不同配方稀釋粉對公豬鮮精保存的效果分析

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不同配方稀釋粉對公豬鮮精保存的效果分析

孫德林 呂小燕

（北京浩邦豬人工授精服務(wù)有限責(zé)任公司 101300 ）

摘 要:精液稀釋液成本占人工受精整體成本費(fèi)用很大的比例，因此研究出經(jīng)濟(jì)高效的稀釋液對降低人工受精成本有重要意義。本文通過成對比較實(shí)驗(yàn)，用 5 種不同配方稀釋粉按照國內(nèi) AI 標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)對種公豬的合格鮮精進(jìn)行稀釋保存，觀察不同配方稀釋粉對公豬鮮精保存時間長短、精子活力、精子畸形率的影響。結(jié)果表明：配方 hotboar ++ 對公豬精液的保存效果最為顯著，而且其通用性及成本也顯著低于現(xiàn)有商品化稀釋粉。關(guān)鍵詞：豬 人工受精 稀釋液 保存時間 活力 畸形率 通用性

前 言

    隨著我國養(yǎng)豬業(yè)的不斷發(fā)展和種豬聯(lián)合育種工作的需要，豬人工受精的迅速普及，同時不同規(guī)模的豬人工受精站已成為我國養(yǎng)豬行業(yè)的一重要組成部分。人工受精站為了能夠充分利用優(yōu)秀種公豬，發(fā)揮其種豬優(yōu)勢，達(dá)到真正意義上的資源共享，因此精液保存時間、精液保存效果是人工受精的應(yīng)用成敗的關(guān)鍵因素，開發(fā)出保存時間長、保存效果良好、成本顯著低于現(xiàn)有商品化的精液稀釋液的稀釋液，對人工受精技術(shù)而言有重要的經(jīng)濟(jì)效益。
1. 實(shí)驗(yàn)材料與方法     通過第一輪稀釋粉配方的收集、調(diào)整，我們從 20 種配方實(shí)驗(yàn)中篩選出四種配方，分別是 BTS 、配方 hotboar ++ （ BTS 改進(jìn)配方）、配方 4 號、配方 5 號，我們重新對此四種稀釋粉配方與法國卡蘇 BTS +2 稀釋粉做對照跟蹤實(shí)驗(yàn)，其原理是利用浩邦優(yōu)秀種公豬新鮮精液采用國內(nèi) AI 標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)行精液的稀釋保存 , 通過實(shí)驗(yàn)對不同配方稀釋液保存效果進(jìn)行一一比較，選擇最佳稀釋粉效果配方。
1.1 實(shí)驗(yàn)動物    種公豬精液來自北京浩邦豬人工受精服務(wù)中心公豬站的 20 頭公豬，其中， 6 個長白， 11 個大白， 3 個杜洛克。公豬按常規(guī)飼養(yǎng)方法進(jìn)行飼養(yǎng)管理，生長發(fā)育正常。本實(shí)驗(yàn)除 1 頭丹系長白（耳號 179101 ）重復(fù)一次外，其它公豬均采鮮精一次。
1.2 試劑及主要儀器1.2.1 試劑
    實(shí)驗(yàn)的五種配方均按配方準(zhǔn)備所有化學(xué)藥品和生化制劑。嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)配方中實(shí)驗(yàn)藥品
* 項(xiàng)目資助：北京市科委“首都 248 工程項(xiàng)目”，首席專家：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)王楚端教授     質(zhì)量、生產(chǎn)日期、廠家、藥品級別，稀釋粉的配制通過精密天平稱量每一種化學(xué)試劑需求量，配好后的稀釋粉充分溶解穩(wěn)定、過濾、消毒后進(jìn)行 PH 值、滲透壓等的測定，并進(jìn)一步加熱，使用前加入抗生素（慶大霉素 350mg ）以備用。嚴(yán)格按照公豬新鮮精液稀釋保存的 GTC 實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行精液的稀釋保存。
1.2.2 主要儀器
     常規(guī)儀器、桑翌科技公司提供的 PH6 測定儀、法國卡蘇公司提供的精密精子密度測定儀
1.3 、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
     按正常采精方法，采集 1 個公豬精液，通過 GTC 實(shí)驗(yàn)室檢測精液不論從顏色、氣味、精子活力、精子畸形率等均達(dá)到鮮精合格標(biāo)準(zhǔn)，立即抽取 6 個樣，抽取辦法是根據(jù)每頭份精液中含有 30 億有效精子， 80 毫升 / 頭份，計(jì)算抽取合格原精液劑量，嚴(yán)格控制不同實(shí)驗(yàn)稀釋液溫度，使其稀釋液的溫度和精液的溫度完全吻合，然后緩慢將不同的稀釋液加入到所抽樣品中，加至 80 毫升，整個稀釋過程要在 15 分鐘內(nèi)完成，精液稀釋完成后并標(biāo)記，密封，待 1-2 小時精液溫度緩慢降止 20-23 ℃ 時，用毛巾裹上一同放入恒溫箱內(nèi)，每 12 小時輕輕搖勻精液并檢測精子活力、精子畸形率等指標(biāo)，直至精子活力下降到 0.6 以下時停止檢測，記錄保存時間，精子活力、精子畸形率。以上步驟重復(fù) 20 次。
1.4 測定記錄指標(biāo)
     精液的顏色、氣味：通過觀察及人的嗅覺來主觀判斷
    精子活力：按照精液中做直線前進(jìn)運(yùn)動的精子占總精子的百分率。檢測精子活力，檢測精液時精液必須預(yù)熱到 37 ℃， 在 100 倍顯微鏡下觀察，鮮精活力要求不低于 70 ，保存后精子活力不得低于 60
    精子畸形率：精子畸形評定是通過肉眼 600 倍鏡下觀察 200 個精子中畸形精子所占比例
    PH 值測定：通過桑翌科技公司提供的 PH6 測定儀測定
    精子密度：精子密度是通過法國卡蘇公司提供的精密精子密度測定儀測定
1.5 實(shí)驗(yàn)稀釋液配方（略）及成本費(fèi)用

表 1 4 種配方稀釋粉及對照稀釋粉

實(shí)驗(yàn)配方   BTS   hotboar++ 4 5 卡蘇 BTS+2
成本 2.88 元 3.81 元 4.16 元 4.48 元 20.00 元
2. 統(tǒng)計(jì)分析      利用 MICROSOFT EXCELR 軟件的 TTEST 對不同稀釋液處理的精液的保存時間、保存時間臨界點(diǎn)精子活力、精子畸形率進(jìn)行成對比較 , 本文對不同稀釋液的精液保存時間、保存過程中精子活力、精子畸形率進(jìn)行分析 .
2.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
2.1.1 不同稀釋液的精液保存時間
由表 2 我們可以得到所有實(shí)驗(yàn)稀釋液對精液的總體平均保存時間 4.00 天。

表 2 不同公豬精液應(yīng)用不同稀釋液的精液保存時間 （ 天 ）

公豬號	稀釋液
	BTS	BTS4	5 號	4 號	卡蘇 BTS +2
1	3.0	5.0	2.0	3.5	4.0
2	3.5	6.5	3.0	4.5	6.5
3	3.5	6.0	3.0	4.5	6.5
4	2.0	2.5	1.5	2.5	2.0
5	4.5	5.0	3.0	4.0	5.5
6	4.0	6.5	3.5	4.5	6.5
7	2.5	4.5	2.5	3.5	4.5
8	4.5	6.5	4.0	5.0	6.5
9	3.5	5.5	3.5	4.5	6.0
10	3.0	4.0	3.0	3.5	3.0
11	3.5	5.0	4.5	5.0	4.5
12	2.0	3.0	2.5	2.0	3.5
13	3.0	4.5	3.0	5.0	4.0
14	5.5	6.5	5.0	4.5	6.0
15	5.5	6.0	4.5	5.0	5.5
16	4.0	5.0	3.5	4.0	4.5
17	4.5	6.5	5.0	4.5	6.5
18	2.0	2.5	2.0	3.0	2.5
19	2.5	3.0	1.5	2.0	2.5
20	2.5	4.0	3.5	5.0	5.0
平均	3.45	4.9	3.2	4.0	4.775

    不同配方稀釋液對鮮精保存時間及比較結(jié)果見表 3 ，本實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用 BTS 、 hotboar++ 、 4 號、 5 號、卡蘇稀釋粉 BTS+2 稀釋液配方的精液平均保存時間分別為： 3.45 ± 1.075 天， 4.9 ± 1.382 天、 4.0 ± 1.044 天， 3.2 ± 0.987 天， 4.775 ± 1.509 天，其中 BTS4 保存時間最長平均為 4.9 天，其次卡蘇 BTS+2 。

表 3 不同稀釋液對鮮精保存時間及比較結(jié)果

項(xiàng)目	稀釋液
	BTS	hotboar++	5 號	4 號	卡蘇 BTS+2
樣本數(shù)（ N ）	20	20	20	20	20
均平保存時間（小時）	3.45	4.90	4.0	3.2	4.775
標(biāo)準(zhǔn)誤	1.075	1.382	1.044	0.987	1.0509
T 檢驗(yàn)概率值 ***	0.000 *	0.000	0.040	0.047
	0.517 **	0.210	0.000
	0.156 ***	0.746
	0.001

     注： *表示 BTS配方稀釋液與 hotboar++配方稀釋液對種公豬精液平均保存時間的 T檢驗(yàn)概率值； **表示 BTS配方稀釋液與 5號配方稀釋液對種公豬精液平均保存時間的 T檢驗(yàn)概率值；其它依次類推； T檢驗(yàn)概率值 >0.05時，兩者差異不顯著； <0.05時，兩者差異顯著； <0.01時，兩者差異極顯著。    成對 T 檢驗(yàn)結(jié)果表明， hotboar++ 配方組稀釋液 與法國卡蘇 BTS +2 配方組稀釋液對種公豬精液的保存時間差異不顯著，但 hotboar++ 配方組稀釋液 與法國卡蘇 BTS +2 配方組稀釋液對精液的保存時間極顯著高于 BTS 配方組稀釋液 ， 5 號配方組稀釋液； hotboar++ 配方組稀釋液 與 4號配方組 稀釋液 相比較差異不顯著，法國卡蘇 BTS +2 配方組稀釋液顯著高于 4 號配方組稀釋液。 4 號配方組稀釋液與 BTS 配方組稀釋液差異不顯著，但顯著高于 5 號配方組稀釋液； BTS 配方組稀釋液與 5 號配方組稀釋液之間差異不顯著。
2.1.2 不同稀釋液的精液保存時間的相關(guān)性    表 4 列出不同稀釋液保存精液的相關(guān)性。不同稀釋液對精液保存時間的 相關(guān)性可反映稀釋液與精液之間的互作效應(yīng)。相關(guān)性高，表示稀釋液與精液之間的互作效應(yīng)小，該稀釋液的通用性就強(qiáng)；相反，該稀釋液的通用性就差，意味著不同鮮精的最佳稀釋液不同，因此，有待于研究出多種能夠適應(yīng)不同品種甚至不同個體的精液保存稀釋液，這樣，變大大增加了人工受精生產(chǎn)管理的復(fù)雜程度。
    本實(shí)驗(yàn)中，由表 4 BTS配方組稀釋液的精液保存時間與 hotboar+2配方組稀釋液 、 5 號 配方組稀釋液 、 4 號 配方組稀釋液 及卡蘇 BTS+2 配方組 稀釋液的皮爾遜相關(guān)系數(shù)分別為 -1.450 、 0.25 、 -0.55 、 -1.325 ； hotboar+2 配方組 稀釋液與 5 號 配方組 稀釋液、 4 號 配方組 稀釋液及卡蘇 BTS+2配方組 稀釋液的皮爾遜相關(guān)系數(shù)分別為 1.700 、 0.99 、 1.25 ； 5 號 配方組 稀釋液與 4 號 配方組 稀釋液及卡蘇 BTS+2 配方組 稀釋液的皮爾遜相關(guān)系數(shù)分別為 -0.800 、 -1.75 ； 4 號 配方組 稀釋液及卡蘇 BTS+2 配方組 稀釋液稀釋液的皮爾遜相關(guān)系數(shù)為 -0.775
    如果用一種稀釋液與其它 5 種 配方 稀釋液相關(guān)系數(shù)的平均值來表示本實(shí)驗(yàn)中 5 種配方稀釋液的通用性，其相關(guān)系數(shù)平均值越高說明配方稀釋液的通用性越高， BTS 配方組 稀釋液、 hotboar+2 配方組 稀釋液、 5 號 配方組 稀釋液、 4 號 配方組 稀釋液及卡蘇 BTS+2 配方組 稀釋液的相對通用性分別為 -0.615 、 0.835 、 -1.1875 、 -0.065 、 0.710
表 4 列出不同稀釋液保存精液的相關(guān)性

項(xiàng)目	稀釋液
	BTS	hotboar++	5 號	4 號	卡蘇 BTS+2
配方間相關(guān)系數(shù) **	-1.450 *	1.700	-0.800	-0.775
	0.25 **	0.99	-1.575
	-0.55-	1.25
	1.325
通用性	-0.615 ***	0.835	-1.1875	-0.065	0.710

    注： * 表示 BTS
配方組 稀釋液與 hotboar++ 配方組 稀釋液 對精液保存時間的皮爾遜相關(guān)系數(shù)； ** 表示 BTS
配方組 稀釋液與 5 號配方 組 稀釋液 對精液保存時間的皮爾遜相關(guān)系數(shù)；依次類推。 *** 表示 BTS
配方組 稀釋液與其它 5 種 配方組 稀釋液 對精液保存時間的皮爾遜相關(guān)系數(shù)平均值；依次類推。
     由列表 4 我們可以得到 hotboar++配方組 稀釋液通用性最好。2.2 不同稀釋液對保存精液中精子畸形率比較結(jié)果    不同稀釋液對保存精液中精子活力的影響結(jié)果比較見表 5 ，本實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用 BTS 配方組 稀釋液 、 hotboar++ 配方組 稀釋液 、 4 號 配方組 稀釋液 、 5 號 配方組 稀釋液 、卡蘇稀釋粉 BTS+2 配方組 稀釋液在保存精液期間精液中精子活力的平均水平分別為： 68 ± 4.70 、 72 ± 5.50 、 67.75 ± 3.80 、 69.75 ± 4.22 、 72.25 ± 5.73 ，其中卡蘇稀釋粉 BTS +2 維護(hù)精子活力能力較強(qiáng)、其次 hotboar++ 配方組 稀釋液。
    成對 T 檢驗(yàn)結(jié)果表明， hotboar++ 配方組 稀釋液 與卡蘇 BTS+2 配方組 稀釋液對保存精液中精子活力的影響相比較差異不顯著，但 hotboar++ 配方組 稀釋液 與卡蘇 BTS+2 配方 組 稀釋液對保存精液中精子活力的影響顯著高于 BTS 配方 組 稀釋液 、 5 號配方 組 稀釋液，但與 4 號配方 組 稀釋液相比較差異不顯著；稀釋粉 BTS 配方組 稀釋液 、 5號配方組 稀釋液 及 4號配方組 稀釋液對保存精液中精子活力的影響 相比較差異不顯著.

表 5 不同稀釋液對保存精液中精子活力影響比較結(jié)果

項(xiàng)目	稀釋液
	BTS	hotboar++	5 號	4 號	卡蘇 BTS+2
樣本數(shù)（ N ）	20	20	20	20	20
保存 3 天精子活力均值	68	72	67.75	69.75	72.25
標(biāo)準(zhǔn)誤	4.70	5.50	3.80	4.22	5.73
T 檢驗(yàn)概率值 ***	* 0.005	0.003	0.203	0.113
	** 0.873	0.081	0.005
	0.265	0.873
	0.008

    注： * 表示 BTS 配方組稀釋液與 hotboar ++配方組稀釋液 對保存精液中精子活力影響的 T 檢驗(yàn)概率值； **表示 BTS 配方組稀釋液與 5 號配方組稀釋液 對保存精液中精子活力影響的 T 檢驗(yàn)概率值 ；依次類推。 T 檢驗(yàn)概率值 >0.05時，兩者差異不顯著； <0.05時，兩者差異顯著； <0.01時，兩者差異極顯著。
2.3 不同稀釋液對保存精液中精子畸形率的影響結(jié)果比較    不同稀釋液對保存精液中精子畸形率的影響結(jié)果比較見表 6 ，本實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用 BTS配方組稀釋液 、 hotboar ++配方組稀釋液 、 4 號配方組稀釋液、 5 號配方組稀釋液及卡蘇 BTS+2配方組稀釋液 對保存精液中精子畸形率的平均水平分別為： 10.75 ± 5.68 、 7.25 ± 6.58 、 11.00 ± 5.98 、 10.25 ± 5.50 、 8.75 ± 5.82 ，其中 hotboar++配方組稀釋液 對保存精液中精子畸形影響最小、其次卡蘇 BTS+2配方組稀釋液 。
    成對 T 檢驗(yàn)結(jié)果表明， BTS配方組稀釋液 、 hotboar++配方組稀釋液 、 4 號配方組稀釋液、 5 號配方組稀釋液 與卡蘇 BTS +2 配方組稀釋液對保存精液中精子畸形率的影響相比較差異不顯著 。

表 6 不同稀釋液對保存精液中精子畸形率影響比較結(jié)果

項(xiàng)目	稀釋液
	BTS	hotboar++	5 號	4 號	卡蘇 BTS+2
樣本數(shù)（ N ）	20	20	20	20	20
保存 3 天精子畸形率均值	10.75	7.25	11.00	10.25	8.75
標(biāo)準(zhǔn)誤	5.68	6.58	5.98	5.50	5.82
T 檢驗(yàn)概率值 ***	* 3.50	-3.75	.75	-1.50
	** -.25	-3.00	2.25
	.50	-1.50
	2.00

注： * 表示 BTS 配方組稀釋液與 hotboar++配方組稀釋液 對保存精液中精子畸形率影響 T 檢驗(yàn)概率值； **表示 BTS 配方組稀釋液與 5 號配方組稀釋液 對保存精液中精子畸形率影響的 T 檢驗(yàn)概率值 ，依次類推。 T 檢驗(yàn)概率值 >0.05時，兩者差異不顯著； <0.05時，兩者差異顯著； <0.01時，兩者差異極顯著。
3. 討論與結(jié)論     人工受精成本中稀釋粉成本占整個成本的很大比例，因此，研究開發(fā)出經(jīng)濟(jì)高效的稀釋液對降低人工受精成本具有重要的意義。本研究對當(dāng)前國際上應(yīng)用較多的稀釋液、及相對改進(jìn)的稀釋液配方進(jìn)行成對的比較，其中卡蘇 BTS+2 的稀釋液是使用卡蘇 BTS+2 稀釋粉配置而成的，其它四種稀釋液是按照原來配方及改進(jìn)的配方自行購買原料，嚴(yán)格按照配方每種試劑級別要求，精確稱取每種試劑配置成稀釋粉，然后根據(jù)需要配置成相應(yīng)的稀釋液，其成本顯著比卡蘇 BTS+2 稀釋粉的低。研究結(jié)果表明， hotboar++ 配方稀釋粉對精液的平均保存時間最長，平均保存時間為（ 4.90 ± 1.382 ），與現(xiàn)市場上購買的中長效卡蘇 BTS+2 的稀釋粉在保存時間上差異不顯著，但顯著好與其他實(shí)驗(yàn)的配方稀釋粉， hotboar++ 配方稀釋粉通用性最高，其次卡蘇 BTS+2 的稀釋粉；本次實(shí)驗(yàn)中五種配方稀釋粉中 hotboar++ 配方稀釋粉與卡蘇 BTS+2 的稀釋粉對精液中精子活力的影響差異不顯著，但顯著好與其他三種配方；在精液保存的整個過程中五種配方稀釋粉對精液中精子畸形率的影響差異不顯著。
    由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們將 hotboar+2 配方稀釋粉列為中長效稀釋粉，再進(jìn)一步改進(jìn)生產(chǎn)工藝，生產(chǎn)成品 hotboar++ 配方稀釋粉，這樣將會給整個人工受精成本大大減荷。
項(xiàng)目來源 : 北京市 248 項(xiàng)目

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這款稀釋粉現(xiàn)在可有售？