不同pH條件下植酸酶的酶活

JH_C

請(qǐng)問(wèn)有哪位同仁做過(guò)或知道：同一來(lái)源（黑曲霉或大腸桿菌）的植酸酶在PH5.0與PH5.5所測(cè)得的酶活力差異有多大？

JH_C

各位做的標(biāo)準(zhǔn)空白和樣品空白的吸光值一般是多少?一般在什么范圍內(nèi)為正常？

柳粒橙

不是很清楚，期待高手。

baici0000

沒側(cè)過(guò)，關(guān)注中...

tgz5637

這問(wèn)題問(wèn)得有語(yǔ)??！應(yīng)該是在不同的緩沖鹽體系里，在pH5.0及pH5.5 條件下，的酶促活性差異多少？  差異大小根據(jù)pH--酶活性曲線而異。
   有興趣的話，可以配不同的緩沖鹽及模擬胃酸環(huán)境條件，測(cè)最適pH的差異, 應(yīng)該是不同。
   概念糾正：許多宣傳其植酸酶在PH2.5和5.5有兩個(gè)峰值。（在分離提純純酶的條件下測(cè)得的結(jié)果，與離體狀態(tài)下的產(chǎn)成品性狀不同。）  并沒有明確說(shuō)明是什么條件下測(cè)得的數(shù)據(jù)！受緩沖鹽離子類型和濃度影響，在不同的緩沖鹽體系下，最適pH點(diǎn)不同（發(fā)生左偏移或右偏移），測(cè)定值不同。故此最適pH只是酶的非特征性常數(shù)。在檸檬酸鹽緩沖鹽pH5.5條件下測(cè)定值低于乙酸鹽緩沖鹽pH5.5條件下測(cè)定值，也是這種因素影響造成。到了動(dòng)物胃腸道，又是有不同的最適點(diǎn)，所以不要太看重某pH點(diǎn)的大小，要結(jié)合 pH-穩(wěn)定性和pH--活性 兩條曲線看。
   按我檢測(cè)的產(chǎn)品成品，有的是確有兩個(gè)峰值，但有的已有所偏離2.5點(diǎn)、5.5，有的根本就只有一個(gè)峰值，宣傳資料里卻胡吹,估計(jì)那個(gè)編資料的瞎掰的，也是個(gè)姓南郭的。
  一些植酸酶有兩個(gè)pH峰值，應(yīng)該是有兩種類型催化結(jié)構(gòu)域。測(cè)過(guò)的幾個(gè)酸性pH峰值都低于PH5.5（弱酸）峰值。

[ 本帖最后由 tgz5637 于 2008-7-23 15:13 編輯 ]

cswjs

PH5.0標(biāo)準(zhǔn)下測(cè)的酶活如為5000，用PH5.5標(biāo)準(zhǔn)下測(cè)則在4000-4200這個(gè)范圍，所以市場(chǎng)上的同樣為5000酶活的植酸酶，各個(gè)廠家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)不一樣，質(zhì)量也不一樣，價(jià)格也不一樣。
      國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該是PH5.5 。
      呵呵，一家之言僅供參考！

[ 本帖最后由 cswjs 于 2008-7-23 16:26 編輯 ]

飛鴿

這個(gè)東西的酶活測(cè)定玄的很，以前我們送4個(gè)樣國(guó)外去檢測(cè)，我們國(guó)內(nèi)某牛B植酸酶居然測(cè)出來(lái)沒有酶活，后來(lái)幾經(jīng)查找，才發(fā)現(xiàn)檢測(cè)方法不一樣。本人一直覺得這個(gè)酶最玄，呵呵，有江蘇一公司用了植酸梅以后，不加氫鈣，長(zhǎng)勢(shì)良好。

JH_C

tgz老師，請(qǐng)?jiān)僦更c(diǎn)一下：
1、一般樣品空白的吸光值多少為正常，一些行內(nèi)同仁告知大于0.15則不可取，而我我做的往往有0.19以上，是否試劑或配制有問(wèn)題，另外，有時(shí)我做的樣品空白的OD比標(biāo)準(zhǔn)空白的還小，正常嗎？
2、用醋酸調(diào)節(jié)PH的緩沖體系是否比用鹽酸的更好，不知是否有差異。
3、在反應(yīng)過(guò)程中，如果取半量進(jìn)行，緩沖液0.9ml+反應(yīng)液0.1ml+底物2ml+終止液2ml，理論上應(yīng)該可行，但實(shí)際不知有否影響？
4、測(cè)得的吸光值在什么范圍為可取?

老板告我再做不好植酸酶的檢測(cè)，得讓我擦地板去了，嗚嗚嗚

tgz5637

第一個(gè)問(wèn)題我不懂。
第二個(gè)問(wèn)題，復(fù)習(xí)下化學(xué)，鹽酸氫氧化鈉強(qiáng)酸強(qiáng)堿沒有緩沖力。而緩沖液濃度不同，緩沖能力不同，增加緩沖濃度，影響檢測(cè)。
第三個(gè)問(wèn)題，減量檢測(cè)，時(shí)間也減半。還要驗(yàn)證線性靈敏度，沒必要節(jié)外生枝。做檢查耗費(fèi)時(shí)間的是試劑準(zhǔn)備階段。
第四個(gè)問(wèn)題，按分光光度計(jì)理論，在0.1～1范圍都是有效。