豬瘟疫苗研究進(jìn)展

和興

張競(jìng)乾，朱玉濤，孫丹丹，左玉柱
（河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河北保定071001)目前，豬瘟流行呈現(xiàn)典型豬瘟和非典型豬瘟共存、持續(xù)感染與隱性感染共存、免疫耐受和帶毒綜合征共存等。故許多國(guó)家在發(fā)展和改進(jìn)現(xiàn)有常規(guī)疫苗的同時(shí),紛紛探索利用生物技術(shù)研制和開發(fā)安全有效的新型基因工程疫苗及其配套的血清學(xué)鑒別診斷方法。
1傳統(tǒng)疫苗
傳統(tǒng)疫苗是指以傳統(tǒng)的常規(guī)方法，用病毒培養(yǎng)液或含毒組織制成的滅活疫苗或弱毒活疫苗。
1.1滅活疫苗
1908年匈牙利Hutyra Doves制成豬瘟高免血清后，人們采用高免血清-血毒同時(shí)肌注來免疫豬群。血毒注射雖可以產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)持久的保護(hù)力，但由于高免血清昂貴，獲取困難，加之有散毒危險(xiǎn)，因而各國(guó)學(xué)者轉(zhuǎn)向研究安全性可靠的滅活疫苗。建國(guó)初，我國(guó)何正禮、方時(shí)杰等選用抗原性優(yōu)良的石門系毒株研究改進(jìn)制成效果明顯的豬瘟結(jié)晶紫疫苗，對(duì)控制當(dāng)時(shí)豬瘟的流行曾經(jīng)起過一定的積極作用。70年代隨著免疫佐劑的開發(fā)利用和病毒培養(yǎng)技術(shù)的推動(dòng)，國(guó)外一些學(xué)者又相繼研制出較為理想的豬瘟滅活苗。雖滅活疫苗在早期防治豬瘟中功不可沒，但由于它接種量大，免疫期短、產(chǎn)生免疫力慢、不能引起局部免疫、成本高、只能皮下或肌注等，因此很快被HCV弱毒疫苗取而代之。
1.2弱毒疫苗
豬瘟弱毒疫苗株是由野毒株致弱而成。上世紀(jì)50年代我國(guó)開始對(duì)豬瘟病毒進(jìn)行兔體適應(yīng)的試驗(yàn)研究。1956年周泰沖、袁慶志等研制成功中國(guó)系(C系)豬瘟兔化弱毒疫苗。實(shí)踐證明該疫苗株具有產(chǎn)生免疫力快、免疫力堅(jiān)強(qiáng)、免疫譜寬、遺傳穩(wěn)定、無殘毒、毒力不返強(qiáng)及不引起胎兒畸變等優(yōu)點(diǎn)，因而被國(guó)際上公認(rèn)為是目前世界上比較理想的豬瘟疫苗。另外，日本的GPE株，法國(guó)的Thiverval株也是最常用的豬瘟弱毒疫苗，通常能提供終身保護(hù)，其它弱毒疫苗也有報(bào)道。   
2新型疫苗
隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，Meyers ( 1989德國(guó))與Moormann ( 1990荷蘭)先后發(fā)表了CSFV  Alfort株與Brescia株的基因組全序列，為在基因水平上對(duì)病毒進(jìn)行改造和開發(fā)提供了技術(shù)支持。
2.1重組疫苗
目前，豬瘟病毒重組疫苗所表達(dá)的多是以E2和E0結(jié)構(gòu)蛋白為對(duì)象進(jìn)行的重組構(gòu)建，所用的載體有痘苗病毒、偽狂犬病毒、桿狀病毒等。
以無致病力或低毒力的痘病毒(VAC)和偽狂犬病毒(PRV)為載體，將豬瘟病E2基因與之重組研制出的基因重組疫苗，免疫動(dòng)物后可對(duì)兩種病毒產(chǎn)生良好的保護(hù)力。Rumenapf等將編碼CSFV結(jié)構(gòu)蛋白的E2基因插入痘病毒的TK基因中，獲得了能表達(dá)該結(jié)構(gòu)蛋白的重組痘苗病毒，將這種重組病毒免疫豬，可使豬抵抗強(qiáng)毒攻擊。荷蘭學(xué)者van Zijl和Peetes等都報(bào)道了將E2基因重組到偽狂犬病毒中，免疫豬可以抵抗豬瘟和偽狂犬病毒的攻擊。我國(guó)四川農(nóng)大郭萬柱教授研制的偽狂犬/豬瘟活載體重組疫苗，也顯示出了良好的勢(shì)頭。
重組疫苗的安全性和實(shí)用價(jià)值目前還有爭(zhēng)議，因?yàn)槿祟愔两襁€不了解病毒自然發(fā)生變異的機(jī)制。一方面，對(duì)于VAC/HCV重組體來講，引起人們疑慮的是痘病毒會(huì)引起未種痘疫苗人群的感染，并使極少數(shù)感染者發(fā)??；另一方面，偽狂犬病是一種較為普遍的疾病，豬瘟-偽狂犬病毒重組疫苗對(duì)于已感染或已免疫的動(dòng)物不能產(chǎn)生保護(hù)力。
2.2亞單位疫苗
因其良好的安全性和穩(wěn)定性而備受研究者青睞。CSFV亞單位疫苗的研制是基于對(duì)CSFV保護(hù)性抗原的深入研究， CSFV編碼的E2和EO蛋白是其主要保護(hù)性抗原，均能獨(dú)立誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，保護(hù)機(jī)體免受強(qiáng)毒攻擊。荷蘭學(xué)者Hulst等將E2基因與桿狀病毒重組，并在昆蟲細(xì)胞Sf21中成功表達(dá)，免疫20微克表達(dá)的E2蛋白可以保護(hù)被免疫豬免受強(qiáng)毒的攻擊。De Smit研究了E2亞單位疫苗的保護(hù)期，發(fā)現(xiàn)E2亞單位疫苗一免后可提供6～13個(gè)月的保護(hù)力。Chen YH等研究表明，E2蛋白的A亞區(qū)為E2蛋白主要的保守區(qū)域，由A亞區(qū)制備的多肽疫苗可完全抵抗強(qiáng)毒的攻擊。到目前為止，許多研究者對(duì)E2基因亞單位疫苗進(jìn)行了效力試驗(yàn)，證明其對(duì)豬有良好的保護(hù)作用，但是不能有效防止豬瘟病毒的傳播。
2.3標(biāo)記疫苗
標(biāo)記疫苗是對(duì)豬瘟兔化弱毒進(jìn)行改造，使其缺失某一段基因(如E0)或某一段特殊片段(如E2)，但其免疫原性不改變。以缺失的基因所表達(dá)的蛋白作為診斷抗原，能夠區(qū)別疫苗接種豬和自然感染豬產(chǎn)生的抗體。
Widjojoatmodjo等構(gòu)建了CSFV感染性cDNA克隆，隨后用其構(gòu)建了CSFV Erns全部缺失或部分缺失的突變株F1c22和F1c23。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，F(xiàn)1c22和F1c23能在表達(dá)Erns的SK6細(xì)胞系中感染和復(fù)制，但不能形成感染性病毒，對(duì)接觸豬無感染性，不能引起病毒傳播。所以，這樣的疫苗是非常安全的。因?yàn)橥蛔冎甑幕蚪M編碼E2蛋白，但不編碼Erns蛋白，故這些病毒可以作為抗CSFV的標(biāo)記疫苗。Van Gennip等又將E2基因全部(F1c47)或部分(Flc4, F1c48)缺失，構(gòu)建出三個(gè)突變株，這些病毒均可以在表達(dá)E2的細(xì)胞系中復(fù)制。其中，F(xiàn)lc4免疫豬能抵抗致死劑量的強(qiáng)毒攻擊，在免疫豬體內(nèi)同樣不產(chǎn)生感染性病毒，其它兩個(gè)突變株可提供部分保護(hù)。這些基因缺失病毒都有望作為抗CSFV疫苗。Mayer等構(gòu)建了基于CSFV Alfort/187(中等毒力株)和Eystrup株(強(qiáng)毒株)的Npro基因缺失病毒，Npro基因缺失后毒力減弱。用這兩種突變毒株免疫豬后，可產(chǎn)生很強(qiáng)的抗體應(yīng)答，并可抵抗致死劑量的強(qiáng)毒株攻擊，說明Npro基因缺失突變株是很好的基因修飾活病毒候選疫苗。
2.4核酸疫苗
DNA疫苗技術(shù)是近年發(fā)展起來的一種新的疫苗研制技術(shù)，它將連接有豬瘟病毒主要保護(hù)性抗原E2基因的表達(dá)載體直接免疫動(dòng)物，使病毒核酸在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)進(jìn)行表達(dá)，從而刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)。解放軍軍需大學(xué)余興龍等已用豬瘟DNA疫苗成功保護(hù)了豬對(duì)豬瘟強(qiáng)毒的攻擊，他們構(gòu)建了4種包含E2全基因序列的真核表達(dá)質(zhì)粒，其中用pCDSW質(zhì)粒(含有5'信號(hào)序列)給小鼠肌肉注射后可誘導(dǎo)小鼠抗CSFV的體液免疫。Hammmond等用表達(dá)CSFV E2基因的裸露質(zhì)粒DNA免疫6周齡斷奶仔豬和7日齡提前斷奶乳豬，再將這2組豬群均用表達(dá)E2基因的腺病毒重組體(rPA V-gp55)加強(qiáng)免疫一次，用CSFV攻毒后，100%的仔豬和75%的乳豬獲得保護(hù)。A ndrew等也證明用編碼CSFV E2基因的質(zhì)粒免疫豬后可獲得保護(hù)。Markow ska- Daniel等報(bào)道CSFV DNA疫苗免疫豬完全保護(hù)強(qiáng)毒攻擊，但攻毒后有2 天體溫高達(dá)40℃以上，同時(shí)T ,B淋巴細(xì)胞活性輕微增強(qiáng)。
3結(jié)語(yǔ)
     無論是過去還是現(xiàn)在，豬瘟疫苗對(duì)豬瘟的預(yù)防、控制及凈化起到了不可替代的作用。就疫苗的發(fā)展方向來說，滅活苗的使用已經(jīng)成為歷史，弱毒苗雖然仍在使用，但如果要消滅豬瘟，弱毒苗應(yīng)該禁止使用；重組疫苗雖然已經(jīng)取得了很多成功，但要達(dá)到臨床應(yīng)用還有很多工作要做；亞單位標(biāo)記疫苗因能區(qū)分疫苗接種豬和野毒感染豬有強(qiáng)大的優(yōu)勢(shì)，如在臨床上推廣和應(yīng)用可以對(duì)最終消滅豬瘟助一臂之力，但必須有與之相配套的鑒別診斷方法才能顯示其威力，在臨床上使用和推廣。CSFV核酸疫苗雖剛剛起步，但具有很大的開發(fā)潛力和應(yīng)用前景。