大家都來說說粗蛋白偏差的影響因素

sunmy888

想必論壇里有不少檢測高手，下面集思廣益，希望大家能夠想想導(dǎo)致粗蛋白測定結(jié)果偏高和偏低各有哪些原因及如何避免。收集起來，以便今后提高結(jié)果的準(zhǔn)確度，同時(shí)也讓新手們少走彎路。

陽光普照

注意水分的偏差，還有反應(yīng)的是不是充分

joymark

很長時(shí)間沒有自己檢測粗蛋白了。還真需要認(rèn)真學(xué)習(xí)下。

safeeye138

稱樣、消化、蒸餾、吸收、滴定。試劑的新鮮度。等等

游人學(xué)子

序號(hào)        實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目        操作內(nèi)容        注意事項(xiàng)
1        樣品制備        選取有代表性的樣品用四分法縮減至200g，粉碎后全部通過40目篩，置于密閉樣品袋中，陰涼處保存，備用。       
2        樣品稱量        稱取0.2～0.4g試樣（含氮量5～80mg）準(zhǔn)確至0.0002g，無損失地放入凱氏燒瓶中，并記錄對應(yīng)編號(hào)消化管內(nèi)樣品的名稱及質(zhì)量        無損失操作要點(diǎn)：
1．        可將稱量紙一同消化，但要增加一個(gè)稱量紙的空白
2．        稱量完之后將稱量紙放回天平，看是否歸零，如不歸零，減去相應(yīng)的質(zhì)量。
3        消化準(zhǔn)備        往消化管中加入6.4g混合催化劑，搖勻，再加入10-12ml濃硫酸。        混合催化劑一定要均勻
濃硫酸具有強(qiáng)腐蝕性，注意操作安全
4        消化        控制消化爐溫度420℃，消化2-3h        1．        消化開始階段可控溫300度左右消化半小時(shí)，以防泡沫產(chǎn)生。
2．        消化時(shí)一定要加蓋抽汽裝置，以防酸霧溢出。
3．        樣品消化完全時(shí)一定是藍(lán)色透明液體，如有黑色殘留，說明沒有消化完全。
4．        消化完畢之后，先關(guān)閉消化爐，為避免酸霧溢出，待稍冷卻之后再關(guān)閉水龍頭。
5．        消化后的液體冷卻時(shí)會(huì)析出晶體，屬正?，F(xiàn)象。
5        洗滌機(jī)器        用約50ml蒸餾水，在不加堿和硼酸、指示劑的情況下蒸餾，洗滌2-3次       
6        空白測定        稱取約0.5g蔗糖，按照消化步驟進(jìn)行消化,待冷卻后,加入80ml蒸餾水，搖勻，將蒸餾裝置的冷凝管末端浸入裝有25ml硼酸吸收液和2滴混合指示劑的錐形瓶中，打開蒸汽開關(guān)，加入一定量的堿液，蒸餾至體積150ml左右，降下錐形瓶，使吸收管末端離開液面，繼續(xù)蒸餾1min后停止蒸餾，用蒸餾水沖洗吸收管末端，洗液沖入錐形瓶。       
7        氨的蒸餾        將消化后的試樣消煮液冷卻，加約80ml蒸餾水，按照空白的蒸餾方式蒸餾。        控制合適加堿量。當(dāng)加堿后出現(xiàn)黑色繼續(xù)加5-10ml即可
8        滴定        將蒸餾后的吸收液立即用0.1mol/L標(biāo)準(zhǔn)鹽酸滴定，溶液由藍(lán)綠色變成灰紅色為終點(diǎn)。       
9        計(jì)算         
v2—試樣滴定時(shí)所需酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（m1）；
v1—空白滴定時(shí)所需酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(m1)；
c—鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度(mol/L)；
m一試樣的質(zhì)量（g）；
F—氮與粗蛋白換算系數(shù)
0.0140—每ml HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于N的克數(shù)；        
10        測定步驟檢驗(yàn)        精確稱取0.2g硫酸銨，代替試樣，按測定步驟文字中的各步驟操作，并按公式計(jì)算（但不乘系數(shù)6.25）。        測得硫酸銨含氮量應(yīng)為21.19±0.2％，否則應(yīng)檢查加堿，蒸餾和滴定各步驟是否正確。
誤差來源        控制方案
樣品        抽樣        取樣要有代表性、真實(shí)性
        制備        樣品要有一定數(shù)量
充分混勻，用四分法縮分
粉碎至能全部通過40目
試劑        試劑規(guī)格        按照標(biāo)準(zhǔn)要求選購一定規(guī)格的試劑，控制雜質(zhì)量
        配制方法        區(qū)分精確配制和粗配制，按照GB/T601，GB/T602，GB/T603的要求配制和標(biāo)定，不能想當(dāng)然
        保存        按照試劑的保存要求（避光、塑料瓶、陰涼等條件限制）存放
注意試劑的保存期限
稱樣        稱樣量        稱樣量要適宜，一般根據(jù)該樣品的含氮量和所適用的滴定管最大體積估算，保證滴定體積不低于滴定管量程的1/3，不超過其量程
消化        催化劑        混合催化劑的比例不能偏差太大
用量要控制，不宜太多，一般按照要求添加即可
        硫酸用量        一般控制在10-12ml，如蛋白含量高可適當(dāng)增加用量，用量少可導(dǎo)致 消化不完全
        消化溫度        控溫420攝氏度，溫度太低消化不完全，時(shí)間長；溫度太高，硫酸損失太大
        消化時(shí)間        消化時(shí)間以2h左右為宜，可根據(jù)消化后的液體的顏色判斷其消化程度，消化完全的樣品液體呈透明藍(lán)色，如有黑點(diǎn)則消化不完全
        排氣量        當(dāng)消化溫度升到420以后，應(yīng)適當(dāng)控制水流速度不宜太大，否則硫酸損失太大，一般以不溢出酸霧為標(biāo)準(zhǔn)
蒸餾        加堿量        加堿量以控制管內(nèi)液體顏色變黑為標(biāo)準(zhǔn)，太少則反應(yīng)不完全
        硼酸        冷凝管末端要插入吸收液液面以下保證吸收完全
        蒸汽量        蒸汽量要控制合適，太小容易在開始的時(shí)候造成倒吸，量大容易造成吸收液體積太大
滴定        操作        嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)滴定操作進(jìn)行
系統(tǒng)        氣密性        用AR硫酸銨蒸餾，根據(jù)測得的含氮量評估系統(tǒng)氣密性

sunmy888

引用自游人學(xué)子 發(fā)表于 2009-9-1 15:44的內(nèi)容
序號(hào)        實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目        操作內(nèi)容        注意事項(xiàng)
1        樣品制備        選取有代表性的樣品用四分法縮減至200g，粉碎后全部通過40目篩，置于密閉樣品袋中，陰涼處保存，備用。        
2        樣品稱量        稱取0.2～0.4g試樣（含氮量5～80mg）準(zhǔn)確至0.0002

5樓同事總結(jié)很全面，很到位，希望看到此貼的人能夠多學(xué)習(xí)。謝謝。

徒兒

請教幾個(gè)問題：
1.對于麥皮、米糠、魚粉等不粉碎直接稱量是否可行？
2.混合催化劑如何保證均勻？不粉碎直接按比例添加行不？
3.蒸餾時(shí)，加堿和加汽的先后是否影響結(jié)果？
4.為了保證滴定體積不低于滴定管量程的1/3，不超過其量程，測定高蛋白試樣時(shí)，稱量太少是否誤差太大？（常量法）。
5.每做一個(gè)蛋白都要洗滌機(jī)器嗎？

tj4587_78

為了減少誤差,我們樣品的稱量一般為1-1.5克

知識(shí)就是力量

很系統(tǒng),全面啊,學(xué)習(xí)中

徒兒

引用自tj4587_78 發(fā)表于 2009-9-5 11:18的內(nèi)容
為了減少誤差,我們樣品的稱量一般為1-1.5克

你們用的是半微量法吧，否則用0.1mol/l的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定，應(yīng)該超過滴定管的量程。