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本帖最后由 小華佗 于 2009-10-19 10:46 編輯
本研究以中藥材黃芪為試驗(yàn)材料,首先確定了黃芪多糖和黃芪皂甙含量測(cè)定的方法,并分別進(jìn)行了黃芪多糖和皂甙提取工藝的參數(shù)的優(yōu)化,然后比較了鮮黃芪干燥的不同方法,最后將提取所得的黃芪多糖進(jìn)行了分離檢測(cè)。主要試驗(yàn)結(jié)果如下: 1黃芪中有效成分含量測(cè)定方法的建立。總糖含量的測(cè)定采用苯酚一硫酸法,還原糖含量的測(cè)定采用3,5-二硝基水楊酸比色法,多糖的含量采用總糖與還原糖的差值表示:測(cè)定黃芪皂甙的含量采用香草醛-冰醋酸法。 2黃芪多糖提取工藝的研究。首先通過傳統(tǒng)熱水法提取黃芪多糖工藝的試驗(yàn),得出該法最佳工藝為:粉碎度為40目,液料比值為20,提取時(shí)間2h,于100℃提取2次,所得黃芪多糖的平均含量為9.45%;由于纖維素酶在提取過程中能有效的促進(jìn)多糖物質(zhì)的溶出,進(jìn)行了纖維素酶法提取黃芪多糖的研究。運(yùn)用響應(yīng)面法,通過Box.Behnken組合設(shè)計(jì)試驗(yàn),利用Design Expert 7.0.3軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合,回歸方差分析顯著性檢驗(yàn)表明,纖維素酶法提取黃芪多糖工藝的優(yōu)化方案是酶解pH值為4.0,溫度為56.5℃,加酶量為61U/g,其多糖的平均含量達(dá)到20.31%,提取效果顯著提高,所得模型回歸顯著,模型的R<'2>=0.9962,模型與實(shí)際試驗(yàn)擬合較好,自變量與響應(yīng)值之間線性關(guān)系顯著,可用于黃芪多糖,酶法提取試驗(yàn)的理論預(yù)測(cè)。各因素經(jīng)回歸擬合后,選擇對(duì)響應(yīng)值(多糖含量)顯著的各項(xiàng),得到纖維素酶法提取的黃芪多糖含量對(duì)編碼自變量(酶解pH值、溫度和加酶量)的二次多項(xiàng)回歸方程為: Y=20.0042+0.46775X<,1>0.20663X<,2>+0.158625X<,3>+0.01025X<,1>X<,2>+1.47025X<,1>X<,3>+0.593X<,2>X<,3>-2.0111X<,1><'2>-1.48085X<,2><'2>-1.17485X<,3><'2>。根據(jù)回歸方程制得不同因子的響應(yīng)面分析圖及等高線圖。 3 黃芪皂甙提取工藝的研究。確定了提取黃芪皂甙的最佳工藝參數(shù),試驗(yàn)表明采用乙醇體積分?jǐn)?shù)為80%,液料比值為20,提取時(shí)間1.5h進(jìn)行提取時(shí),皂甙提取含量最佳。 4 鮮黃芪不同干燥方法的比較。通過試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),鮮黃芪采用不同的干燥方法所得的有效成分含量也不同,真空冷凍干燥方法能夠最大限度的保持鮮黃芪的有效成分的含量。 5 黃芪多糖的分離純化。黃芪多糖提取液濃縮后用sevag法除蛋白,再用蒸餾水透析,經(jīng)醇沉后的黃芪多糖,凍干后備用。先進(jìn)行DEAE.Sepharose Fast Flow離子交換層析,再做Sephadex G-200凝膠柱層析,然后將所得組分進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)。 |
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