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發(fā)表于 2009-6-29 18:00:36 | 只看該作者回帖獎勵

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作者:強莉姚軍虎吳孝兵習海波呂金印
★ 國家自然科學基金項目（39970550）資助。
摘要利用一次注射法測定了日糧粗蛋白質(zhì)分別為16%、18%及20%時肉雞內(nèi)源氨基酸損失量。結果表明，不同蛋白質(zhì)水平下各種氨基酸內(nèi)源損失量差異不顯著（P>0.05），但適中的粗蛋白質(zhì)水平（18%）有降低內(nèi)源氨基酸損失量的趨勢。
關鍵詞內(nèi)源氨基酸損失量蛋白質(zhì)水平一次注射法肉雞
越來越多的研究表明，以真可消化氨基酸（TDAA）配制日糧的效果更接近于生長試驗測定值（NRC，1994）。內(nèi)源氨基酸損失量（Endogenous Amino Acid Loss，EAAL）是研究飼料AA真利用率的基礎數(shù)據(jù)，準確測定EAAL是以真可消化AA配合日糧的前提。姚軍虎等（1998）提出的靜脈/皮下一次注射小劑量[3H]Leu檢測EAAL的方法（簡稱為一次注射法）相對于傳統(tǒng)的絕食法（FAS）、無氮日糧法（NFD）等更能反映實際生產(chǎn)情況，且可以彌補靜脈連續(xù)灌注法難以選擇真正的前體池，測定干擾因素多等不足。經(jīng)多次試驗證實（姚軍虎等，1998，2000；孟德連等，2001），此法具有較強的可行性和可靠性。本試驗擬采用一次注射法測定比較不同粗蛋白水平時肉雞內(nèi)源氨基酸損失量。
1 材料與方法
1.1 試驗日糧
設計3個蛋白質(zhì)水平的日糧CP16、CP18及CP20，另設無氮日糧（NFD），4種試驗日糧組成見表1。

1.2 試雞及飼養(yǎng)
20只體重接近（2.0kg）的艾維茵肉仔公雞隨機等分為4組，肛門外縫制空心塑料瓶蓋以安裝集糞袋。單籠喂養(yǎng)，自由采食相應的飼糧2d后絕食36h，按每千克體重25gDM標準(NFD20g)進行預強飼。再絕食48h，之后正式強飼相應飼糧。絕食期間試雞自由飲水。
1.3 [3H]Leu的引入、采血與排泄物的收集及處理
正式強飼后，立即給雞皮下注射30?滋Ci/kg體重L-[4，5-3H]Leu（中科院原子能所，放射性化學純度>95%）。于注射后第24h采集翅靜脈血液2.0ml，注入經(jīng)肝素鈉抗凝處理的離心管內(nèi)。全血經(jīng)3 000r/min離心10min，分離血漿，棄沉淀，血漿按1∶1（V/V）比例加入10%三氯乙酸（TCA），離心10min，棄沉淀得到去蛋白血漿樣品，低溫（-20℃）密封保存。
收集每只雞正式強飼后48h內(nèi)的全部排泄物（收集次數(shù)視實際排糞量而定）。加入3%（V/W）濃度為10%的H2SO4和適量甲醛（防止NH3揮發(fā)損失，終止微生物分解作用）。試驗結束后置排泄物于65~70℃的恒溫烘箱內(nèi)干燥至恒重，密封保存。
用常規(guī)直接酸解法（6N HCl）于Beckman 121MB氨基酸自動分析儀測定各飼糧、排泄物樣品及血漿樣品的AA含量。用FJ-2101G雙道液體閃爍計數(shù)器測定排泄物及血漿樣品放射性強度。用半微量凱氏定氮法測飼糧及排泄物中的CP含量。
1.4 數(shù)據(jù)處理
根據(jù)一次注射法基本原理(姚軍虎，1998)有：

式中：Wei——飼喂試驗飼糧i時排泄物中內(nèi)源Leu (mg/kg DMI)；
Wti——飼喂試驗飼糧i時排泄物中總Leu(mg/kg DMI)；
SRti——Wti的比放射性強度（即，排泄物總放射性強度與總Leu含量之比）；
SRpi——飼喂試驗飼糧i時血漿游離Leu比放射性強度（即，血漿放射性強度與Leu含量之比）；
SRpo——飼喂NFD時血漿游離Leu比放射性強度；
SReo——飼喂NFD時排泄物（內(nèi)源）Leu比射性強度。
公式中Wti、SRti、SRpi、SRpo、SReo均可由試驗直接或間接測得，故Wei可求。眾多試驗證實，內(nèi)源AA的組成相對穩(wěn)定，故可由計算出的內(nèi)源Leu損失量及內(nèi)源AA模式（NFD模式）估算其它AA的內(nèi)源損失量。
飼料氨基酸i表觀及真利用率按下面公式計算：

利用SPSS軟件對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。
2 試驗結果
2.1 不同飼糧時AA總排泄量和內(nèi)源損失量
隨日糧蛋白質(zhì)含量的升高，除Tyr及NEAA外，糞便中各AA及總AA排泄量也增多（表2）。

糞便中內(nèi)源氨基酸損失量（表3）在各組間無顯著差異（P>0.05）。CP16組與CP20組內(nèi)源損失量較高且十分接近，CP18組的各內(nèi)源AA損失量、必需氨基酸總量、非必需氨基酸總量及總內(nèi)源氨基酸損失量均較其它兩組有降低趨勢。

2.2 不同飼糧時AA表觀及真消化率
絕大多數(shù)AA表觀消化率在CP18時最高（表4），一次注射法校正所得AA真消化率除Met+Cys外均在可接受范圍內(nèi)，并且有隨CP水平升高而降低的趨勢（表5）。

3 討論
內(nèi)源AA排泄受多種內(nèi)外因素的影響。飼料蛋白質(zhì)（或AA）含量及平衡性對EAAL的影響，據(jù)已有的研究結果證明并不一致。Butts等（1993）認為，蛋白質(zhì)和肽均可刺激內(nèi)源氮分泌。隨飼糧CP水平增加，分泌進入腸腔的內(nèi)源氮增加（Bergner等，1994；Krawuelitzki等，1994）。Krawuelitizki等(1977)的15N稀釋法表明，大鼠糞中內(nèi)源蛋白損失量（EPL）隨日采食蛋白質(zhì)數(shù)量的增加而增加。姚軍虎（1998）以肉仔雞為試驗動物，比較了蛋白質(zhì)梯度回歸法（CPO）、NFD法（CP0.80%）、平均值法（CP3.37%）和一次注射法（CP20.0%）測得的內(nèi)源CP、AA損失量，發(fā)現(xiàn)內(nèi)源總CP和總AA損失量隨日糧CP水平升高而增加，除His、Ala、Met、Leu外,其他AA內(nèi)源損失量也有相似變化。飼料蛋白質(zhì)增加內(nèi)源氮排泄的可能原因是，刺激內(nèi)源氮分泌量或減少內(nèi)源物的消化與重吸收（Nyachoti等，1997）。但也有飼料蛋白質(zhì)不影響內(nèi)源蛋白或AA損失量的報道。Fan等（1995）按CP區(qū)間進行分段回歸，表明日糧蛋白質(zhì)、粗纖維及ANFs含量不變時，日糧CP水平不影響EAAL。他綜合分析后認為，隨CP攝入量的增加，內(nèi)源氮分泌量及小腸重吸收量都增加，因此EAAL未必隨著AA攝入量的增加而升高。姚軍虎（1998）試驗證明，一定范圍內(nèi)（CP≤5%），CP水平對EAAL的影響不大，說明家禽有一相對穩(wěn)定的基本內(nèi)源AA損失量。Boisen等(1996)認為，飼料中非蛋白質(zhì)組分是EPL的主要影響因素，日糧CP與回腸EPL間似乎沒有直接關系。
在本試驗研究的3個蛋白質(zhì)水平上，內(nèi)源氨基酸損失量（表3）無顯著差異（P>0.05）。但CP18組EAAL在數(shù)值上低于CP16和CP20組，產(chǎn)生這種趨勢的原因可能在于3種日糧AA的平衡性上。本試驗日糧在設計時幾種主要的必需氨基酸（EAA）含量一致，其蛋白質(zhì)水平的差異實質(zhì)就在于3種日糧非必需氨基酸（NEAA）含量之不同，從而造成NEAA相對不足或過剩。王永軍等（1997）認為，所謂的理想蛋白質(zhì)應包含兩個方面的內(nèi)容：①是各種EAA之間具有最佳平衡的比例關系；②是EAA與NEAA或供給合成NEAA的氮源或氨基之間具有最佳平衡的比例關系。此時，各種EAA及合成NEAA的氮源對豬禽具有相同的限制性，故日糧蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)化效率最佳。在低蛋白質(zhì)水平下，雖然EAA供應充足，但機體蛋白質(zhì)合成量最大時所需的NEAA卻不足，進而影響肉雞生長（Hurwitz 等，1998）。用高蛋白質(zhì)水平日糧飼喂肉雞，雖然滿足了所有氨基酸的需要量，但引起氨基酸的不平衡，一樣導致氨基酸利用率降低，生產(chǎn)性能下降（Morris 等，1999）。本試驗中CP18日糧是接近實際生產(chǎn)水平的日糧（粗蛋白18.0%，適中），其EAA與NEAA之比例接近肉雞實際生長需要，更符合理想蛋白質(zhì)模式；CP16和CP20組或因NEAA 不足或因NEAA過量均造成機體蛋白質(zhì)代謝效率下降，從而使EAAL有升高趨勢。粗蛋白在更大范圍內(nèi)變動時對EAAL的影響有待進一步研究。
4 結論
日糧粗蛋白質(zhì)在16.0%~20.0%之間變動時，對肉雞內(nèi)源氨基酸損失量無顯著影響。但適中的粗蛋白水平（18.0%）有降低內(nèi)源氨基酸損失量的趨勢。