飼料中葉黃素的測(cè)定
1 檢測(cè)依據(jù) 美國(guó)分析化學(xué)協(xié)會(huì)飼料中葉黃素的測(cè)定
2 檢測(cè)方法
2.1 儀器及器皿
2.1.1 粉碎機(jī)、篩孔0.4毫米
2.1.2 分析天平、感量0.0001g
2.1.3 水浴—恒溫?zé)o攪拌水浴。溫差不大于+05℃。水容量約10升,水 深為7cm。
2.1.4 空氣凝結(jié)裝置---2毫米×49厘空心玻璃管,其上有一個(gè)單孔的橡膠塞。
2.1.5 真空烤箱(為制備標(biāo)準(zhǔn)品用)
2.1.6 容量瓶---100ml、50ml棕色容量瓶
2.1.7 移液管---30ml、10ml移液管
2.1.8 72型分光度計(jì)
2.1.9 有刻度的容量管(1000毫升,作配制試劑用)
2.2 試劑
2.2.1 丙酮、分析純
2.2.2 正乙烷、分析純
2.2.3 甲苯、分析純
2.2.4 無(wú)水酒精、分析純
2.2.5 甲醇、分析純
2.2.6 甲醇?xì)溲趸浫芤骸?0% 。40克KOH溶于100毫升甲醇中
2.2.7 提取劑。正乙烷—丙酮—無(wú)水酒精--- 甲苯(10:7:6:7)
2.2.8 硫酸鈉溶液10%。10克無(wú)水硫酸鈉溶于100毫升蒸餾水中
2.2.9 異丙醇,分析純
2.2.10丙酮—異丙醇(1+1,容積)
2.2.11 蘇丹I標(biāo)準(zhǔn)溶液
2.3 試劑制備
2.3.1 蘇丹I標(biāo)準(zhǔn)溶液
1) 儲(chǔ)備液---1.0毫摩爾(mM)。
用熱乙醇再次結(jié)晶的標(biāo)準(zhǔn)品。標(biāo)準(zhǔn)品在攝氏70度真空烘干箱里烘至恒重。
溶解0.1241克醇標(biāo)準(zhǔn)品于500毫升丙酮—異丙醇(1+1,容積)中,貯存于室內(nèi)避光處,每月制備一次。再次結(jié)晶的步驟如下:將8克重的蘇丹I結(jié)晶放入500毫升的燒杯中,加入300毫升乙醇,并加溫至攝氏75度,不斷攪拌。應(yīng)在燒杯口放置一凹玻片以防止過(guò)多的蒸發(fā)。當(dāng)所有的固體接近完全溶解時(shí)(有時(shí)會(huì)有一些不溶的雜質(zhì)),應(yīng)用真空過(guò)濾,除去雜質(zhì)。熱的濾出液應(yīng)再溫慢慢冷卻(可用冷箱,冷卻溫度>℃)。此時(shí)不要攪拌濾出液,因?yàn)檫@將產(chǎn)生小結(jié)晶。一符結(jié)晶產(chǎn)生后,再次進(jìn)行過(guò)濾。結(jié)晶體應(yīng)盡量用壓法干燥。最后,用小產(chǎn)鏟移至干燥玻片上,并置于70度的真空烘箱。結(jié)晶完全干燥后貯藏于棕色的干燥器皿中。
2) 工作液---0.04毫摩爾
稀釋2ml儲(chǔ)備液溶于50毫升丙酮-異丙醇(1+1,容積)中,貯存于室內(nèi)暗處,每天制備一次。
2.4 儀器校正
首先,以工作液在469-479nm 間以1nm間隔掃描,檢查校正分光光度計(jì)。若最大吸收不是474nm,則重校儀器。當(dāng)儀器在474nm下有最大的吸光值時(shí),狹縫寬度為0.03下,工作液讀數(shù)應(yīng)為0.561(474nm)。
若儀器有偏差,便要校正下面方程式中的儀器偏離因子
f(儀器偏離因子)=0.561/A474(工作液)
A474(工作液)=工作液474nm的吸光值
2.5 樣品的制備
用粉碎機(jī)打碎樣品(約100克至200克重),以至99%以上樣品能通過(guò)40目篩。這一過(guò)程應(yīng)不至于使樣品的溫度超過(guò)室溫。樣品碾碎后,應(yīng)進(jìn)行一次徹底地混均。準(zhǔn)確地稱取樣品(玉米2g、蛋白粉05g、飼料2g),放入100毫升棕色容量瓶中,加入30毫升提取劑,密封,用手搖約一分鐘,然后,再加入2毫升40%甲醇一氫氧化鉀溶液,并搖動(dòng)1分鐘。瓶口上插上一支玻管后置于56度水浴中保持20分鐘,然后把容量瓶移入暗處入置一小時(shí)。加入30毫升正乙烷,搖動(dòng)一分鐘,用10%硫酸鈉溶液稀釋至刻度,劇烈搖動(dòng)一分鐘后,再置放于暗處一小時(shí)。上層液體積約為50毫升。
用移液管吸取上清液5毫升入50毫升棕色容量瓶中,用提取劑定容至刻度,搖勻。以提取劑作空白,測(cè)定474nm的吸光度,并記錄。
2.6 計(jì)算結(jié)果
葉黃素(克/公斤)=[A474×f×2.1205] / 樣品重量(克) |
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