多維預(yù)混合飼料中維生素E的測(cè)定

hdx20082008

測(cè)定多維預(yù)混合飼料中的維生素E有多種的方法。最常用的方法一般會(huì)使用將樣品進(jìn)行皂化，然后用溶劑進(jìn)行萃取，揮發(fā)溶劑后再進(jìn)行稀釋，配制到一定的濃度，再進(jìn)行HPLC的分析?！　∥覀兿葋?lái)討論一下皂化的作用。皂化是一種化學(xué)反應(yīng)，是酯類化合物和強(qiáng)堿反應(yīng)，生成醇和酸的反應(yīng)，生成的酸再和強(qiáng)堿反應(yīng)生成鹽和水。在飼料的分析中不是利用反應(yīng)的生成物，而是有以下的作用：
　　對(duì)于用明膠包膜的維生素組分，可以打開明膠包膜，使內(nèi)容物溶出。
　　對(duì)于脂溶性維生素，通過(guò)萃取可以去除一部分雜質(zhì)。
　　可以在分析低含量脂溶性維生素樣品時(shí)，濃縮組分。
　　從上面的論述中我們可以了解到，皂化反應(yīng)在分析維生素E組分時(shí)，可以起去除一部分雜質(zhì)，在分析低含量樣品時(shí)可以起到濃縮組分的作用。在進(jìn)行皂化反應(yīng)和萃取的過(guò)程中，操作的難度較高，影響準(zhǔn)確度的因素很多，如果操作者不熟練的話，則會(huì)得到偏低的結(jié)果，甚至測(cè)不出維生素E來(lái)。因?yàn)榫S生素E醋酸酯經(jīng)皂化后會(huì)變成生育酚，而酚羥基從理論上說(shuō)是帶有酸性的，極易破壞。所以化驗(yàn)員要進(jìn)行反復(fù)的練習(xí)后，并經(jīng)過(guò)回收率的測(cè)試后，才能進(jìn)行樣品的分析操作。對(duì)于多維預(yù)混合飼料中的維生素E，一般來(lái)說(shuō)含量比較高，雜質(zhì)的干擾也可以忽略。因此，下面推薦一種直接萃取的方法來(lái)進(jìn)行分析，操作簡(jiǎn)單準(zhǔn)確度很高;
　　多維預(yù)混料中維生素E醋酸酯的測(cè)定
　　試驗(yàn)方法
　　除特別注明外，試驗(yàn)中所用試劑均為分析純，水為相應(yīng)純度的水，溶液為水溶液，試驗(yàn)儀器為一般實(shí)驗(yàn)室設(shè)備。
　　試劑和溶液：
　　甲醇（HPLC級(jí)）
　　甲醇
　　維生素E醋酸酯對(duì)照品
　　標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：
　　稱取維生素E醋酸酯對(duì)照品約100mg （準(zhǔn)確到0.0001g）, 置于100mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻后再精密吸取10.00mL 置于另一100mL 棕色容量瓶中，用甲醇定容。濃度約為100μg/mL。
　　維生素預(yù)混料樣品溶液的制備：
　　稱取預(yù)混料約1g (精確到0.0001g)于100mL的容量瓶中，加入甲醇約70mL，置于50℃超聲波水浴中處理20 min，冷至室溫后用甲醇定容，充分搖勻。再取部分溶液用甲醇進(jìn)行稀釋，最終濃度約在50 ~ 120μg/mL，取部分溶液離心，上層清液通過(guò)0.45 μm濾膜過(guò)濾后，用于HPLC測(cè)定。
　　進(jìn)樣：
　　將標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液各50μL依次注入儀器進(jìn)行分析。（進(jìn)樣量可以根據(jù)不同的儀器自行調(diào)整）
　　色譜條件
　　色譜柱：Lichrospher 100 RP-8, C8, 5μm, 250mm × 4.0mm

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流動(dòng)相： 甲醇 （HPLC級(jí)）

　　流速： 1.0 mL/min

　　進(jìn)樣量： 50 μL

　　檢測(cè)波長(zhǎng)： 285nm

　　運(yùn)行時(shí)間： 約7min

　　分析結(jié)果的計(jì)算：

　　樣品中所含維生素E(mg/g)的效價(jià)可依照下式計(jì)算：

　　Cst × Wst × As × ns

　　維生素E =__________________________

　　W × Ast ×nst

　　式中：Cst — 維生素E對(duì)照品的含量，%；

　　Wst — 維生素E對(duì)照品的質(zhì)量，m g；

　　Ast — 維生素E對(duì)照品的峰面積；

　　As — 樣品溶液的維生素E峰面積；

　　nst — 維生素E標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋倍數(shù)；

　　ns — 樣品溶液的稀釋倍數(shù)；

　　W — 樣品的質(zhì)量，g。

　　注：如果樣品中雜質(zhì)太多，在高效液相色譜中與維生素E分離不完全，則應(yīng)采用皂化的分析方法進(jìn)行分析。

　　使用直接萃取的本方法進(jìn)行多維預(yù)混料中維生素E醋酸酯的分析，其回收率可以高達(dá)95％以上，準(zhǔn)確度非常的高。