葛根水煎液對(duì)未性成熟小白鼠子宮和卵巢組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

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葛根水煎液對(duì)未性成熟小白鼠子宮和卵巢組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響 巴音吉日嘎拉1金曉2朝魯孟1    1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與醫(yī)學(xué)學(xué)院 010018 2.內(nèi)蒙古自治區(qū)動(dòng)物防疫監(jiān)督檢驗(yàn)所010051

摘要 本實(shí)驗(yàn)研究，生后21天的未性成熟雌小白鼠14只，體重為19.13±2.23g，各窩隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。給實(shí)驗(yàn)組灌胃葛根水煎液0.25ml，相當(dāng)于每毫升含生藥0.5g，對(duì)照組灌胃給于0.25ml 蒸餾水，其他條件都一樣。每組每天灌藥或蒸餾水一次，連續(xù)用16天，停藥后把小白鼠切開(kāi)頸部皮膚，切斷頸動(dòng)脈處死，剖腹取出子宮，卵巢稱重。結(jié)果證明，葛根水煎液對(duì)小白鼠的體重沒(méi)有明顯的增重作用，對(duì)小白鼠子宮、卵巢有一定的增重作用。在組織形態(tài)學(xué)上，葛根水煎液對(duì)小白鼠的子宮腺體數(shù)量和卵巢的卵泡數(shù)量有明顯增多作用?？傊?，葛根能促進(jìn)未性成熟小白鼠的子宮、卵巢的發(fā)育。 關(guān)鍵詞葛根子宮卵巢小白鼠     隨著世界各國(guó)對(duì)天然藥品需求的不斷增加，天然藥物在世界醫(yī)藥中的影響和地位日益受重視。中草藥來(lái)于大自然屬于天然藥物，具有資源豐富，療效確切，不良反應(yīng)小等特點(diǎn)，中草藥是歷史悠久的傳統(tǒng)藥物，隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步和國(guó)內(nèi)外新藥研制開(kāi)發(fā)中面臨越來(lái)越激烈的競(jìng)爭(zhēng)和挑戰(zhàn)，新藥研究的重點(diǎn)日益轉(zhuǎn)向傳統(tǒng)中藥及天然藥物活性成分的開(kāi)發(fā)和利用，中藥活性成分是其發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，它的深入研究是中藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵。揭示中藥的作用機(jī)制，合理應(yīng)用中草藥才能充分發(fā)揮其新的藥用價(jià)值。     葛根為豆科植物野葛或粉葛的根，具有發(fā)表解肌，升陽(yáng)透疹，解熱生津等作用，對(duì)心血管系統(tǒng)，免疫系統(tǒng)的疾病有較好的治療效果。下面就將葛根及其主要有效成分的藥代動(dòng)力學(xué)研究、藥理作用及臨床應(yīng)用綜述如下[1]。     化學(xué)成分：葛根為豆科植物，分布在亞洲溫?zé)釒У挠?0余種，我國(guó)約有10多種，以野葛和粉葛分布最廣，產(chǎn)量最高，其根中主要含有（1）黃酮類：黃豆甙元和葛根素等；（2）葛根 A，B，C；（3）三 類主要以葛皂醇A，B，C命名的7種新型齊墩果醇烷型醇類化合物；（4）生堿類。     藥代動(dòng)力學(xué)研究：藥物在體內(nèi)的吸收研究表明，大鼠口服14C黃豆甙元0.5h后血內(nèi)顯放射性，大鼠口服近1h后，從胃腸道消失28%，此時(shí)尿中已有甙元排出，可見(jiàn)該藥吸收較快。灌胃24h后，自糞便及胃腸道內(nèi)容物回收的放射性物質(zhì)占74。5%，說(shuō)明該藥胃腸吸收并不完全。另外，大鼠口服500ml/kg與50mg/kg后，藥物自胃腸道消失率的對(duì)比實(shí)驗(yàn)未見(jiàn)顯著差異說(shuō)明上述吸收不完全與劑量關(guān)系不大，但增加口服劑量，可提高吸收的絕對(duì)量。藥物在體內(nèi)的分布在大鼠、兔、狗、人的實(shí)驗(yàn)中表明，葛根素在體內(nèi)分布快且較廣，靜脈注射后藥物在各組織中的分布以腎、血漿、肝中較高；睪丸、心臟、肌肉和脾次之。葛根素可通過(guò)血腦屏障進(jìn)入腦內(nèi)，但含量較低。蛋白結(jié)合率分別為32.5±4.4%，27.1±3.1%，24.6±3.5及15.8%。對(duì)比實(shí)驗(yàn)表明黃豆甙元血漿蛋白結(jié)合能力較葛根素強(qiáng)，有近半量（42.4%）可與血漿蛋白結(jié)合，這可能是影響其透過(guò)血腦屏障的原因。當(dāng)用乙醇沉淀血漿蛋白時(shí)0.15%以上的藥物能被乙醇提取出。說(shuō)明甙元與血漿蛋白的結(jié)合校疏松。這種可逆性的結(jié)合對(duì)延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間具有定意義。     藥理作用：對(duì)心腦血管的作用（1）改善腦循環(huán)：葛根總黃酮注射于麻醉犬的頸動(dòng)脈能使腦血流量迅速而明顯地增加，腦血管阻力降低，給高血壓動(dòng)脈硬化的患者肌肉注射，則可使腦血管阻力減少，血流入時(shí)間縮短，波幅和快流段增加，波形好轉(zhuǎn)，其作用溫和，并非單向擴(kuò)張血管增加血流，而是使低幅波升高，高幅波降低，使異常波趨向正常。（2）改善微循環(huán)作用：葛根素?zé)o論對(duì)正常金地鼠微循環(huán)，還是對(duì)局部滴加去甲腎上腺素引起的微循環(huán)障礙都有明顯的改善作用，主要表現(xiàn)為增加微血管運(yùn)動(dòng)的振幅，提高局部微血流量。（3）對(duì)缺血心肌的保護(hù)作用：靜脈注射葛根素能使犬中度缺血區(qū)的心肌血流量增加，進(jìn)入缺血區(qū)的血流增多，但嚴(yán)重缺血區(qū)的血流量無(wú)明顯改變。腹腔注射200mg/kg葛根素對(duì)垂體后葉素所致大鼠心肌缺血有明顯改善作用，采用低溫體外循環(huán)下犬動(dòng)物模型，用電鏡觀察從形態(tài)學(xué)方面證明葛根素對(duì)停搏140min的全心缺血心肌的超微活物具有良好的保護(hù)作用。這可能使葛根素對(duì)缺血心肌有保護(hù)作用的電生理基礎(chǔ)，其對(duì)腦缺血有保護(hù)作用。（4）抗心律失常作用：葛根黃酮、黃豆甙元和葛根醇提取物對(duì)烏頭堿、氯化鋇、氯化鈣、氯仿以及腎上腺素所致的心律失常有明顯的對(duì)抗作用，說(shuō)明葛根成分可能影響細(xì)胞膜對(duì)鉀、鈣、鈉離子通道的通透性而減低心肌興奮性，預(yù)防心律失常發(fā)生。     對(duì)免疫作用的影響：葛根使巨噬細(xì)胞的異物吞噬功能活化，而使初期感染狀態(tài)下的異物排除功能增強(qiáng)；通過(guò)活化的巨噬細(xì)胞對(duì)細(xì)胞性免疫施以影響。     葛根素和葛根總異黃酮的雌激素樣作用：葛根素和葛根總異黃酮對(duì)雌激素低下的動(dòng)物顯示弱雌激素活性，對(duì)正常雌激素水平的動(dòng)物無(wú)明顯雌激素樣活性，而在合用雌二醇時(shí)，則部分抑制雌二醇的促子宮生長(zhǎng)作用提示葛根素和葛根總異黃酮具有雌激素受體部分激動(dòng)劑的特性[2]。     對(duì)大鼠乳腺、子宮的發(fā)育作用：葛根提取物能顯著提高未成熟大鼠乳腺和子宮重量，能促進(jìn)未成熟大鼠乳腺及子宮發(fā)育。還證明葛根提取物能增加大鼠血清促卵泡生成素（FSH）、促黃體生成素（LH）雌二醇（E2）含量，減低泌乳素（PRL）含量[3]。     以上研究結(jié)果來(lái)看，葛根對(duì)心腦血管有保護(hù)和改善作用，有抗促癌及誘導(dǎo)癌細(xì)胞的分化作用。葛根對(duì)母鼠生殖器官有顯著作用，但葛根對(duì)子宮卵巢形態(tài)組織上的影響研究比較少，針對(duì)解決上述問(wèn)題，進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)。 1材料及方法 1.1材料 1.1.1動(dòng)物： 20日齡的未性成熟雌性小白鼠，內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供。 1.1.2藥物：葛根，按常規(guī)水煎濃縮成0.5g/ml煎劑。 1.1.3 試劑與藥品：固定液、HE染色液、各濃度的乙醇、透明液、二甲苯、冰醋酸等。 1.1.4儀器 顯微鏡、切片器、天平和其他實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。 1.2 方法     取14只小白鼠，將各窩小白鼠隨機(jī)分成對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組，稱重，適應(yīng)環(huán)境一個(gè)星期，自由飲水，固體顆粒飼料（內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供）飼養(yǎng)，一天24小時(shí)的燈光來(lái)保持溫度，溫度（26±2）oC。第27天開(kāi)始灌藥，灌藥時(shí)間早上，用藥前稱重，記錄，一直保持到停藥為止，灌藥時(shí)先準(zhǔn)備1ml注射器，然后保定小白鼠，實(shí)驗(yàn)組灌胃葛根0.25ml，對(duì)照組灌胃相等量的蒸餾水，其他條件同樣。每組每天灌胃一次，連續(xù)16天。停藥后的第二天，把小白鼠仰位保定在小板上，切開(kāi)頸部皮膚切斷頸動(dòng)脈放血致死，剖服取出子宮、卵巢稱重，放在配好的固定液內(nèi)。然后把組織塊修好后，在流水洗12小時(shí)以上。脫水透明，浸蠟等過(guò)程。然后修塊焊塊做切片，厚度為5um玻璃片上固定。然后用HE染色液進(jìn)行染色，最后封片。 2結(jié)果 2.1葛根對(duì)小白鼠體重方面的影響（見(jiàn)表1和曲線1） 表1對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的體重比較（g） 1—4天5—8天9—12天13—16天 對(duì)照組20.37±2.4222.78±1.7323.19±1.7924.18±2.65 實(shí)驗(yàn)組20.65±0.7822.79±0.04 24.41±0.80 25.43±1.47 曲線1對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組體重比較曲線 1-2d5-8d9-12d13-16d 結(jié)果表明,葛根對(duì)小白鼠的體重沒(méi)有明顯的作用。 2.2葛根對(duì)小白鼠子宮卵巢重量的影響（見(jiàn)表2） 表2對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的子宮卵巢重量比較（g） 子宮卵巢重量（P）P/體重 對(duì)照組0.1000±0.06030.0039±0.0022 實(shí)驗(yàn)組0.1252±0.07730.0049±0.0029 結(jié)果表明，葛根對(duì)子宮卵巢重量有一定的增重作用。 2.3 組織形態(tài)學(xué)觀察 （見(jiàn)表3）     對(duì)照組的卵巢結(jié)構(gòu)為卵巢外層疏松結(jié)締組織構(gòu)成的，皮質(zhì)比較寬，生長(zhǎng)卵泡多，還有少數(shù)初級(jí)卵泡和閉鎖卵泡（見(jiàn)圖1）。     實(shí)驗(yàn)組的卵巢結(jié)構(gòu)為皮質(zhì)很寬，內(nèi)含大量卵泡，皮質(zhì)的基質(zhì)是疏松結(jié)締組織，髓質(zhì)位于卵巢的內(nèi)區(qū)，其中含有神經(jīng)，許多大而卷區(qū)的血管和淋巴管，少數(shù)初級(jí)卵泡和閉鎖卵泡，生長(zhǎng)卵泡很多。有接近成熟卵泡，在顆粒細(xì)胞間尚未出現(xiàn)充滿液體的腔-卵泡腔（見(jiàn)圖2）。     對(duì)照組的子宮結(jié)構(gòu)包括子宮內(nèi)膜，肌層和子宮外膜。子宮外膜疏松結(jié)締組織構(gòu)成的，很明顯，內(nèi)膜上皮層柱狀上皮，固有膜淺層細(xì)胞成分少，深層細(xì)胞成分較多，子宮腺體主分布于固有膜淺層，子宮肌內(nèi)層深部血管比較發(fā)達(dá)（見(jiàn)圖3）。     實(shí)驗(yàn)組的子宮結(jié)構(gòu)也是包括子宮內(nèi)膜，肌層，子宮外膜。子宮外膜：由疏松結(jié)締組織覆蓋腹膜間質(zhì)構(gòu)成。子宮?。喊▋?nèi)環(huán)外縱行平滑肌層，兩肌層間有大的動(dòng)脈，靜脈和淋巴管。內(nèi)膜：固有黏膜下層的表層由疏松結(jié)締組織構(gòu)成，其中的細(xì)胞比表層的少的多。實(shí)驗(yàn)組跟對(duì)照組相比子宮腔發(fā)達(dá)，子宮腺體數(shù)量增多，子宮肌纖維層變厚兩肌層間血管發(fā)達(dá)，子宮徑增加（見(jiàn)圖4）。 表3對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組鏡下觀察比較（個(gè)、ug） 卵巢生長(zhǎng)子宮腺體子宮直徑 卵泡數(shù)量數(shù)量 對(duì)照組23±016±48.8±3.5 實(shí)驗(yàn)組47±1024±89.0±2.8 3討論：     子宮的發(fā)育受下丘腦垂體神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)控，促性腺激素、性激素、生長(zhǎng)激素可促進(jìn)子宮和卵巢的發(fā)育，其中雌激素對(duì)子宮和卵巢的發(fā)育中起重要作用。研究證明葛根水煎液的主要成分是黃酮類和葛根素類，具有雌激素樣作用，既促子宮及卵巢的發(fā)育[5]。本次研究證明，葛根水煎液能顯著促進(jìn)未成熟大鼠的子宮、卵巢的發(fā)育，使小白鼠的子宮卵巢的重量增加，還有小白鼠的子宮腺體數(shù)量和卵巢的卵泡數(shù)量明顯增多。從組織學(xué)角度上也證明，葛根水煎液確實(shí)有有雌激素樣作用，既促子宮及卵巢的發(fā)育。這結(jié)果與薛曉鷗等[2，3，4]結(jié)果一致。這可能是葛根水煎液中的雌激素樣作用所致，即作用于下丘腦和垂體，促進(jìn)FSH、LH、PRL分泌，增加內(nèi)源性FSH、LH、PRL水平。發(fā)揮促進(jìn)子宮發(fā)育的作用。卵巢是雌性的性腺，卵巢的周期改變產(chǎn)生性周期，下丘腦-垂體-卵巢軸三者之間是在相互影響，相互制約中維持著內(nèi)分泌的動(dòng)態(tài)平衡。葛根提取物能促進(jìn)未成熟雌性小白鼠子宮、卵巢的發(fā)育，使子宮卵巢功能正常發(fā)揮，子宮重量增加，表明其對(duì)垂體-卵巢軸具有興奮作用。也有認(rèn)認(rèn)為葛根具有植物激素可代替雌激素對(duì)機(jī)體進(jìn)行調(diào)節(jié)，葛根水煎液中確有此類化合物[5]，能促進(jìn)雌性卵巢與子宮的發(fā)育，部分是其直接作用于卵巢、子宮，部分間接作用于卵巢和子宮，是通過(guò)垂體-子宮-卵巢軸有調(diào)整作用[3]。其作用機(jī)理和葛根水煎液的有效成分待進(jìn)一步研究。