快速測定大豆制品中的尿酶活性
方法一:尿素— 苯酚紅法(美國大豆協(xié)會)
1 原理
尿素酶活性是大豆餅粕類加工正確與否的標(biāo)志,它的活性的高低與大豆餅粕加工(熱)程度有直接關(guān)系,此方法是在指示劑苯酚磺存在的條件下,按尿素轉(zhuǎn)變成氨的方法定性測定豆粕中尿素酶的活性。
2 試劑
(1)0.1mol/L硫酸(將6ml濃硫酸緩緩注入1000ml水中)
(2)0.2mol/L氫氧化鈉:取0.8g氫氧化鈉加蒸餾水,溶解成100ml
(3)尿素— 苯酚紅(別名:酚磺肽、酚紅)試劑:將 1.2g苯酚紅溶于30mL0.2mol/L氫氧化鈉溶液中,用蒸餾水稀釋至300mL;加入90g尿素并溶解之,用蒸餾水稀釋至 2L;加 70mL0.1mol/L硫酸;稀釋至3L。
注意:配好的溶液應(yīng)具有明亮的琥珀色,若溶液轉(zhuǎn)變成桔紅色時,應(yīng)滴加0.1mol/L硫酸,調(diào)至呈琥珀色,試劑最好在試驗前配制,現(xiàn)配現(xiàn)用。尿素—苯酚紅試劑有效期僅90天。
3.測定方法
(1)取粉碎好的豆粕,均勻地平鋪于培養(yǎng)皿中(注意鋪薄薄一層)。
(2)用滴管吸取尿素— 苯酚紅試劑,小自心滴在被測定的樣品中,將培養(yǎng)皿中豆粕全部浸濕。
(3)放置5分鐘后觀察結(jié)果:
?、贈]有任何紅點出現(xiàn),再放置25分鐘,若還無紅點出現(xiàn),說明沒有尿素酶活性,是豆粕加工過熟了。
?、谟猩贁?shù)紅點,為少量尿素酶活性,豆粕可用。
?、鄱蛊杀砻嬗?5%的紅點覆蓋,有少量尿素酶活性,可用。
?、芏蛊杀砻娉霈F(xiàn)50%的紅點覆蓋,尿素酶活性大,應(yīng)慎用。
⑤豆粕表面的 75%一100%為紅點覆蓋,尿素酶活性很高,說明豆粕過生,無法使用。
思考下:配制尿素苯酚紅溶液時,硫酸的量能否多用或少用?為什么? 整個檢測過程會發(fā)生怎樣的化學(xué)反應(yīng)? |
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