棉籽蛋白粉游離棉酚的測定方法

胖豬豬

請問各位有沒什么好方法測定棉籽蛋白粉的游離棉酚檢測指標？:handshake

馮春偉

（規(guī)范性附錄）
飼料中游離棉酚的測定方法
GB 13086－1991

本標準參照采用國際標準ISO6866－1985《動物飼料中游離棉酚和總棉酚的測定》。
OO.1　主題內(nèi)容與適用范圍
本標準規(guī)定了飼料中游離棉酚的測定方法。
本標準適用于棉籽粉、棉籽餅（粕）和含有這些物質的配合飼料（包括混合飼料）中游離棉酚的測定。
OO.2　原理
在3－氨基－1－丙醇存在下用異丙醇與正已烷的混合溶劑提取游離棉酚，用苯胺使棉酚轉化為苯胺棉酚，在最大吸收波長440nm處進行比色測定。
OO.3　試劑和溶液
除特殊規(guī)定外，本標準所用試劑均為分析純，水為蒸餾水或相應純度的水。
OO.3.1　異丙醇〔（CH3）2CHOH〕。
OO.3.2　正已烷。
OO.3.3　冰乙酸。
OO.3.4　苯胺（C6H5NH2）：如果測定的空白試驗吸收值超過0.022時，在苯胺中加入鋅粉進行蒸餾，棄去開始和最后的10％蒸餾部分，放入棕色的玻璃瓶內(nèi)貯存在0～4℃冰箱中，該試劑可穩(wěn)定幾個月。
OO.3.5　3－氨基－1－丙醇（H2NCH2CH2CH2OH）。
OO.3.6　異丙醇－正已烷混合溶劑：6:4（V/V）。
OO.3.7　溶劑A：量取約500mL異丙醇－正已烷混合溶劑、2mL3－氨基－1－丙醇、8mL冰乙酸和50mL水于1000mL的容量瓶中，再用異丙醇－正已烷混合溶劑定容至刻度。
OO.4　儀器、設備
OO.4.1　分光光度計：有10mm比色池，可在440nm處測量吸光度。
OO.4.2　振蕩器：振蕩頻率(120～130)次/min（往復）。
OO.4.3　恒溫水浴。
OO.4.4　具塞三角燒瓶：100、250mL。
OO.4.5　容量瓶：25mL（棕色）。
OO.4.6　吸量管：1、3、10mL。
OO.4.7　移液管：10、50mL。
OO.4.8　漏斗：直徑50nm。
OO.4.9　表玻璃：直徑60nm.
OO.5　試樣制備
采集具有代表性的棉籽餅樣品，至少2kg，四分法縮分至約250g，磨碎，過2.8mm孔篩，混勻，裝入密閉容器，防止試樣變質，低溫保存?zhèn)溆谩?br /> OO.6　測定步驟
OO.6.1　稱取1g～2g試樣（精確至0.001g），置于250mL具塞三角瓶中，加入20粒玻璃珠，用移液管準確加入50mL溶劑Ａ，塞緊瓶塞，放入振蕩器內(nèi)振蕩1h（每分鐘120次左右）。用干燥的定量濾紙過濾，過濾時在漏斗上加蓋一表玻璃以減少溶劑揮發(fā)，棄去最初幾滴濾液，收集濾液于100mL具塞三角瓶中。
OO.6.2　用吸量管吸取等量雙份濾液5mL～10mL（每份約含50μg～100μg的棉酚）分別至兩個25mL棕色容量瓶a和b中，如果需要，用溶劑Ａ補充至10mL。
OO.6.3　用異丙醇－正已烷混合溶劑稀釋瓶a至刻度，搖勻，該溶液用作試樣的參比溶液。
OO.6.4　用移液管吸取2份10mL的溶劑Ａ分別至兩個25mL棕色容量瓶a0和b0中。
OO.6.5　用異丙醇－正已烷混合溶劑補充瓶a0至刻度，搖勻，該溶液用作空白測定液的參比溶液。
OO.6.6　加2.0mL苯胺于容量瓶b和b0中，在沸水浴上加熱30min顯色。
OO.6.7　冷卻至室溫，用異丙醇－正已烷混合溶劑定容，搖勻，并靜置1h。
OO.6.8　用10mm比色池，在波長440nm處，用分光光度計以a0為參比溶液測定空白測定液b0的吸光度，以a為參比溶液測定試樣測定液b的吸光度，從試樣測定液的吸光度值中減去空白測定液的吸光度值，得到校正吸光度Ａ。
OO.7　測定結果
OO.7.1　計算公式

      X=A*1.25*1000000/amv……………………………………（1）

式中：X——游離棉酚含量，mg/kg；
A——校正吸光度；
m ——試樣質量，g，
V ——測定用濾液的體積，mL；
a ——質量吸收系數(shù)，游離棉酚為62.5cm-1•g-1•L.
OO.7.2　結果表示
每個試樣取2個平行樣進行測定，以其算術平均值為結果。
結果表示到20mg/kg。

馮春偉

（規(guī)范性附錄）
飼料中游離棉酚的測定方法
GB 13086－1991

本標準參照采用國際標準ISO6866－1985《動物飼料中游離棉酚和總棉酚的測定》。
OO.1　主題內(nèi)容與適用范圍
本標準規(guī)定了飼料中游離棉酚的測定方法。
本標準適用于棉籽粉、棉籽餅（粕）和含有這些物質的配合飼料（包括混合飼料）中游離棉酚的測定。
OO.2　原理
在3－氨基－1－丙醇存在下用異丙醇與正已烷的混合溶劑提取游離棉酚，用苯胺使棉酚轉化為苯胺棉酚，在最大吸收波長440nm處進行比色測定。
OO.3　試劑和溶液
除特殊規(guī)定外，本標準所用試劑均為分析純，水為蒸餾水或相應純度的水。
OO.3.1　異丙醇〔（CH3）2CHOH〕。
OO.3.2　正已烷。
OO.3.3　冰乙酸。
OO.3.4　苯胺（C6H5NH2）：如果測定的空白試驗吸收值超過0.022時，在苯胺中加入鋅粉進行蒸餾，棄去開始和最后的10％蒸餾部分，放入棕色的玻璃瓶內(nèi)貯存在0～4℃冰箱中，該試劑可穩(wěn)定幾個月。
OO.3.5　3－氨基－1－丙醇（H2NCH2CH2CH2OH）。
OO.3.6　異丙醇－正已烷混合溶劑：6:4（V/V）。
OO.3.7　溶劑A：量取約500mL異丙醇－正已烷混合溶劑、2mL3－氨基－1－丙醇、8mL冰乙酸和50mL水于1000mL的容量瓶中，再用異丙醇－正已烷混合溶劑定容至刻度。
OO.4　儀器、設備
OO.4.1　分光光度計：有10mm比色池，可在440nm處測量吸光度。
OO.4.2　振蕩器：振蕩頻率(120～130)次/min（往復）。
OO.4.3　恒溫水浴。
OO.4.4　具塞三角燒瓶：100、250mL。
OO.4.5　容量瓶：25mL（棕色）。
OO.4.6　吸量管：1、3、10mL。
OO.4.7　移液管：10、50mL。
OO.4.8　漏斗：直徑50nm。
OO.4.9　表玻璃：直徑60nm.
OO.5　試樣制備
采集具有代表性的棉籽餅樣品，至少2kg，四分法縮分至約250g，磨碎，過2.8mm孔篩，混勻，裝入密閉容器，防止試樣變質，低溫保存?zhèn)溆谩?br /> OO.6　測定步驟
OO.6.1　稱取1g～2g試樣（精確至0.001g），置于250mL具塞三角瓶中，加入20粒玻璃珠，用移液管準確加入50mL溶劑Ａ，塞緊瓶塞，放入振蕩器內(nèi)振蕩1h（每分鐘120次左右）。用干燥的定量濾紙過濾，過濾時在漏斗上加蓋一表玻璃以減少溶劑揮發(fā)，棄去最初幾滴濾液，收集濾液于100mL具塞三角瓶中。
OO.6.2　用吸量管吸取等量雙份濾液5mL～10mL（每份約含50μg～100μg的棉酚）分別至兩個25mL棕色容量瓶a和b中，如果需要，用溶劑Ａ補充至10mL。
OO.6.3　用異丙醇－正已烷混合溶劑稀釋瓶a至刻度，搖勻，該溶液用作試樣的參比溶液。
OO.6.4　用移液管吸取2份10mL的溶劑Ａ分別至兩個25mL棕色容量瓶a0和b0中。
OO.6.5　用異丙醇－正已烷混合溶劑補充瓶a0至刻度，搖勻，該溶液用作空白測定液的參比溶液。
OO.6.6　加2.0mL苯胺于容量瓶b和b0中，在沸水浴上加熱30min顯色。
OO.6.7　冷卻至室溫，用異丙醇－正已烷混合溶劑定容，搖勻，并靜置1h。
OO.6.8　用10mm比色池，在波長440nm處，用分光光度計以a0為參比溶液測定空白測定液b0的吸光度，以a為參比溶液測定試樣測定液b的吸光度，從試樣測定液的吸光度值中減去空白測定液的吸光度值，得到校正吸光度Ａ。
OO.7　測定結果
OO.7.1　計算公式

      X=A*1.25*1000000/amv……………………………………（1）

式中：X——游離棉酚含量，mg/kg；
A——校正吸光度；
m ——試樣質量，g，
V ——測定用濾液的體積，mL；
a ——質量吸收系數(shù)，游離棉酚為62.5cm-1•g-1•L.
OO.7.2　結果表示
每個試樣取2個平行樣進行測定，以其算術平均值為結果。
結果表示到20mg/kg。