如何測(cè)定真蛋白？

江南才女

大家好！大家都是怎么做真蛋白的？謝謝

apple12151007

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sunmanji

測(cè)定氨基酸的方法測(cè)定。

love51

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iemy-2007

在堿性條件用硫酸銅沉淀蛋白質(zhì)，過(guò)濾后用測(cè)粗蛋白的方法測(cè)

MHHY

測(cè)定步驟
　　1．試樣的前處理
　　準(zhǔn)確稱取試樣1～2g(精確到0．1mg)于250ml燒杯中，加蒸餾水50ml煮沸．依次加入10％硫酸銅水溶液20ml和2.5％氫氧化鈉溶液20rnl，邊加邊攪拌，加完后繼續(xù)攪拌幾分鐘。放置2小時(shí)或靜置過(guò)夜，沉淀物以中速定量濾紙過(guò)濾。用70℃以上熱水18ml反復(fù)洗滌沉淀．直至濾液無(wú)沉淀為止(取氯化鋇試液滴于表面皿中。加2mol／L鹽酸溶液1滴．滴人濾液．在黑色背景下觀察應(yīng)無(wú)白色沉淀)。然后，將濾紙和沉淀物包好，放人烘箱中在65～70℃下干燥2小時(shí)。
　　2．試樣的消化
　　將烘干的試樣連同濾紙一起放人凱氏燒瓶中．依次加入硫酸鉀或無(wú)水硫酸鈉9 硫酸銅1 濃硫酸25ml，搖勻，爾后置于電爐上先低溫(100～200~C)加熱，注意防止泡沫浮起，待泡沫消失后再提高加熱溫度(約410~C)至沸騰，消化至溶液澄清無(wú)黑點(diǎn)并呈藍(lán)綠色，再繼續(xù)加熱30分鐘，然后將凱氏燒瓶移出電爐放冷。
　　3．定容
　　將冷卻后的消化液加蒸餾水約10～20ml，’搖勻后轉(zhuǎn)入100ml容量瓶中，再加10～20ml蒸餾水洗滌凱氏燒瓶。溶液并入容量瓶中，如此反復(fù)洗滌，直至消化液全部轉(zhuǎn)入容量瓶中。待冷卻至室溫后，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。即為試樣分解液。
　　4．蒸餾
　　采用半微量凱氏定氮蒸餾法。先將水蒸汽發(fā)生器與半微量凱氏定氮蒸餾器連接好。在水蒸汽發(fā)生器的水中加入甲基紅指示劑3滴與硫酸數(shù)滴，使水溶液保持橙紅色，否則應(yīng)補(bǔ)加少許硫酸。取20ml2％硼酸水溶液于250ml錐形瓶中，加0．1％甲基紅乙醇溶液5～6滴，0．5％溴甲酚綠乙醇溶液2～3滴，搖勻。然后將錐形瓶置于半微量凱氏定氮蒸餾器的末端．使冷凝管末端浸入此吸收液面下2／3處。準(zhǔn)確移取試樣分解液10～15ml注入半微量定氮蒸餾器中，用少量蒸餾水沖洗進(jìn)樣口，爾后緩慢加入40％氫氧化鈉水溶液20ml。用少量蒸餾水沖洗進(jìn)樣口，用玻璃塞塞好進(jìn)樣口。再加適量蒸餾水封住進(jìn)樣口以防止漏氣。蒸餾3～5分鐘以后待冷凝管末端管口之餾出液呈中性(紅色石蕊試紙不變色)時(shí)將冷凝管末端離開吸收液面并沖洗冷凝管末端管口，洗液并入吸收液。再蒸餾1～2分鐘后用蒸餾水沖洗冷凝管末端管口，洗液并入吸收液。然后將錐形瓶移出，準(zhǔn)備滴定。此時(shí)應(yīng)夾斷氣源。排出廢液，準(zhǔn)備下一個(gè)樣品的測(cè)定。
　　5．滴定
　　吸收氨后的吸收液立即用0．05tool／1的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定使溶液顏色由藍(lán)綠色變?yōu)榛壹t色即為滴定終點(diǎn)。同時(shí)記錄鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的耗用量。
　　6．空白
　　在進(jìn)行樣品測(cè)定的同時(shí)進(jìn)行空白測(cè)定?？瞻诇y(cè)定除不加試樣外其他操作步驟與試樣相同?？瞻自囼?yàn)消耗的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積不得超過(guò)0．5ml。
   7.計(jì)算方法同粗蛋白