魚粉中組胺快速測(cè)定方法（請(qǐng)幫我看看著個(gè)方法有什么問題么？）

口合口合

魚粉中組胺快速測(cè)定方法

1、
原理：
樣品中的組胺用甲醇提取，再與對(duì)氨基苯磺酸和亞硝酸鈉反應(yīng)生在成黃色產(chǎn)物，其吸光度與樣品中的組胺含量呈正比。
2、
儀器和試劑
儀器：分光光度計(jì)、超聲提取儀、恒溫水浴箱
試劑：⑴對(duì)氨基苯磺酸溶液（1.7G/L）
稱取0.17G對(duì)氨基苯磺酸,用0.1MOL/LNAOH溶液溶解,定容至100ML.
⑵亞硝酸鈉溶液(17G/L)
稱取1.7亞硝酸鈉,用水溶解,定容至100ML,用時(shí)與(1+30)HCL等量混合(移取前混合)
⑶組胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1MG/ML)冰箱內(nèi)
準(zhǔn)確稱取0.2767G于100±5℃干燥2H的磷酸組胺，用水定容至100ML
⑷組胺標(biāo)準(zhǔn)使用液（0.02MG/ML）
準(zhǔn)確吸取1.00ML組胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于50ML棕色容量瓶中.用水定容.
3、樣品處理
稱取0.5g樣品于25ml比色管中,加入20ml甲醇,在46℃水浴上加熱30min,過濾,渣用甲醇洗滌兩次,合并濾液,用甲醇定容至100ml,避光保存?zhèn)溆?/font>.
4、測(cè)定
（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線：準(zhǔn)確吸取組胺標(biāo)準(zhǔn)使用液空白0.0；0.1；0.25；0.5；1.0ML于10ML具塞比色管中，分別加入5.0ml對(duì)氨基苯磺酸溶液,1.0ml亞硝酸鈉溶液,定容至刻度，搖勻，靜置10min后在420nm下比色。
（2）試樣測(cè)定：準(zhǔn)確吸取測(cè)定樣濾液1.0ml于10ml具塞比色管中，分別加入5.0ml對(duì)氨基苯磺酸溶液,1.0ml亞硝酸鈉溶液,定容至刻度，搖勻，靜置10min后在420nm下比色。
5、結(jié)果計(jì)算

X= M1*100/ M2
式 中 :
X—試樣中組胺的含量，單位為毫克每千克(mg/kg );
M1—由曲線查得的測(cè)定試樣中組胺的質(zhì)量，單位為微克(ug);
M2—試樣質(zhì)量，單位為克（g）。

口合口合

有以下幾個(gè)疑問：
1、原理的反應(yīng)方程式？（我有機(jī)化學(xué)不太好,嘿嘿）
2、1mg/ml的組胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液到底是組胺，還是磷酸組胺，還是一水磷酸組胺？（用的是國(guó)藥集團(tuán)的一水磷酸組胺鹽來配制的）
3、組胺標(biāo)準(zhǔn)使用液定容后是橙紅色，可測(cè)定試樣定容后確實(shí)黃色（與測(cè)磷時(shí)一樣的顏色），為什么？（難道橙紅色就是很深很深的黃色？@@007:）
4、組胺標(biāo)準(zhǔn)使用液比色時(shí)，數(shù)值一直會(huì)降低，我們只取第一次讀的數(shù)值。但測(cè)定試樣比色時(shí)數(shù)值卻一直都很穩(wěn)定，這又是為什么？
5、國(guó)標(biāo)是在480nm下比色，為什么這個(gè)方法是在420nm下比色呢？
6、有些測(cè)定樣在水浴過濾后顏色很深，可是卻比顏色淺的組胺低，為什么？（按原理來說水浴是使組胺溶解在甲醇里，照理不是組胺越高顏色越深么？）

口合口合 于 2009-8-26 13:11 補(bǔ)充以下內(nèi)容

為什么我的問題都沒人回答呢，郁悶了！:wugu:

286910223

這是一個(gè)顯色反應(yīng)，生成有色復(fù)合物，具體分子式我也不知道。
做儲(chǔ)備液之前不是烘干過，已經(jīng)是無水的磷酸組胺了，但稱量的0.2767g是折算成組胺了的，所以說儲(chǔ)備液是1mg/ml的組胺溶液。
紅色墨水咋一看還像黑墨水呢……
第4個(gè)不知道，不過只要是每次做標(biāo)曲與樣品同時(shí)比色，應(yīng)該可以避免這個(gè)問題。
那個(gè)波長(zhǎng)要看顯色無的吸光能力啊，在那個(gè)波長(zhǎng)的吸光能力好，還跟濃度成正比就可以了。只要你做出來的標(biāo)曲r值兩三個(gè)九以上，吸光度還可以就ok啦
甲醇提取物肯定不只組胺一種，相識(shí)相容吧。應(yīng)該跟魚粉的加工工藝之類的關(guān)系也很大吧。

xuridongshengyx

超聲提取儀這不沒派上用場(chǎng)嘛

286910223

魚粉用甲醇提取的時(shí)候可以用超聲提取儀啊，更加完全咯

sea0920

感謝樓主分享

sea0920 于 2010-1-3 15:10 補(bǔ)充以下內(nèi)容

有空做個(gè)試試看

csf123

哪里來的方法哦，可做過方法可靠性評(píng)價(jià)嗎？

mcs820208

這個(gè)方法好像很不準(zhǔn)確，在我們測(cè)定的過程中那個(gè)數(shù)字一直在不停的跳動(dòng)，而且試樣的顏色也發(fā)生變化，很不準(zhǔn)確呢！

glory143

組胺在甲醇中的溶解性怎么樣??用純甲醇提取?