凱氏定氮法測定飼料粗蛋白的注意細(xì)節(jié)

tony2005428

凱氏定氮法測定飼料粗蛋白的注意細(xì)節(jié)

   以凱氏定氮法測定氮含量換算蛋白質(zhì)的方法，是國際上通用的標(biāo)準(zhǔn)方法，操作簡單，測定結(jié)果重復(fù)性和重現(xiàn)性都很好，廣泛用于各種食品、谷物、飼料等樣品的蛋白質(zhì)含量測定。要使測定結(jié)果有更好的正確度、準(zhǔn)確度和精準(zhǔn)度，認(rèn)真細(xì)致掌握測定的每個步驟、各個細(xì)節(jié)及相應(yīng)的注意事項，就顯得極為重要。

   一、試樣的粉碎
   測定要求樣品粉碎并全部過40目篩，目的在于使其具備均質(zhì)性，便于溶樣，更易于消化。但也須掌握以下四點：（1）由于粉碎或過篩過程中，樣品容易產(chǎn)生自動分級，如玉米，其硬質(zhì)部分常聚集在上面，軟質(zhì)部分聚在下面。所以粉碎過篩后要重新混合均勻，以減少測量誤差；（2）粉碎完后，粉碎機中總會遺留少部分，這部分不能隨便丟棄，否則將影響樣品的均質(zhì)性；（3）粉碎過程要快，以避免樣品的成分變化；（4）對于全價料(即使是顆粒全價料)和濃縮料，無須再粉碎，當(dāng)然這是基于混合機的良好混合均度的；如果拿去粉碎，會丟失部分粉末物質(zhì)，且粉碎后產(chǎn)生分級，反而降低了樣品的均質(zhì)性。

   二、試樣的用量
   試樣的用量可根據(jù)情況而定，標(biāo)準(zhǔn)法中規(guī)定為0．5～1g，這個用量對于濃縮料、魚粉、豆粕等高蛋白的樣品尚可，對于諸如稻谷、玉米等低蛋白的樣品則相對較少，可適當(dāng)增加到2～3g，否則，滴定時鹽酸的消耗量只有1～2mL，會增加讀數(shù)和測定的誤差。

   三、樣品的消化
   首先，確定硫酸的用量，要根據(jù)樣品的用量來確定硫酸的用量，如果取2～3g樣，則需25mL硫酸；對于含鹽量高的樣品，如某些劣質(zhì)魚粉、肉骨粉之類，須相應(yīng)增加硫酸用量，因為NaCl+H2SO4→HCL↑，加熱后HCL會揮發(fā)。
消化液中加入大量硫酸鉀或硫酸鈉，其目的是用于提高消化溫度。
   K2SO4+H2SO4→KHSO4
   KHSO4→K2SO4+SO3+H2O
   如消化過程中，隨著硫酸的分解和水分的蒸發(fā)，硫酸鉀的濃度逐漸增大，則消化液沸點升高，加速了有機物的分解速度。但應(yīng)注意硫酸鉀的用量不能過大，如果消化溫度太高，生成的硫酸銨也會分解出氨而使測定結(jié)果偏低。
   （NH4）2SO4→NH3↑+(NH4)HSO4
   （NH4）HSO4→NH3↑+S02↑+H2O
   在消化液冷卻后呈固態(tài)，則表明硫酸鉀用量過大，或硫酸用量不足。事實上，增加試樣量和硫酸量，其混合催化劑的量不必增加。
   在試樣消化過程中，還要加硫酸銅等試劑為催化劑；進一步加速試樣的消化分解。硫酸銅的催化反應(yīng)如下：
   C+2CuSO4→Cu2SO4+SO2↑+CO2↑
   Cu2+2H2SO4→2CuSO4+2H2O-t-S02↑
   除硫酸銅外，常用的催化劑還有汞、氧化汞、硒粉、還原鐵或上述物質(zhì)的混合物。對于一般谷物樣品，如玉米、小麥、稻谷等的消化，用硫酸銅作催化劑，只要適當(dāng)增加鹽用量，使用強熱源，其效果與汞催化劑完全一樣；對于難消化物質(zhì)的樣品，硫酸銅催化效果不如汞，測得蛋白質(zhì)含量偏低。
   用硫酸銅作催化劑的好處，是在蒸餾氨時可作為堿性反應(yīng)的指示劑。
   添加氧化劑可幫助有機質(zhì)消化，但氧化性較強的氧化劑會使氨氧化為氮氣損失。對于富含脂肪或消化過程中易發(fā)泡的樣品，可在消化前添加少量氧化劑，如過氧化氫，一般不用高錳酸鉀和次氯酸作氧化劑。
   有的飼料檢測書上有快速測定蛋白質(zhì)的方法，如硒粉催化法、硒粉過氧化氫催化法、過氧化氫催化法等，按照這些方法測定的蛋白質(zhì)含量常常偏低0.3％～1.0％，如無特殊情況，特別是測定的結(jié)果作為飼料配方的數(shù)據(jù)時，不要用快速測定法。

   四、蒸餾
   氨的蒸餾有兩種方法：常量蒸餾法和半微量蒸餾法。常量法將樣品分解消化后全部用于測定，取樣量大，測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和精確度都很高。半微量法測定結(jié)果精密度稍差一點。一般情況下建議使用半微量法，因為如果蒸餾失敗的話，半微量法還可繼續(xù)蒸餾，而常量法只好全部重來，費時費力。
   半微量法中規(guī)定蒸餾4min，但未規(guī)定從何時計時。其實，蒸餾時間的長短要看蒸汽量的大小，蒸汽量小時須增加蒸餾時間。從筆者多年的經(jīng)驗來看，多蒸餾1～2min對結(jié)果沒有影響，并可隨時用試紙檢查是否蒸餾完全。所以，從何時計時的爭論也就無關(guān)緊要了。
蒸餾時要注意兩點，一是反應(yīng)室里的溶液總體積要控制，也就是說，在沖洗加樣口時用水要少，否則反應(yīng)室溶液體積太大，液面升高，容易噴進冷凝管內(nèi)。二是要控制蒸汽量或火力大小，蒸汽量太大也會將反應(yīng)液噴進冷凝管中；火力太小，蒸餾速度慢，且易發(fā)生倒流；蒸汽產(chǎn)生要均勻，防止暴沸；一定要裝上蒸汽發(fā)生器的安全管，同時加上幾粒玻璃珠。

    五、其它
   鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，常量法中取0.1M比較合適，半微量法中則在0.02～0.05M之間比較合適。
   使用自動滴定管，可提高滴定的速度和減少滴定誤差。

zxhui1030

終于知道在學(xué)校測蛋白時消化液為什么有的凝固有的不凝固了，多謝??！

tony2005428

不用客氣
不知#2現(xiàn)在在那高就？？
那所學(xué)校畢業(yè)？？

馬前卒

謝謝樓主，我學(xué)到如何判斷催化劑添加量添加多少為合適了的方法．

hyy1012

非常感謝給我們提供了這么寶貴的經(jīng)驗！

阿藍(lán)之風(fēng)吟

呵呵:victory:

huhongj0723

實踐出真知，從實踐中來

粗蛋白

謝謝樓主!! 不過對于"（4）對于全價料(即使是顆粒全價料)和濃縮料，無須再粉碎，當(dāng)然這是基于混合機的良好混合均度的；如果拿去粉碎，會丟失部分粉末物質(zhì)，且粉碎后產(chǎn)生分級，反而降低了樣品的均質(zhì)性。"這條我有點疑問,如果顆粒全價料不粉碎, 稱樣時可能就是稱一粒或半粒喲?這樣真正的具有代表性嗎? 我想可能大多數(shù)廠都要粉碎吧?

粗蛋白

向大家了解一個問題: 就是在蒸餾完一個樣品時,必須用蒸餾水反復(fù)淌洗反應(yīng)室確保下一個品種不受污染. 在淌洗時大家是怎樣操作的? 以前我作化驗時是使用乳膠管的蒸汽產(chǎn)生的壓力將淌洗液體放出,速度很快的.如今我們化驗室的同事是用洗耳球去吸出,很費時! 我照以前那樣用蒸汽去放淌洗液, 的確也不象從前,感覺里面壓力不夠, 液體難以排盡.  是不是我們的儀器有問題? 檢查也沒發(fā)現(xiàn)什么異樣. 想聽聽朋友們是怎樣快速放出反應(yīng)室里的淌洗液的?

tony2005428

#8問題：此文是2003年7月25日出版的《飼料廣角》中的一文，作者為：謝飛文（湖南省郴州市九鼎飼料有限公司），“對于全價料(即使是顆粒全價料)和濃縮料，無須再粉碎”我也有疑問，真如你說，在做化驗時，我們也是粉碎的。所以貼出此文，想聽聽大家的意見?！?/td>