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發(fā)表于 2008-6-13 16:38:45
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豬繁殖與呼吸系統(tǒng)綜合征實驗室檢測技術(shù)
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豬繁殖與呼吸系統(tǒng)綜合征實驗室檢測技術(shù)
豬繁殖與呼吸系統(tǒng)綜合征(PRRS)又稱藍(lán)耳病,是由豬繁殖與呼吸系統(tǒng)綜合征病毒(PRRSV)引起的目前危害養(yǎng)豬業(yè)的主要疾病之一,主要表現(xiàn)為母豬繁殖障礙及不同日齡豬的呼吸道癥狀。藍(lán)耳病病毒在豬群中持續(xù)感染,可破壞各個日齡豬免疫系統(tǒng)功能,使豬群對其他病原體易感,嚴(yán)重影響其他疫苗的免疫效果,極大的降低的豬群的生產(chǎn)性能。
近年來,該病在我國出現(xiàn)新的流行特點,病毒發(fā)生變異,致病力增強,在部分地區(qū)出現(xiàn)大規(guī)模爆發(fā)流行。臨床以高熱、皮膚發(fā)紺、眼結(jié)膜炎、呼吸系統(tǒng)癥狀、神經(jīng)癥狀及死亡為主,表現(xiàn)為發(fā)病快、癥狀嚴(yán)重、病變明顯,死亡率高,給我國養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
因此,對藍(lán)耳病進(jìn)行及時確診、監(jiān)測豬群流行動態(tài)、評估豬群感染壓力,從而為確定豬群免疫疫苗類型及免疫時機(jī),及時有效的控制和預(yù)防該病顯得尤為重要。而在實際工作中,根據(jù)需要科學(xué)的選擇檢測方法,根據(jù)檢測目的嚴(yán)謹(jǐn)?shù)倪x擇檢測試劑盒是實驗室檢測工作準(zhǔn)確的服務(wù)于臨床免疫決策、生物安全風(fēng)險評估、流行動態(tài)監(jiān)測等目的的基本保證。如果試驗方法選擇不當(dāng)可能使結(jié)論謬以千里,如果試劑盒選擇不當(dāng)無異于得到盲目的結(jié)論。
豬藍(lán)耳病診斷檢測試劑品種繁多,依據(jù)其主要用途,可以分為兩大類;一類是基于分子生物學(xué)的RT-PCR診斷試劑,主要用于發(fā)病快速診斷和豬群帶毒狀況和種類的檢測;另一類為基于免疫學(xué)的ELISA檢測試劑,主要用于豬場藍(lán)耳病感染壓力評估、疫苗免疫種類的確定和免疫時機(jī)確定以及免疫效果評估等。下面將分別加以介紹。
一、病原學(xué)檢測
藍(lán)耳病在我國各省市普遍流行,臨床癥狀與豬瘟、偽狂犬、豬細(xì)小病毒病、豬乙型腦炎、豬弓形體病等癥狀相似,僅從臨床癥狀及大體剖檢病變很難進(jìn)行確診,必須依賴實驗室檢測。用于病原學(xué)檢測的方法主要有病毒分離鑒定、核酸探針技術(shù)、RT-PCR檢測和免疫組化方法。目前RT-PCR已有商品化試劑盒可供操作,在大型養(yǎng)殖企業(yè)的實驗室中正逐步發(fā)揮敏感、特異及時確診的作用,在該病突發(fā)時,能夠做到快速診斷及時采取措施,從而最大限度的降低損失。
隨著病毒核酸提取技術(shù)的不斷改進(jìn),RT-PCR試劑盒操作的快捷性能也在不斷提升,目前商品化試劑盒已經(jīng)由異硫氰酸胍法提取病毒RNA、TRIzol方法提取病毒RNA逐步轉(zhuǎn)變?yōu)槔眯闹鶅?nèi)硅基質(zhì)膜提取,省去了繁雜的步驟和對離心機(jī)等設(shè)備的較高要求,越來越為基層實驗室提供了應(yīng)用的便利。另外,對于進(jìn)行大量監(jiān)測和深入研究工作的實驗室,為了提高工作效率、最大程度的降低污染的可能性、對病毒核酸含量進(jìn)行量化,實時熒光RT-PCR試劑盒是首要的選擇。北京世紀(jì)元亨動物防疫技術(shù)有限公司,正是基于以上原因,積極研制開發(fā)了豬繁殖與呼吸綜合征病毒(通用型、變異型)柱式提取改良的普通RT-PCR試劑盒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒(通用型、變異型)柱式提取熒光RT-PCR試劑盒。使用者應(yīng)結(jié)合自己的實際工作需要和實驗室基礎(chǔ)設(shè)施配備情況進(jìn)行選擇使用普通RT-PCR方法或?qū)崟r熒光RT-PCR方法;根據(jù)以下介紹選擇選擇不用類型的檢測試劑盒:
1、豬繁殖與呼吸綜合征病毒RT-PCR診斷試劑盒(通用型)
豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR),用于檢測豬血清、精液和組織中的PRRSV,適用于PRRSV的檢測、診斷和流行病學(xué)調(diào)查。
2、豬繁殖與呼吸綜合征病毒RT-PCR診斷試劑盒(變異株)
本試劑采用RT-PCR方法檢測豬肺、腦等臟器組織和血清中的PRRSV(Nsp2 1594-1680變異株)的RNA,適用于PRRSV(Nsp2 1594-1680變異株)的診斷、檢測和流行病學(xué)調(diào)查。
二、血清學(xué)檢測
對于規(guī)?;B(yǎng)殖場來說,豬群的日??贵w水平監(jiān)測是選擇疫苗、評估免疫程序合理性、掌握豬群健康狀態(tài)的重要手段,同時也可從側(cè)面反映豬場管理是否合理,因此是養(yǎng)殖企業(yè)疫病監(jiān)測工作的重點。目前用于PRRSV抗體檢測的方法有免疫熒光實驗(IFA)、免疫過氧化物酶單層分析法(IPMA)、中和實驗(SVN)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。與其他方法相比,ELISA檢測操作簡便,易于標(biāo)準(zhǔn)化,快速敏感,非常適合進(jìn)行大規(guī)模流行病調(diào)查和疫病監(jiān)測。
國內(nèi)外學(xué)者在PRRSV抗體ELISA試劑盒的研發(fā)上做了大量研究,基于不同的PRRSV蛋白建立了不同的ELSIA試劑。
1、以核衣殼蛋白(N蛋白)作為主要包被抗原的PRRSV抗體間接ELISA檢測試劑盒
http://bbs.shejis.com/viewthread.php?tid=1561373&fromuid=318622 |
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