2005年版《中國獸藥典》一部（抗生素部分）解讀(轉)

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2005年版《中國獸藥典》（以下簡稱本版獸藥典或CVP2005）共收載抗生素產(chǎn)品75個，占一部446種藥品的16.8％。抗生素品種廣泛用于動物養(yǎng)殖和獸醫(yī)臨床，鑒于其生產(chǎn)工藝不同于其他化學藥品，因此質量標準也具有特殊性。為了更好地執(zhí)行本版獸藥典，現(xiàn)將有關情況介紹如下：
一、本版獸藥典抗生素產(chǎn)品標準的特點
1、修訂數(shù)量多，新增品種比例大。收載的75個品種中，其中1個為新增品種，占一部新增品種（27個）的52％，修訂并收載了CVP2000中 64個抗生素品種中的62個，未收載CVP2000中的琥珀氯霉素和注射用琥珀氯霉素。
2、高效液相色譜（HPLC）等現(xiàn)代分析技術應用廣泛。75個抗生素品種中HPLC在鑒別項中占47項，檢查項中占39項,含量測定中占37項;IR在鑒別項中占28項;并增加了分子排阻色譜法對聚合物的檢查。
3、傳統(tǒng)檢驗技術增加了新的內涵。如抗生素微生物檢定法中增加了濁度法。
4、檢查項中動物試驗項目大幅減少。熱原檢查改為細菌內毒素檢查達17個品種，有11個品種刪減了異常毒性的檢查，10個品種刪減了降壓物質檢查。符合凡例中第二十四條中“隨著獸藥純度的提高，凡是有準確的化學和物理方法或細胞學方法能取代動物試驗進行獸藥質量檢定的，盡量采用，以減少動物試驗”，方便檢驗的同時也體現(xiàn)了動物福利。
二、執(zhí)行本版獸藥典抗生素產(chǎn)品標準應把握的重點
（一）掌握“凡例”內容是執(zhí)行好獸藥典的基礎
“凡例”是解釋和正確使用獸藥典進行質量檢驗的基本原則，并把正文品種及質量檢定有關共性問題加以規(guī)定，避免了重復說明，并且“凡例”中的有關規(guī)定具有法定約束力。本版獸藥典“凡例”在CVP2000的基礎上進行了修訂，增加了各相關內容的分類題目，包括：名稱與編排，項目與要求，檢驗方法與限度，標準品、對照品，計量，精確度，試藥、試劑、指示劑，動物試驗，說明書、包裝、標簽等共9部分，28條。其中需要重點把握“凡例”中對鑒別，檢查，原、輔料，檢驗方法和限度幾個方面的表述。
（二）分類學習正文品種是執(zhí)行好獸藥典的關鍵
本版獸藥典共收載青霉素類抗生素18種，四環(huán)素類9種，大環(huán)內酯類16種，氨基糖苷類18種，酰胺醇類3種，林可胺類3種，多肽類2種，抗寄生蟲類6種。每類品種檢驗標準均有雷同，現(xiàn)分類詳述。
1、青霉素類抗生素
本版藥典收載青霉素類抗生素18種。
（1）鑒別項除普魯卡因青霉素注射液、氨芐西林外全部采用了HPLC法，部分品種刪減了青霉素酶水解法和一些理化鑒別。
（2）在檢查項下，需結晶性檢查的有2種。有5個品種需用分子排阻色譜法測β-內酰胺類聚合物。β-內酰胺類抗生素藥物中的高分子雜質主要分為蛋白（多肽）類雜質和聚合物類雜質兩大類，前者主要來源于生產(chǎn)過程的殘留和污染，后者主要是抗生素在生產(chǎn)、貯存和使用條件下發(fā)生分子間的聚合反應產(chǎn)物。國內外大量實驗和臨床研究證明，抗生素所致的速發(fā)型過敏反應和其中的高分子雜質有關。
（3）注射用青霉素鈉（鉀）等6個品種的熱原檢查改為細菌內毒素檢查。
（4）進一步明確了青霉素類藥物的無菌檢查――經(jīng)青霉素酶滅活后，采用薄膜過濾法檢驗。
（5）含量測定除普魯卡因青霉素注射液繼續(xù)采用抗生素微生物檢定法測定外，其余全部采用HPLC法。其中，由電位滴定法改為HPLC法，克服了電位滴定法存在滴定液污染環(huán)境，降解物測定差異較大，產(chǎn)品技術摻假等缺點。目前,CP2005、BP、USP29中，青霉素類均采用HPLC法，此法應注意2-苯乙胺與青霉素的分離度及理論塔板數(shù)等系統(tǒng)適用性檢查。
2、四環(huán)素類抗生素
四環(huán)素類抗生素共收載9個品種。
（1）在鑒別項下增加了9項HPLC法、4項IR法。
（2）檢查項下，鹽酸土霉素等2個品種增加了細菌內毒素檢查，刪減了熱原檢查；鹽酸四環(huán)素刪減了降壓物質、異常毒性檢查。同時，四環(huán)素類有7個品種應用HPLC進行有關物質的檢查。
（3）含量測定由微生物檢定法全部改為HPLC法。系統(tǒng)適用性試驗主要考察理論塔板數(shù)和分離度，流動相pH值為8.0左右，要求選用耐高pH值的C18柱，并應控制柱溫，用后注意及時對色譜系統(tǒng)的沖洗。
3、氨基糖苷類抗生素
氨基糖苷類抗生素共收載18個品種
（1）鑒別項下硫酸慶大霉素、硫酸新霉素等5個品種增加了IR法鑒別。
（2）檢查項下硫酸卡那霉素、硫酸卡那霉素注射液等8個品種增加了細菌內毒素檢查，刪減了熱原、降壓物質、異常毒性檢查。硫酸安普霉素刪減了妥布霉素檢查。
（3）含量測定仍采用抗生素微生物檢定法，但除另有規(guī)定外，檢定可信限率由7％提高到5％。氨基糖苷類抗生素在CP2005、USP29中，部分品種采用了HPLC－ELSD法測定含量。
4、大環(huán)內酯類抗生素
大環(huán)內酯類抗生素共收載16種。
（1）鑒別項下除了硫氰酸紅霉素、硫氰酸紅霉素可溶性粉、乳糖酸紅霉素和注射用乳糖酸紅霉素外，均采用了HPLC法，個別品種還采用了IR法。
（2）檢查項下吉他霉素、紅霉素等12個品種增加了HPLC法的組分檢查；吉他霉素及其鹽、制劑的干燥失重改為水分測定；乳糖酸紅霉素及其制劑刪減了異常毒性和降壓物質，增加了細菌內毒素檢查。
（3）含量測定全部采用抗生素微生物檢定法，與CVP2000和CP2005保持一致。
5、酰胺醇類抗生素
酰胺醇類抗生素共收載3個品種。
（1）鑒別項下增加了HPLC法。（試驗過程中HPLC和TLC法可任選一項）
（2）檢驗項下增加了HPLC法進行有關物質檢查。甲砜霉素粉的干燥失重限度由10.0％提高到8.0%。
（3）含量測定由原來的電位滴定改為HPLC法。
6、多肽類抗生素
多肽類抗生素共收載2個品種。
各項檢測方法均與CVP2000保持一致。
7、林可胺類抗生素
林可胺類抗生素共收載3個品種。
（1）鑒別項與CVP2000保持一致，即采用HPLC法。在制劑的鑒別項下增加了氯化物的鑒別反應。
（2）檢查項下刪減了異常毒性和降壓物質檢查，增加了細菌內毒素檢查，并且3個品種均要求進行林可霉素B的檢查。
（3）含量測定與CVP2000保持一致，采用HPLC法。
8、抗寄生蟲類抗生素
抗寄生蟲類抗生素共收載伊維菌素、鹽霉素鈉、馬杜米星銨及其制劑共6個品種。
（1）鑒別項下伊維菌素及其制劑刪減了紫外鑒別，增加了IR鑒別，其它與CVP2000保持一致。
（2）檢查項下伊維菌素的伊維菌素B1b改為伊維菌素組分；熾灼殘渣由0.5%提高到0.1%，其他與CVP2000保持一致。
（3）含量測定與CVP2000保持一致。
（三）牢固掌握附錄內容是執(zhí)行好獸藥典的保障
本版藥典附錄最大的改進在于對劑型分類及制劑通則的表述更加科學、嚴謹，有關內容，現(xiàn)就有關抗生素產(chǎn)品的內容再做進一步探討。
目前，習慣把經(jīng)化學改造的天然來源抗生素或微生物代謝的其它化合物，以低微濃度能抑制或影響他種生物機能的化學物質統(tǒng)稱為抗生素。
抗生素藥品的質量檢驗就是要控制抗生素成品中的雜質量及有效成分。
1、雜質檢查法
由于抗生素多為微生物發(fā)酵產(chǎn)品，其中間產(chǎn)物或副產(chǎn)物往往會帶入到產(chǎn)品中，因此進行抗生素產(chǎn)品中雜質的檢查顯得十分重要。目前采用的雜質檢查法（包括有關物質、有關組分）主要有薄層色譜法、紫外－可見分光光度法、高效液相色譜法和分子排阻色譜法。
薄層色譜法  采用薄層色譜法進行雜質檢查主要是限量檢查，可采用標準品對照法和自身對照法。
紫外分光光度法  主要指在特定波長處，測定供試品溶液的吸光度，與相應的標準相比較。
高效液相色譜法  主要采用自身對照法和面積歸一化法。
分子排阻色譜法  主要用外標法進行大分子聚合物的測定。如CVP2005第108頁青霉素聚合物的測定。
2、生物檢查法
目前，獸藥檢驗過程中，所用的生物檢查法主要包括熱原檢查、異常毒性檢查、無菌檢查、細菌內毒素檢查、微生物限度檢查等。本版獸藥典收載的品種中，凡是能進行細菌內毒素檢查，且規(guī)定了限度的品種，不再進行異常毒性和熱原檢查。
熱原檢查、異常毒性檢查  主要是將供試品溶液注入動物體內，在規(guī)定時間內觀察動物出現(xiàn)體溫升高或者死亡等現(xiàn)象，來對藥物的安全性進行評價。在CVP2005中，熱原檢查項規(guī)定實驗室溫度由CVP2000中的“17～28℃”調整為“17～25℃”，并在結果判定中補充“當家兔升溫為負值時，均以0℃計”；異常毒性項下補充 “規(guī)定緩慢注射的品種可延長至30秒”。
無菌檢查  系用于檢查獸藥典要求無菌的獸藥制劑、原料、輔料、獸醫(yī)醫(yī)療器具及其他品種是否無菌的一種方法。本版藥典與上版藥典相比，對無菌檢查進行了如下描述：即若供試品符合無菌檢查法的規(guī)定，僅表明供試品在該檢驗條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。無菌檢查的檢驗場所也進行了相應的規(guī)定，要求在環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內或隔離系統(tǒng)中進行。新版藥典對培養(yǎng)基、稀釋液、沖洗液的制備、貯藏、培養(yǎng)時間進行了相應規(guī)定，且將所用培養(yǎng)基的名稱進行了相應的改動。增加了方法驗證試驗，且對每一類藥物無菌檢查都做了相應規(guī)定，便于檢驗者操作。
細菌內毒素檢查  本版藥典規(guī)定，利用鱟試劑來檢測的主要是由革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的內毒素，收載了凝膠法和光度法兩種方法。對細菌內毒素檢查用水進行了更為嚴格的規(guī)定。
微生物限度檢查  本版藥典對微生物限度檢查操作環(huán)境和結果報告方式進行了改動，增加了驗證方法，對各類產(chǎn)品的操作進行了規(guī)定，但對具體品種未做強制性檢查。
3、抗生素藥品含量測定
抗生素是一種生理活性物質，含量測定方法主要分為化學法、生物學法、儀器法。結合本版藥典的內容，主要介紹生物學法和高效液相色譜法。
生物學法  用生物學方法測定抗生素含量的方法，常用的主要有管碟法和濁度法。
管碟法  是使用固體培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基凝固前，將試驗菌混進去，采用一定的方法，將含有抗生素的物質與含菌的培養(yǎng)基表面接觸。目前，國際上采用將抗生素加入到特定的小鋼管中，使小鋼管中的抗生素與培養(yǎng)基表面接觸，此方法稱為“管碟法”。經(jīng)過培養(yǎng)后，由于抗生素不斷向培養(yǎng)基中擴散，凡抑菌濃度能到達之處，試驗菌不能生長，從而形成透明的抑菌范圍，此范圍一般都呈圓形，稱為“抑菌圈”。由于抗生素藥品的醫(yī)療作用主要是抗菌能力，管碟法是以抗生素對細菌或霉菌的抗菌能力作為客觀指標來衡量抗生素的效力，其原理恰好與臨床應用的要求一致，能直接反映出抗生素對微生物（細菌、霉菌）的殺死或抑菌能力大小。
管碟法主要有二劑量法和三劑量法。本版獸藥典對各品種項下的可信限率作了更嚴格的要求。目前與國外藥典保持一致，即除另有規(guī)定外，可信限率應控制在5％以內。這就要求從事抗生素檢驗的技術人員水平需進一步提高，特別是在鋪菌層、鋼管的同質性、雙碟的選擇、小鋼管溶液的滴加等方面要認真摸索，規(guī)范操作。
濁度法  是將不同濃度的標準品及供試品，加到接有試驗菌的液體培養(yǎng)基內，混勻，經(jīng)過一定時間的培養(yǎng)（通常約為4小時）。經(jīng)培養(yǎng)后觀察試驗菌生長混濁度，在光電比色計中測定透光率，濁度越大透光率就越小。比濁法不以試驗菌有無生長的區(qū)分為終點，而是將標準品濃度和試驗菌生長所致混濁度求得一定的比例，再由標準品的試驗菌生長混濁度來推算供試品的效價。凡是能制成均勻懸液的微生物均可應用。因此，濁度法具有快速、靈敏度高、易操作、無擴散因素影響等優(yōu)點。但這一方法往往因供試品中含有雜質，影響細菌生長，并且不適用于有色或混濁的供試品。
用濁度法測定抗生素效價，國外藥典大都已采用，CP2005也收載了該方法，且硫酸慶大霉素注射液采用該法進行含量測定。本版獸藥典參照CP2005僅收載了濁度法，但未收載具體品種，望各檢驗單位、生產(chǎn)企業(yè)對此方法做進一步的探索。
高效液相色譜法  隨著科學技術的發(fā)展，在獸藥檢測領域中，HPLC法已相當普及。目前，常用的HPLC檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器。本版獸藥典涉及的品種主要用紫外檢測器、示差折光檢測器。CP2005中氨基糖苷類藥物已采用蒸發(fā)光散射檢測器檢測，本版藥典只收載了方法，氨基糖苷類藥物仍采用微生物檢定法進行含量測定。
HPLC法所要求的系統(tǒng)適用性試驗主要包括理論塔板數(shù)、分離度、重復性（校正因子）、拖尾因子。結合抗生素的特點，日常檢驗過程中，應主要考察理論塔板數(shù)和分離度。
HPLC法用于含量測定主要采用外標法進行。在日常檢測過程中，由于流動相多采用緩沖鹽溶液，加之抗生素產(chǎn)品是發(fā)酵產(chǎn)品，會帶入蛋白質等多種異物，對色譜柱的危害較大，使用時應注意對液相色譜的柱塞桿、密封圈的保養(yǎng)，對色譜系統(tǒng)應及時沖洗和保養(yǎng)。采用紫外檢測器時還應注意考察溶劑及流動相在各紫外吸收波長范圍內的吸收度大小。
三、本版獸藥典存在的不足
1、雖然收載了比濁法，但由于未進行具體品種應用的考察，未收載執(zhí)行此方法的具體品種。該法在CP2005中用于測定慶大霉素的檢測。目前，BP、USP中均有采用，望各有關單位積極進行具體研究，并結合現(xiàn)代儀器的應用，制定檢驗操作規(guī)程。該法是采用標準曲線法，對生產(chǎn)企業(yè)進行半成品質量控制、提高檢驗效率、降低勞動強度均有實際意義。
2、本版獸藥典中收載了質譜法，目前該法在獸藥殘留檢測方面已經(jīng)廣泛應用，隨著技術的發(fā)展，質譜法將更廣泛地運用于新藥安全評價、老藥再評價、藥物代謝動力學的考察等。
3、抗生素有關物質或者組分檢查中，相對保留時間或者出峰的先后順序應相對固定，除規(guī)定色譜條件外，還應標明色譜柱的品牌、規(guī)格、填料種類等，標準中還應附標準色譜圖以示對照。
4、在細菌內毒素的檢查法中，各品種項下規(guī)定的限值是參照CP2005而制定的，應結合獸藥臨床使用情況，做進一步研究。
5、本版獸藥典中鹽酸土霉素、青霉素類抗生素等基本完全參照CP2005修訂。個別品種未參照國外藥典使用的HPLC－ELSD法進行含量測定，以上項目仍需結合獸藥實際，做進一步的研究。
6、澄明度檢查法應參照CP2005,逐步用可見異物檢查法代替，并需做進一步考察驗證。
7、本版獸藥典未收載緩釋劑、顆粒劑、糊劑、乳房注入劑、陰道用制劑等新劑型品種。各科研單位，特別是各獸藥生產(chǎn)企業(yè)應加大這方面的研究。另外，寵物專用劑型、規(guī)格未做充分的考慮。

老男孩小獸醫(yī)

學習了，謝謝