次對比，采用上述方法測定豆粕中蛋白溶
解度得到的結(jié)果數(shù)據(jù)與權(quán)威實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果數(shù)據(jù)十分
接近，說明該方法測得的分析結(jié)果比較可靠。
3.5.2 精密度
蛋白溶解度Ps的值是通過堿溶蛋白P1和粗蛋白P
的值得出的，粗蛋白P的測定用經(jīng)典法，其精密度不
必再討論，故對蛋白溶解度平行性的考察主要是針
對堿溶蛋白P1的。我們?nèi)∫痪鶆虻挠写硇缘臉悠罚?br /> 按該方法平行測定10次，其堿溶蛋白結(jié)果見表5。由
表5可以看出，該方法的精密度很高