測真蛋白時需要主意的因素有哪幾個

swordman33

還有一個問題，測真蛋白時需要主意的因素有哪幾個？
過濾說是用傾斜法過濾，傾斜法怎么操作？
加入硫酸銅和氫氧化鈉攪拌后應該是什么顏色？
配出的硫酸銅三四天后有白色絮狀沉淀，正常么？
過濾時有的過濾特別慢，濾紙正常，還有什么原因，七八個小時過濾不完，是粉碎得太細了么？都有什么可能？

littlepigwsw

怎么沒人回答呢?期待.....

xphxyk

應是氫氧化銅的色。我現在使用的抽濾的辦法否則太慢

理想

我現在用的是普通濾紙漏斗過濾,如果時間太慢,將漏斗稍微提升一點;你的硫酸銅可能有問題,是不是配制是沒有加熱充分溶解還是蒸餾水有問題?如果不好,建議重新配制~!

理想

樣品+CUSO4+NAOH的顏色是灰藍色,沉淀是CU+蛋白形成的

粗蛋白

真蛋白測定—硫酸銅沉淀法
1、原理：
    蛋白質能變成不溶于水的狀態(tài)，而與其它含氮化合物分離開來。當加入沉淀劑（如硫酸銅），然后經過過濾，用水洗去沉淀中的鹽類及溶解性的含氮物，按照測粗蛋白的方法，即得樣品中的真蛋白含量。
2、操作步驟：
１）準確稱取樣品2克左右分別放于2只300ml燒杯中用50ml蒸餾水數次沖洗，邊沖邊攪拌，然后將溶液加熱至沸。
２）向燒杯內倒入25ml 6%硫酸銅溶液略攪拌，再徐徐加入25ml 1.25% NaOH溶液攪動(不要加得太快)。
３）用表面皿將燒杯蓋上靜置2小時，然后用兩層定量濾紙慢速過濾，用熱蒸餾水沖洗燒杯數次，再用熱蒸餾水沖洗沉淀物，濾液用氯化鋇溶液檢查不混濁后,  將漏斗連同濾紙置50—80℃烘至略潮(約1.5小時)。
４）消化:同測粗蛋白，但易溢出，操作者要守在旁邊觀察，消化液不能加多也不能少。
3、計算：（同粗蛋白）
附試劑配制：    1）6%硫酸銅：稱取6g硫酸銅溶于100ml水中。
                2）1%氯化鋇：稱1g氯化鋇溶于100ml水中。

最近接手化驗室工作,我就按照上述過程操作,  過濾倒不是很慢,但就是消煮后發(fā)現全部結晶了,可能是自己用硫酸太少或催化劑加多了,  第一次做是以失敗告終, 檢測結果為0,凱氏瓶還燒爆一個:P

zxm

應該是用硫酸太少，至少要用20ML以上

tony2005428

1、原理
      硫酸銅在堿性溶液中，可將蛋白質沉淀，且不溶于熱水過濾和洗滌后，可將純蛋白質和非蛋白質含蛋物分離，再用凱氏定蛋法測定沉淀中的蛋白質含量。
2、儀器設備
      （1）燒杯：200ml。
      （2）定性濾紙。
      （3）其他設備與粗蛋白質測定法的相同。
3、試劑及配制
      （1）100g/L硫酸銅溶液：分析純硫酸銅（CuSO4·5H2O）10g溶于100mL蒸餾水中。
      （2）25g/L氫氧化鈉溶液：將2.5g分析純氫氧化鈉溶于100mL蒸餾水中。
            （3）10g/L氯化鋇溶液：1g氯化鋇（BaCl·H2O）溶于100mL蒸餾水中。
            （4）2moL/鹽酸溶液。
            （5）其他試劑預一般粗蛋白測定法的相同。
4、測定步驟
               準確稱取試樣1g左右（精確到0.0001g），置于200mL燒杯中，加50mL蒸餾水，加熱至沸，加入20mL硫酸銅溶液，20mL氫氧化鈉溶液（加入以上兩種溶液多要緩慢，且要邊加入邊攪拌），用玻璃棒充分攪拌，放置1h以上，用傾斜過濾（用定型濾紙），然活后用60~80℃熱蒸餾水洗滌沉淀5~6次，用氯化鋇溶液5滴和鹽酸溶液1滴檢查濾液，直至不生成白色沉淀為止。將沉淀和濾紙放在65℃烘箱干燥2h，然后全部轉移到凱氏燒瓶中，消化后進行定蛋測定。
5、結果計算
       同粗蛋白測定。

粗蛋白

我們所用的硫酸銅和氫氧化鈉的濃度不一樣. 濃度高了過濾很慢,所以將濃度都降了一半.

tony2005428

#9
濃度不影響過濾吧

#1
1、傾斜法過濾：是否就是加濾紙的V型漏斗過濾呢？？具體的我也不是很清楚，我們就是這樣操作的。
2、加入硫酸銅和氫氧化鈉攪拌后應該是什么顏色？
原料不同顏色有所差異，不過顏色好像不影響真蛋白的測定。
3、過濾時有的過濾特別慢？
你是否加入硫酸銅和氫氧化鈉后直接過濾呢？？要用玻璃棒充分攪拌，放置1h以上，后再過濾，此時濾液不混濁，有上清液；若直接過濾時溶液混濁，成糊狀，非常慢。