蛋白指標檢測遇到的幾個問題!(急盼回復,43樓又有新問題)

徐徐0

最近用凱氏定氮法測定飼料粗蛋白,每次出的結(jié)果都與實際的數(shù)字相差好大
我找了一下原因,個人認為可能產(chǎn)生結(jié)果誤差的在這幾方面:
指示劑:按國標的方法配制了一份(溴鉀酚綠與甲基紅3:1體積混合),按照學校培訓教材上面的也配制了一份(0.1%的甲基紅乙醇溶液與0.5%溴鉀酚綠乙醇溶液等體積混合)后面附上標定標準溶液濃度時加入指示劑的顏色
0.05mol/LHCL標準溶液:4.5mlHCL溶于1000ml水中
還有就是標定濃度時需要用的基準物:無水碳酸鈉(我用的是分析純級的)
在凱氏燒瓶中加入試樣的時候,部分試樣沾附在瓶壁,殘留于紙上!

我大概的查了能出錯的幾個地方,指示劑做了2種,雖然顯示的顏色不一樣,但標定的結(jié)果,得到的數(shù)字是一樣的!
標準溶液也重新做了一份,但最終檢測的結(jié)果,得出的蛋白數(shù)字跟實際還是相差太大!(測了幾個樣,棉粕只得到32個蛋白,實際是40左右;菜粕得到32左右,實際在36左右)

最近剛接觸檢測這事,碰上的問題還不懂怎么解決,不知道我的描述是否清楚,只盼望搞同行的能幫忙疏通一下思路!
小弟我在此先謝過各位啦!

牛郎阿飛

樓主很會思考，繼續(xù)努力

徐徐0

多謝沙發(fā)的支持,頂上去,繼續(xù)尋求幫助!

五豐

標定濃度時需要用的基準物:無水碳酸鈉（注意：必須得優(yōu)級純或基準級！）做標定用的無水碳酸鈉一定要在270~300°C的電熱箱里烘干至恒重，再有：一定要做3個以上的平行試樣，而且注意在電爐上加熱時的次數(shù)（一般是兩到三次，必須得把二氧化碳趕跑干凈?。┯嬎憬Y(jié)果的時候一定要看看幾份結(jié)果的相對平均偏差是不是在0.1%范圍內(nèi)，如果不是就得重做。

徐徐0

首先非常感謝五豐的回答,但我又有了幾個問題
如果是從市場上剛買回來的那種無水碳酸鈉,還需要烘干這步驟么?
還有就是,我用的是蒸餾水,電爐加熱的次數(shù)是否沒必要那么多次啦?

469013250

無水碳酸鈉需要烘干的。

五豐

無論是什么時候買的無水碳酸鈉都必須經(jīng)過烘干這一步驟；實驗用水一般都是指蒸餾水，電爐加熱的次數(shù)則要依據(jù)你滴定時溶液恰好由綠色變?yōu)榘底仙?，再放到電爐上加熱煮沸兩分鐘，這時溶液不變色（不變回原來的綠色）才可以。

五豐

說明一下，我一般都要進行兩次加熱。一次加熱和三次加熱的現(xiàn)象也有過，但是不多，4次以上的就沒有出現(xiàn)過。

五豐

化學純、分析純與基準試劑、優(yōu)級純差別很大的。所以你標定溶液濃度一定要用基準試劑或優(yōu)級純。

徐徐0

非常感謝五豐的作答,又學到了不少!
暗紫跟暗紅,哪個更準確些?
最主要的問題,實驗結(jié)果跟實際偏差太大,會是在哪些地方出差錯呢?
按說,AR的無水碳酸鈉和PT的只在標定HCL濃度時用到,就"C"這一個數(shù)據(jù)而已(我用AR級的標定0.05mol/l的HCL3份平行樣結(jié)果在0.05683左右,這個值是否偏高?),不可能影響到那么多的蛋白數(shù)字吧!(有時候相差10多個蛋白的)