飼料防霉劑防霉效果的檢測方法

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發(fā)表于 2008-5-1 06:39:53 | 只看該作者回帖獎勵

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盲目挑選和使用飼料防霉劑，往往不僅事與愿違，更會危害飼料企業(yè)的經(jīng)濟(jì)利益及品牌聲譽(yù)。所以，掌握并采用科學(xué)、正確、有效的檢測方法，自我判別防霉劑產(chǎn)品之優(yōu)劣是各飼料企業(yè)維護(hù)自身利益的當(dāng)務(wù)之急。
　　目前用于飼料防霉劑防霉效果的檢測對比之方法有：杯碟法、最低抑菌濃度法、二氧化碳釋放法、溫度測定法、飼料常規(guī)試驗、高溫高濕法等。杯碟法測定最大抑菌圈直徑，用其大小來定量測定其防霉效果，試驗要求選配一種理想溶劑，要求較高、操作復(fù)雜；最低抑菌濃度法需將各種防霉劑配成濃度梯度液，工作量大，與杯碟法一樣僅適于作初選、速選之用；二氧化碳釋放法較難掌握急劇釋放CO2的時間，需把握臨界時段，而且所需儀器昂貴；溫度測定法利用飼料異常發(fā)熱是飼料霉變的前兆這一特點，它同飼料常規(guī)試驗一樣檢測耗時很長，需2～3個月；高溫高濕法著重憑借肉眼觀察外觀，準(zhǔn)確性不理想。
　　本檢測方法是將現(xiàn)行的GB13092—91《飼料中霉菌檢測方法》具體應(yīng)用于飼料防霉劑防霉效果的對比檢測，經(jīng)多年實踐驗證，此方法操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確；在多家飼料生產(chǎn)廠家應(yīng)用，認(rèn)為切實可行。

1原理
　　根據(jù)霉菌生理特性和防霉劑防霉作用機(jī)理，選擇適宜霉菌生長而不適宜細(xì)菌生長的培養(yǎng)基，采用平皿計數(shù)方法，在一定菌液中加入一定量的防霉劑，培養(yǎng)后測定霉菌菌落總數(shù)。菌落總數(shù)越少，表明其防霉抑菌效果越佳，并根據(jù)測的數(shù)據(jù)計算出各防霉劑的抑菌率來準(zhǔn)確表示。

2材料與設(shè)備
　　分析天平（感量0．0001g）、霉菌培養(yǎng)箱（10℃±1℃～50℃±1℃）、高壓滅菌器（電熱式蒸汽消毒器）、干燥箱（50℃±1℃～250℃±1℃）、水浴鍋（30℃±1℃～80℃±1℃）、振蕩器（往復(fù)式）、電爐、試管架、玻璃三角瓶（250ml）、試管（25ml）、平皿（Φ9cm）、吸管（1ml、10ml、100ml）、量筒（25ml、100ml）、洗耳球、無菌工作臺。

3試劑及配制

3．1高鹽察氏培養(yǎng)基

3.1.1成分硝酸鈉2g、磷酸二氫鉀1g、硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0．5g、氯化鉀0．5g、硫酸亞鐵0．01g、氯化鈉60g、蔗糖30g、瓊脂20g、蒸餾水1000ml。上述試劑，瓊脂為生化試劑，其余為分析純試劑。

3.1.2制法用蒸餾水加溫溶解以上成分，分裝后，于115℃高壓滅菌30min。必要時，可酌量增加瓊脂。

3．2稀釋液

3.2.10．85％生理鹽水稱取分析純NaCl8．5g，定容1000ml。

3.2.2制法121℃高溫高壓滅菌30min。

3．3所有玻璃器具采用干法滅菌在160℃下滅菌1．5h～2h。

4操作步驟

4．1稱取有霉菌的飼料25g，放入含有225ml滅菌生理鹽水的250ml三角瓶中，置振蕩器上振蕩30min。

4．2用10ml吸管吸取10ml1∶10的上述稀釋液于25ml試管中，用洗耳球及1ml吸管反復(fù)吹吸50次，使霉菌孢子分散開。取1ml此稀釋液加入9ml生理鹽水，充分混勻得1∶100稀釋液。取1∶100稀釋液1ml，加到100ml滅菌生理鹽水中，充分混勻得1∶10000帶有霉菌的稀釋液（此稀釋液每毫升含霉菌菌落數(shù)大致100個）。

4．3取1∶10000帶菌液，用1ml滅菌吸管吸取1ml于平皿中。

4．4稱取各防霉劑0．2000g分別置于250ml滅菌的三角燒瓶中，加滅菌后的生理鹽水100ml，放置振蕩器上振蕩30min取下，置電爐上加溫至50℃左右3min～5min，使防霉劑的有效成分充分溶解。

4．5取帶有防霉劑（4．4）溶液1ml（充分混勻后再?。?，放置于帶有1ml霉菌孢子溶液的平皿中，搖勻。每一種防霉劑樣品均做雙皿。

4．6將滅菌后涼至45℃左右的高鹽察氏培養(yǎng)基15ml～20ml注入各平皿中，充分混勻，待瓊脂凝固后倒置于25℃～28℃的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)3d后開始觀察，培養(yǎng)觀察一周。

4．7每一批樣品做兩份含1ml霉菌不加防霉劑的空白試驗。

4．8計算以加了各種防霉劑平皿的霉菌菌落數(shù)與不加防霉劑含1ml霉菌的平皿的霉菌菌落數(shù)相比較，計算出各防霉劑的抑菌率。

5注意事項

5．1培養(yǎng)基應(yīng)煮沸后再分裝、滅菌。

5．2飼料空白的霉菌孢子一定要充分打散，分布均勻。

5．3在稀釋、取樣過程中，每稀釋1次，每取樣1次，均應(yīng)更換另一支干凈的滅菌吸管。

5．4抑菌率的大小與霉菌空白數(shù)緊密相關(guān)，各防霉劑的抑菌率在同一次實驗條件下才能公平比較。每皿菌落數(shù)控制在30～150，代表性比較好。

5．5檢樣從開始稀釋到傾注最后一個平皿所用時間不宜超過20min。

5．6各步操作切記無菌操作
　　此方法除用于檢測對比飼料防霉劑防霉效果以外，也可用于檢測飼料各原材料的帶菌程度，根據(jù)飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB13078—91準(zhǔn)確判定原材料的新鮮程度，從而達(dá)到準(zhǔn)確監(jiān)控各原材料品質(zhì)之目的。同時可將加有防霉劑的培養(yǎng)物與未加防霉劑的飼料空白培養(yǎng)物做對比，結(jié)合低倍活物鏡檢，初步確定各防霉劑有效抑制霉菌的種屬，可看出各防霉劑對各種霉菌殺菌作用力。