請(qǐng)教：蛋白溶解度測(cè)定方法

zhouyoo

　　哪位大哥大姐能幫忙發(fā)下蛋白溶解度的詳細(xì)測(cè)定方法及注意事項(xiàng)，特別是計(jì)算公式要詳細(xì)。
　　另外請(qǐng)問下，菜粕棉粕與豆粕的蛋白溶解度的檢測(cè)方法+計(jì)算公式相同嗎？謝謝大家了，急！?。⌒〉芨屑げ槐M！

孟俊英

大豆及其制品蛋白質(zhì)溶解度測(cè)定
1  范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了大豆及其制品中蛋白質(zhì)溶解度測(cè)定的原理、試劑、儀器設(shè)備和測(cè)定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料檢測(cè)單位、飼料企業(yè)、養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）、大中專院校對(duì)大豆及其制品的加工質(zhì)量的檢測(cè)和監(jiān)控。
2  規(guī)范性引用文件
下列文件通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
GB 601—88  化學(xué)試劑  滴定分析（容量分析）用標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
GB/T 6432—1994  飼料中粗蛋白質(zhì)的測(cè)定
3  術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
3.1  蛋白質(zhì)溶解度
在一定的氫氧化鉀溶液中溶解的蛋白質(zhì)質(zhì)量占試樣中總蛋白質(zhì)量的百分?jǐn)?shù)。通常采用氮溶解指數(shù)（NSI）和蛋白質(zhì)分散指數(shù)（(PDI)來表示。
4  原理
用一定濃度的氫氧化鉀溶液提取試樣中的可溶性蛋白質(zhì)，在催化劑作用下用濃硫酸將提取液中可溶性蛋白質(zhì)的氮轉(zhuǎn)化為硫酸銨。加入強(qiáng)堿進(jìn)行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收后，再用鹽酸滴定測(cè)出試樣中可溶性蛋白質(zhì)含量；同時(shí)，測(cè)定原始試樣中粗蛋白質(zhì)含量，計(jì)算出試樣的蛋白溶解度。
5  試劑
a)  氫氧化鉀（分析純），無水硫酸鉀、五水硫酸銅、氫氧化鈉、硼酸、甲基紅、溴甲酚綠、硫酸銨；
b)  濃硫酸、鹽酸（分析純）、95%乙醇、蒸餾水。
6  儀器和設(shè)備
a)  感量為0.0001 g分析天平；
b)  磁力攪拌器；
c)  離心機(jī)；
d)  樣品粉碎機(jī)；
e)  60目分析篩；
f)  電爐；
g)  100 mL或250 mL凱氏燒瓶；
h)  凱氏蒸餾裝置；
i)  250 mL錐形瓶；
j)  1000 mL容量瓶；
k)  微量滴定管。
7  分析步驟
7.1  試劑
7.1.1  0.042 M氫氧化鉀溶液
稱取2.360 g氫氧化鉀，加水溶解后，轉(zhuǎn)移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。
7.1.2  混合催化劑
稱取6 g硫酸鉀和0.4 g硫酸銅，磨碎混勻。
7.1.3  氫氧化鈉溶液
稱取400 g氫氧化鈉，加水溶解后，轉(zhuǎn)移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。
7.1.4  硼酸溶液
稱取20 g硼酸，加水溶解后，轉(zhuǎn)移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。
7.1.5  0.1M鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液
量取8.3 mL濃鹽酸，注入1000 mL水中混勻，按GB 601-88要求進(jìn)行標(biāo)定即可。
7.1.6  混合指示劑
稱取1 g甲基紅和5 g溴甲酚綠，加入乙醇溶解后，轉(zhuǎn)移至1000 mL容量瓶中，用乙醇定容至刻度。
7.2   樣品制備
取具有代表性的試樣用四分法縮減至200 g，粉碎至60目，裝入密封容器中。
7.3  操作步驟
7.3.1  試樣處理
稱取試樣1.5 g（準(zhǔn)確至0.0002 g）置于250 mL燒杯中，準(zhǔn)確移入 0.042 M氫氧化鉀溶液75 mL，磁力攪拌20 min，然后將試樣轉(zhuǎn)移至離心管中，以2700 r/min的速度離心10 min。
7.3.2  測(cè)定
吸取上清液 15 mL, 放入消化管中, 按照GB/T 6432-1994凱氏定氮法測(cè)定試樣中可溶性蛋白質(zhì)的含量。同時(shí)，按照GB/T 6432-1994凱氏定氮法測(cè)定試樣中粗蛋白質(zhì)的含量。
7.3.3  分析結(jié)果計(jì)算
試樣中蛋白質(zhì)溶解度按照下式進(jìn)行計(jì)算：
                     

（1）
式中：

C——鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L；

V2 ——滴定試樣時(shí)所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液體積（mL）；

V1 ——滴定空白時(shí)所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液體積（mL）；

V ¢——吸取樣液體積（mL）；

V ——試樣分解液蒸餾用體積（mL）。

7.3.4  重復(fù)性
7.3.4.1  每個(gè)樣品應(yīng)取2份平行樣進(jìn)行測(cè)定，以其算術(shù)平均值為分析結(jié)果。
7.3.4.2  測(cè)定允許相對(duì)偏差不大于1%。
7.4  注意事項(xiàng)
7.4.1  不同樣品的粒度應(yīng)相同。
7.4.2  不同樣品在氫氧化鉀溶液中的攪拌時(shí)間應(yīng)一致

yebalance

歡迎來到畜牧人論壇，希望能找到你要的

李文華

回復(fù) 2# 孟俊英 怎么沒有公式啊

mengdl2003

很好！謝謝

tony2005428

回復(fù) 孟俊英 的帖子

你沒把公式貼出來？

hexuejun02

能不能不離心，沉淀或過濾什么的？

BB1723

豆粕中堿溶性蛋白的測(cè)定
一、原理及意義：
脲酶活性和蛋白溶解度（PS）是評(píng)定豆粕加工質(zhì)量的兩種重要指標(biāo)。但在生產(chǎn)中對(duì)加熱過度的豆粕脲酶測(cè)定值不是一個(gè)可靠的指標(biāo)，蛋白溶解度可以區(qū)別不同程度的過度加熱。蛋白質(zhì)溶解度測(cè)定值隨加熱時(shí)間的增加而遞減。
蛋白溶解度是根據(jù)蛋白質(zhì)在一定量的氫氧化鉀溶液中溶解蛋白質(zhì)質(zhì)量。分析結(jié)果：生大豆粕的PS達(dá)到100%，在日常分析中，當(dāng)PS 大于85%則認(rèn)為大豆粕過生，當(dāng)PS小于75%時(shí)則認(rèn)為大豆粕過熟。當(dāng)PS在80%左右時(shí)大豆粕加工適度。
二、儀器及設(shè)備
離心機(jī)（1400轉(zhuǎn)/分）、振蕩器、其它同粗蛋白質(zhì)
三、試劑
1、 0.2%KOH溶液，相當(dāng)于0.042mol/l，PH值為12.5，稱量2.360g氫氧化鉀，放入一個(gè)容量瓶中，用水溶解產(chǎn)稀釋至1000ml。
2、 其它試劑同粗蛋白質(zhì)
四、測(cè)定步驟
    稱2±0.1克樣品于250ml三角燒瓶中，加100ml 0.2%KOH溶液立即在振蕩器上振蕩，整體振蕩高度為6cm，液面上升3cm，精確維持20分鐘，在離心機(jī)上離心10分鐘，過濾后取20ml清液作定氮用。
五、計(jì)算方法：
    蛋白質(zhì)溶解度（%）=20ml溶液中所測(cè)蛋白質(zhì)含量/原樣品的粗蛋白質(zhì)含量
注：
樣品需用不產(chǎn)熱的粉碎機(jī)粉碎至100%過60目標(biāo)準(zhǔn)篩

zhuyanling

菜粕和棉粕用KOH的濃度兩個(gè)做過對(duì)比，就是經(jīng)常用的0.2%，還有國(guó)外常用的國(guó)內(nèi)也有用的如大北農(nóng)等的0.5%。結(jié)果發(fā)現(xiàn)后者溶解度能高出近4個(gè)左右。
至于方法和公式與豆粕的PS相同！

快樂生活o

當(dāng)PS 大于85%則認(rèn)為大豆粕過生，當(dāng)PS小于75%時(shí)則認(rèn)為大豆粕過熟。當(dāng)PS在80%左右時(shí)大豆粕加工適度。
脲酶活性是檢測(cè)過生還是過熟？