動(dòng)物體外診斷試紙卡在基地養(yǎng)殖場的應(yīng)用的討論

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豬 疾 病 快 速 診 斷 試 紙 問 答

問：診斷試紙檢測的基本原理是什么？

玻璃纖維 金標(biāo)墊 硝酸纖維素膜 吸水棉

抗 體

抗 原

抗 體

答：豬疾病診斷試紙采用免疫膠體金層析檢測技術(shù)——雙抗原夾心法對(duì)病毒抗體進(jìn)行檢測。試紙采用一步法固相膜反應(yīng)，當(dāng)血清滴入加樣孔后，溶液開始向顯示窗口方向泳動(dòng)，遇到干燥金標(biāo)抗原溶解。血清中若含有相關(guān)的病毒抗體時(shí)，將會(huì)和膠體金標(biāo)記的抗原形成免疫抗原抗體復(fù)合物，隨溶液一起層析移動(dòng)。在顯示窗口的檢測線（T）處，復(fù)合物中的抗體被預(yù)先包被的純化抗原捕獲截留，復(fù)合物中的膠體金顆粒形成一條紫紅色線，如此則判定為陽性。線的顏色線深淺直接與抗體量的多少成正比。如果樣品中沒有相關(guān)的病毒抗體，則膠體金標(biāo)記的抗原直接層析流過T處，T處保持白色，判定為陰性。溶解在樣品溶液中的膠體金標(biāo)記抗原被攜帶繼續(xù)往前至質(zhì)控線（C）時(shí)，被預(yù)先包被的抗體結(jié)合，形成一條紫紅色線，證明本試紙有效。操作原理示意圖見圖1所示，整個(gè)試驗(yàn)僅需20分鐘。操作簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高，直觀、結(jié)果容易判定。

圖1 免疫膠體金免疫層析原理示意圖

問：診斷試紙?jiān)鯓邮褂?？有哪些使用的技巧與方法？ 答：① 采樣部位的選擇

表1 產(chǎn)品名稱、采樣樣本及結(jié)果判斷效價(jià)值

產(chǎn)品名稱	適用樣本	效價(jià)值
豬瘟病毒（HCV）	豬血清	≥對(duì)照卡中1∶16
豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）	豬血清	≥對(duì)照卡中1∶40
豬圓環(huán)病毒（PCV）	豬血清	≥對(duì)照卡中1∶16
豬偽狂犬病毒（PRV）	豬血清	≥對(duì)照卡中1∶40
豬口蹄疫病毒（ FMDV ）	豬血清	≥對(duì)照卡中1∶40
豬弓形蟲（TOXO）	豬血清

【注】：樣品采集部位的正確選擇對(duì)臨床樣品檢出的準(zhǔn)確性具有重要影響！ ② 血清與血漿的區(qū)別？哪個(gè)檢測效果更好？

血清是血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出，不加抗凝劑，則凝血反應(yīng)被激活，血液迅速凝固，形成膠凍。凝血塊收縮，其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清，也可于凝血后經(jīng)離心取得。

區(qū)別：1、在凝血過程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原；2、在凝血反應(yīng)中，血小板釋放出許多物質(zhì)，各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化，如凝血酶原變成凝血酶，并隨血清存放時(shí)間逐漸減少以至消失。但大量未參加凝血反應(yīng)的物質(zhì)則與血漿基本相同。

為避免抗凝劑的干擾，血液中許多化學(xué)成分的分析，都以血清為樣品。建議您采用血清樣品，對(duì)檢測效果更加準(zhǔn)確。

③ 實(shí)驗(yàn)每次需要多少血清量？加入量是否有限制？

實(shí)驗(yàn)每次滴加血清的量在2-3滴，數(shù)值在80-100 ul，由于檢測區(qū)內(nèi)膜上包被抗原的量是固定的，加入量差20 ul對(duì)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果沒有很大影響，但試紙的液體飽和度有限制≤3滴，所以，您只需要往加樣孔加入2-3滴血清即可。

④ 實(shí)驗(yàn)結(jié)果怎樣判斷？什么時(shí)間判定結(jié)果最合適？

對(duì)于豬疾病的診斷試紙，每種疾病的都有一張比色卡，在加入樣品后的20分鐘內(nèi)，觀察窗內(nèi)色帶與對(duì)照卡的色帶滴度進(jìn)行參照，可大致判斷出抗體效價(jià)的高低。

⑤ 結(jié)果顯示后的說明情況，以豬口蹄疫病檢測為例：

1．被檢樣品檢測線（T）條帶的色澤≥對(duì)照卡中1∶40（效價(jià)）位置條帶色澤時(shí)，說明樣品中豬口蹄疫病毒抗體的滴度較高，暫不需要進(jìn)行疫苗的接種免疫。 2．被檢樣品檢測線（T）條帶的色澤＜對(duì)照卡1∶40（效價(jià)）位置條帶色澤時(shí)，說明樣品中豬口蹄疫病毒抗體效價(jià)不夠抵御豬口蹄疫病毒強(qiáng)毒攻擊的最低保護(hù)滴度，該進(jìn)行疫苗接種。 3．被檢樣品檢測線（T）處無明顯色帶出現(xiàn)，說明樣品中沒有豬口蹄疫病毒抗體。即使豬群健康，也應(yīng)當(dāng)及時(shí)進(jìn)行疫苗接種 4．當(dāng)被檢樣品檢測線（T）條帶的色澤特別深時(shí)，被檢豬即使接種了疫苗，也可能被強(qiáng)毒感染。 問：試紙?jiān)谂R床上具體有哪些應(yīng)用？ 答：1、用于檢驗(yàn)疫苗的質(zhì)量，以及確定免疫的最佳使用劑量 養(yǎng)殖者每次最好購買同一批號(hào)生產(chǎn)的疫苗。在進(jìn)行疫苗質(zhì)量檢測及確定最佳使用劑量的時(shí)候，從中取一瓶疫苗，選擇同一時(shí)間段的乳豬、仔豬、種豬若干頭，分別注射不同劑量的疫苗進(jìn)行免疫接種，免疫后15天采血，用免疫金標(biāo)試紙測定抗體滴度，根據(jù)測定后抗體效價(jià)值，從中選擇免疫頭份少，抗體滴度高作為本批號(hào)疫苗最佳免疫劑量。 如果效價(jià)值達(dá)不到免疫保護(hù)最低水平，則應(yīng)當(dāng)檢查是否是疫苗本身問題，亦或是豬群存在有免疫抑制病毒(如圓環(huán)病毒)等的干擾。 2、科學(xué)地制定仔豬的首免時(shí)間 仔豬的首免時(shí)間確定受許多因素的影響，如母源抗體的水平高低、仔豬是否吃到初乳或吃到初乳量的多少，確立仔豬的首免時(shí)間可以采用動(dòng)態(tài)監(jiān)測仔豬抗體水平的高低，不同豬群采用個(gè)性化的免疫程序，免疫膠體金試紙為動(dòng)態(tài)監(jiān)測提供了技術(shù)支持。 3、監(jiān)測懷孕母豬抗體水平，為母豬及仔豬提供合理保護(hù)（以豬瘟為例） 當(dāng)母豬分娩時(shí)，用豬瘟抗體免疫金標(biāo)試紙條檢測母豬的抗體水平。如果豬瘟抗體效價(jià)＜1:16，說明母豬體內(nèi)的豬瘟抗體滴度無法抵抗豬瘟強(qiáng)毒攻擊的最低保護(hù)抗體，母豬應(yīng)當(dāng)及時(shí)進(jìn)行豬瘟疫苗接種，同時(shí)乳豬應(yīng)當(dāng)及時(shí)采用超前免疫，以免發(fā)生豬瘟病。如果母豬檢測豬瘟抗體效價(jià)＞1:16，說明體內(nèi)的豬瘟抗體滴度較高，可以抵抗豬瘟強(qiáng)毒的攻擊，乳豬不需要進(jìn)行超前免疫，乳豬可通過母乳獲得母源抗體而達(dá)到保護(hù)，乳豬可按照正常的免疫程序進(jìn)行免疫保護(hù)。 4、對(duì)家畜流動(dòng)性頻繁的地區(qū)，可開展疾病的前期篩查工作，減少傳染病的區(qū)域傳播 當(dāng)從外地區(qū)或外省購進(jìn)大批量仔豬或種豬時(shí)，購買者無法了解購買的豬只免疫情況。通過隨機(jī)抽選豬只，進(jìn)行免疫金標(biāo)試紙的快速檢測，根據(jù)檢測結(jié)果采取相應(yīng)的措施，并且可以了解整群的免疫水平，為下一步的免疫奠定基礎(chǔ)，若是出現(xiàn)發(fā)病狀況，也能及時(shí)采取合理的防治措施，減少購買者的最低經(jīng)濟(jì)損失。 5、懷疑豬場豬群發(fā)病，對(duì)發(fā)病情況的監(jiān)測 懷疑豬場發(fā)生豬瘟病時(shí)，采集病豬血清（血液）用金標(biāo)檢測試紙檢測。如果是發(fā)生豬瘟病時(shí)，檢測沒有抗體或抗體滴度很低，可作為發(fā)生豬瘟病的診斷參考。當(dāng)然，發(fā)生過豬瘟病后痊瘉的，抗體滴度可能會(huì)很高。

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