豬偽狂犬的情況極其引物設(shè)計(jì)

心隨烏托邦

      各位行業(yè)高手，我想問一下豬偽狂犬病的相關(guān)知識(shí)，主要是豬偽狂犬病的主要癥狀、免疫程序、以及這種基因缺失苗的相關(guān)情況。
      補(bǔ)充：我在實(shí)驗(yàn)室多次用分子生物學(xué)-PCR技術(shù)檢測(cè)豬偽狂犬病但是不能檢出，但是根據(jù)臨床癥狀很有可能是豬偽狂犬病。我設(shè)計(jì)的引物是針對(duì)這種病毒的IgD基因設(shè)計(jì)，而以基因缺失苗（缺IgE）作為陽性對(duì)照，但是每次檢測(cè)出來的結(jié)果都很奇怪，自己也找不出來什么原因。開始懷疑是自己的引物設(shè)計(jì)有問題，但是后面又設(shè)計(jì)了一次，還在一些文獻(xiàn)里面找了一些別人用過的針對(duì)豬偽狂犬病的引物，來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但是檢測(cè)結(jié)果還是不理想，連作為陽性對(duì)照的疫苗毒株都是不能檢測(cè)出來。
        所以請(qǐng)行業(yè)高手幫忙分析分析！在下感激不盡！

海棠

PCR診斷方法：由于豬偽狂犬病毒基因組GC含量比較高，所以擴(kuò)增比較難。一般用gE基因設(shè)計(jì)引物，因?yàn)樨i偽狂犬疫苗一般是gE基因缺失的，可以區(qū)分野毒和疫苗毒。
在做PCR時(shí)，購(gòu)買擴(kuò)增高GC含量基因的PCR酶會(huì)取得較好的效果。

海棠

豬偽狂犬癥狀：
母豬：流產(chǎn)，死胎。
小豬：神經(jīng)癥狀，腹瀉，發(fā)燒。
中大豬：咳嗽，呼吸道癥狀。
解剖特征：肝、脾有白色壞死點(diǎn)，扁桃體壞死。

海棠

免疫：母豬一年免疫4次，出生仔豬7天內(nèi)滴鼻，50日齡再免疫1次。

心隨烏托邦

海棠 發(fā)表于 2014-2-25 22:30
PCR診斷方法：由于豬偽狂犬病毒基因組GC含量比較高，所以擴(kuò)增比較難。一般用gE基因設(shè)計(jì)引物，因?yàn)樨i偽狂犬疫 ...

恩，是的，謝謝！設(shè)計(jì)引物為什么要根據(jù)gE基因呢？還有就是實(shí)驗(yàn)室就是由于豬偽狂犬一直檢測(cè)不順利，所以沒有保存陽性病料，每次都是用基因缺失的gE疫苗作為陽性對(duì)照，如果按照設(shè)計(jì)引物根據(jù)gE基因，那么缺失苗作為陽性也不能檢測(cè)出來啦？所以很糾結(jié)。

心隨烏托邦

海棠 發(fā)表于 2014-2-25 22:24
豬偽狂犬癥狀：
母豬：流產(chǎn)，死胎。
小豬：神經(jīng)癥狀，腹瀉，發(fā)燒。

謝謝！剖檢的具體癥狀有嗎？除了肝和脾。

心隨烏托邦

海棠 發(fā)表于 2014-2-25 22:26
免疫：母豬一年免疫4次，出生仔豬7天內(nèi)滴鼻，50日齡再免疫1次。

謝謝您！版主你看這個(gè)免疫方案對(duì)嗎？
豬偽狂犬gE基因缺失疫苗，無論國(guó)產(chǎn)苗或進(jìn)口苗都可以產(chǎn)生良好的免疫效果 ；無論跟胎免疫 、1年2次普免，每隔4個(gè)月定時(shí)免疫 ，效果均 良好 。種豬免疫抗體合格率達(dá) 100，仔豬 49 日齡前抗體合格率達(dá)
100 ，75 日齡后抗體逐漸 降低 ，120 日齡后基本消失 。為 了使 豬體免疫力更 強(qiáng)，不給野毒入侵 的機(jī)會(huì) ，建議仔豬在首免后 ，適當(dāng)時(shí)間進(jìn)行二次加強(qiáng)免疫 。
這里仔豬說的適當(dāng)時(shí)間免疫是您這里的7天首免、50天第二次免疫嗎？

廣東豬獸醫(yī)

你用的是什么文獻(xiàn)？你設(shè)計(jì)的是什么引物，你要讓大家看  才能給你幫助啊

另外，檢測(cè)PR的金標(biāo)準(zhǔn)是 PCR嗎？好像不是吧  

心隨烏托邦

廣東豬獸醫(yī) 發(fā)表于 2014-2-26 17:32
你用的是什么文獻(xiàn)？你設(shè)計(jì)的是什么引物，你要讓大家看  才能給你幫助啊

另外，檢測(cè)PR的金標(biāo)準(zhǔn)是 PCR嗎？ ...

文獻(xiàn)就是一般我國(guó)的期刊上的呀！檢測(cè)偽狂犬是有很多種，但是PCR相對(duì)來說比較方面和準(zhǔn)確。因而目前也應(yīng)用較多。

心隨烏托邦

心隨烏托邦 發(fā)表于 2014-2-26 09:40
恩，是的，謝謝！設(shè)計(jì)引物為什么要根據(jù)gE基因呢？還有就是實(shí)驗(yàn)室就是由于豬偽狂犬一直檢測(cè)不順利，所以沒 ...

關(guān)鍵是實(shí)驗(yàn)條件原因，現(xiàn)在我找不到合適的陽性毒株，所以只有把缺失苗當(dāng)成陽性對(duì)照。