測(cè)真蛋白時(shí)需要主意的因素有哪幾個(gè)

swordman33

還有一個(gè)問(wèn)題，測(cè)真蛋白時(shí)需要主意的因素有哪幾個(gè)？
過(guò)濾說(shuō)是用傾斜法過(guò)濾，傾斜法怎么操作？
加入硫酸銅和氫氧化鈉攪拌后應(yīng)該是什么顏色？
配出的硫酸銅三四天后有白色絮狀沉淀，正常么？
過(guò)濾時(shí)有的過(guò)濾特別慢，濾紙正常，還有什么原因，七八個(gè)小時(shí)過(guò)濾不完，是粉碎得太細(xì)了么？都有什么可能？

littlepigwsw

怎么沒(méi)人回答呢?期待.....

xphxyk

應(yīng)是氫氧化銅的色。我現(xiàn)在使用的抽濾的辦法否則太慢

理想

我現(xiàn)在用的是普通濾紙漏斗過(guò)濾,如果時(shí)間太慢,將漏斗稍微提升一點(diǎn);你的硫酸銅可能有問(wèn)題,是不是配制是沒(méi)有加熱充分溶解還是蒸餾水有問(wèn)題?如果不好,建議重新配制~!

理想

樣品+CUSO4+NAOH的顏色是灰藍(lán)色,沉淀是CU+蛋白形成的

粗蛋白

真蛋白測(cè)定—硫酸銅沉淀法
1、原理：
    蛋白質(zhì)能變成不溶于水的狀態(tài)，而與其它含氮化合物分離開(kāi)來(lái)。當(dāng)加入沉淀劑（如硫酸銅），然后經(jīng)過(guò)過(guò)濾，用水洗去沉淀中的鹽類及溶解性的含氮物，按照測(cè)粗蛋白的方法，即得樣品中的真蛋白含量。
2、操作步驟：
１）準(zhǔn)確稱取樣品2克左右分別放于2只300ml燒杯中用50ml蒸餾水?dāng)?shù)次沖洗，邊沖邊攪拌，然后將溶液加熱至沸。
２）向燒杯內(nèi)倒入25ml 6%硫酸銅溶液略攪拌，再徐徐加入25ml 1.25% NaOH溶液攪動(dòng)(不要加得太快)。
３）用表面皿將燒杯蓋上靜置2小時(shí)，然后用兩層定量濾紙慢速過(guò)濾，用熱蒸餾水沖洗燒杯數(shù)次，再用熱蒸餾水沖洗沉淀物，濾液用氯化鋇溶液檢查不混濁后,  將漏斗連同濾紙置50—80℃烘至略潮(約1.5小時(shí))。
４）消化:同測(cè)粗蛋白，但易溢出，操作者要守在旁邊觀察，消化液不能加多也不能少。
3、計(jì)算：（同粗蛋白）
附試劑配制：    1）6%硫酸銅：稱取6g硫酸銅溶于100ml水中。
                2）1%氯化鋇：稱1g氯化鋇溶于100ml水中。

最近接手化驗(yàn)室工作,我就按照上述過(guò)程操作,  過(guò)濾倒不是很慢,但就是消煮后發(fā)現(xiàn)全部結(jié)晶了,可能是自己用硫酸太少或催化劑加多了,  第一次做是以失敗告終, 檢測(cè)結(jié)果為0,凱氏瓶還燒爆一個(gè):P

zxm

應(yīng)該是用硫酸太少，至少要用20ML以上

tony2005428

1、原理
      硫酸銅在堿性溶液中，可將蛋白質(zhì)沉淀，且不溶于熱水過(guò)濾和洗滌后，可將純蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)含蛋物分離，再用凱氏定蛋法測(cè)定沉淀中的蛋白質(zhì)含量。
2、儀器設(shè)備
      （1）燒杯：200ml。
      （2）定性濾紙。
      （3）其他設(shè)備與粗蛋白質(zhì)測(cè)定法的相同。
3、試劑及配制
      （1）100g/L硫酸銅溶液：分析純硫酸銅（CuSO4·5H2O）10g溶于100mL蒸餾水中。
      （2）25g/L氫氧化鈉溶液：將2.5g分析純氫氧化鈉溶于100mL蒸餾水中。
            （3）10g/L氯化鋇溶液：1g氯化鋇（BaCl·H2O）溶于100mL蒸餾水中。
            （4）2moL/鹽酸溶液。
            （5）其他試劑預(yù)一般粗蛋白測(cè)定法的相同。
4、測(cè)定步驟
               準(zhǔn)確稱取試樣1g左右（精確到0.0001g），置于200mL燒杯中，加50mL蒸餾水，加熱至沸，加入20mL硫酸銅溶液，20mL氫氧化鈉溶液（加入以上兩種溶液多要緩慢，且要邊加入邊攪拌），用玻璃棒充分?jǐn)嚢瑁胖?h以上，用傾斜過(guò)濾（用定型濾紙），然活后用60~80℃熱蒸餾水洗滌沉淀5~6次，用氯化鋇溶液5滴和鹽酸溶液1滴檢查濾液，直至不生成白色沉淀為止。將沉淀和濾紙放在65℃烘箱干燥2h，然后全部轉(zhuǎn)移到凱氏燒瓶中，消化后進(jìn)行定蛋測(cè)定。
5、結(jié)果計(jì)算
       同粗蛋白測(cè)定。

粗蛋白

我們所用的硫酸銅和氫氧化鈉的濃度不一樣. 濃度高了過(guò)濾很慢,所以將濃度都降了一半.

tony2005428

#9
濃度不影響過(guò)濾吧

#1
1、傾斜法過(guò)濾：是否就是加濾紙的V型漏斗過(guò)濾呢？？具體的我也不是很清楚，我們就是這樣操作的。
2、加入硫酸銅和氫氧化鈉攪拌后應(yīng)該是什么顏色？
原料不同顏色有所差異，不過(guò)顏色好像不影響真蛋白的測(cè)定。
3、過(guò)濾時(shí)有的過(guò)濾特別慢？
你是否加入硫酸銅和氫氧化鈉后直接過(guò)濾呢？？要用玻璃棒充分?jǐn)嚢?，放?h以上，后再過(guò)濾，此時(shí)濾液不混濁，有上清液；若直接過(guò)濾時(shí)溶液混濁，成糊狀，非常慢。