消化時(shí)間對(duì)總氮測(cè)定結(jié)果的影響

dazhui

消化時(shí)間對(duì)總氮測(cè)定結(jié)果的影響

俞玉忠，倪明敏，劉申歌

　　凱氏定氮法由于設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，因此在生物醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、食品等領(lǐng)域的檢測(cè)中應(yīng)用較廣，經(jīng)常用此法來推算樣品中粗蛋白的含量。但凱氏定氮法對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程的控制要求較高，不同的實(shí)驗(yàn)人員往往會(huì)得到不同的檢測(cè)結(jié)果，誤差較大。消化時(shí)間不一樣，結(jié)果也會(huì)有較大差異，我們?cè)谶@方面作了初步探討，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 原理

　　硫酸與蛋白質(zhì)類有機(jī)物共熱消化，在催化劑作用下，能使該有機(jī)物分解，其中C,H 以CO:和H2O的形式逸出，而N則轉(zhuǎn)化成(NH4)2SO4留在溶液中，再在強(qiáng)堿作用下加熱蒸餾，NH3被硼酸吸收為(NH4)2B407，然后用標(biāo)準(zhǔn)稀硫酸溶液滴定，根據(jù)滴定液的濃度及消耗量即可計(jì)算出樣品中的總氮含量。

2 材料和方法

2.1 樣品腦蛋白水解物注射液，廣東省藥物研究所制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)為20021157, 2.2 試劑硫酸鉀，廣東汕頭市西隴化工廠，批號(hào)為0212151;硫酸銅，廣東汕頭市西隴化工廠，批號(hào)為

0106061;氫氧化鈉，杭州化學(xué)試劑有限公司.批號(hào)為20031024;硼酸，余杭市高晶精細(xì)化工有限公司，批號(hào)為20020410。以上試劑均為分析純。

2.3 總氮的測(cè)定

2.3.1
消化準(zhǔn)確量取0.25 ml，腦蛋白水解物注射液置于50m1,凱氏燒瓶中，然后加人硫酸鉀。0.3g及30%硫酸銅溶液5滴，再加入濃硫酸2ml.及玻璃珠1粒，在燒瓶口上放一小漏斗后以450角斜置于電爐上，緩緩加熱，同時(shí)做12個(gè)樣品。待泡沸停止后逐步加大火力，當(dāng)溶液沸騰至澄明的綠色后開始計(jì)時(shí)，根據(jù)試驗(yàn)要求，分別繼續(xù)加熱10min,20 min,40 min,80min，每個(gè)時(shí)間段各做3個(gè)樣，同樣分別做空白對(duì)照樣品1個(gè)。

2. 3. 2
蒸餾消化好的樣品放冷后，加水2mL，然后全部移人凱氏定氮儀中的蒸餾瓶?jī)?nèi)，加40% 氫氧化鈉溶液lOm I.，加熱蒸餾，在冷凝管處用lOm L2%硼酸溶液吸收。

2. 3. 3
滴定硼酸吸收液用0. 005mo1·L-1‘的硫酸滴定液進(jìn)行滴定，根據(jù)滴定液的用量及濃度計(jì)算樣品中的總氮含量。

3 結(jié)果和分析

從結(jié)果可以看出，加熱20min與加熱10mi的總氮結(jié)果之間的差異不顯著，但40min與20min

之間及40min與80min之間的結(jié)果都有極顯著的差異，而且樣品加熱40min后檢測(cè)的總氮值為最高。

4 討論

　　從試驗(yàn)結(jié)果看，用凱氏定氮法測(cè)腦蛋白水解物注射液的總氮時(shí)，最佳消化時(shí)間應(yīng)為溶液變澄明綠色后繼續(xù)加熱40min左右，這跟藥典中推薦的溶液變澄明綠色后繼續(xù)加熱l0min有差異。

　　用凱氏定氮法檢測(cè)其他樣品總氮時(shí)，同樣要控制好消化時(shí)間，時(shí)間過短，則樣品未完全消化，致使結(jié)果偏低;時(shí)間過長(zhǎng)，結(jié)果也會(huì)偏低，這可能是因?yàn)樾〔糠值S水蒸汽一起逸出引起的。

dazhui

助您省心、省事、省時(shí)、省錢！測(cè)蛋白消化1小時(shí)

wgf818283

澄明的綠色怎么判定,里邊一點(diǎn)黑點(diǎn)都沒有開始算起嗎

waterer

應(yīng)該是沒有黑點(diǎn)，很透明的綠色．

dazhui

因?yàn)橄瘯r(shí)間對(duì)測(cè)量準(zhǔn)確度影響大,所以要考慮催化劑的成分\消化時(shí)間,需要摸索條件.本人推薦使用催化劑片，比較方便，催化劑添加量準(zhǔn)確

微塵

催化劑片
foss催化劑片好像1元一片

微塵

對(duì)于高蛋白原料可以考慮多消化點(diǎn)時(shí)間比如：魚粉、玉米蛋白粉

AQ

好好學(xué)習(xí)??！樓主辛苦了。

dazhui

凱氏定氮法測(cè)定蛋白含量,是一種標(biāo)準(zhǔn)方法,消化過程是比較關(guān)鍵的,國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)消化的描述并不多,但對(duì)催化劑的選擇做了明確規(guī)定(量和種類).我就研究催化劑的一些體會(huì)與大家分享.
      1、催化劑基本上都是K2SO4/CuSO4的配方。每種成分的作用大家都明白，但需要各位根據(jù)自己實(shí)際情況選擇添加量和配比。如果硫酸鉀太多，導(dǎo)致溫度過高，也會(huì)導(dǎo)致結(jié)晶，結(jié)果偏低；硫酸銅過多，銅容易形成絡(luò)合物，導(dǎo)致結(jié)果偏低。
      2、催化劑的添加量，一定不要圖省事而不稱量。這樣回導(dǎo)致系統(tǒng)誤差，來自于反應(yīng)溫度、催化的快慢。
      3、消化時(shí)間。過短與過長(zhǎng)均會(huì)帶來誤差，這要求使用催化性能好的催化劑，有利于快速地催化完成，每個(gè)樣品同時(shí)消化完成。就好象一輛夏利、一輛奔馳，要求同時(shí)加速跑完一定距離，奔馳還不先要休息，否則肯定跑過了線，夏歷找不到了。
     4、條件的摸索很重要。特別是使用一種催化劑片，可以帶去很多方便，能解決以上問題，價(jià)格可能在0.5元/片。
     希望大家一起來交流，切實(shí)提高畜牧業(yè)的檢測(cè)水平。

dazhui

約5-6毛一片